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Quantitative Screening of Secretory Protein Genes in <i>Candidatus</i>Liberibacter asiaticus

American Journal of Plant Sciences 2018年第12期9卷 2408-2419页

作者： Binbin Li Yi Yang Zhiwen Luo Zhixin Liu Naitong Yu Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Haikou China Institute of Tropical Agriculture and Forestry Hainan University Haikou China Environment and Plant Protection Institute Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Haikou China Tropical Fruit Trees Institute Hainan Academy of Agricultural Sciences Haikou China

Huanglongbing (HLB) is the most destructive disease of citrus worldwide. The disease is caused by Candidatus Liberibacter spp., which is vectored by the psyllids Diaphorina citri Kuwayama and Trioza erytreae. Secretory proteins are important in bacterial pathogenesis and structure components. Some of them are expressed at a high level. To obtain the highly-expressed secretory protein genes (SPGs) for antiserum preparation, six candidate SPGs were chosen from Candidatus Liberibacter asiaticus by bioinformatic analysis and were further tested by qPCR and RT-qPCR methods, respectively. The result showed that two SPGs, 408 and pap (both are Flp pilus assembly protein genes), have relative high amounts of DNA and RNA transcripts of early HLB-infected green orange leaves. The 408 and pap genes were further constructed into the plant expression vector pCAMBIA1300 (GV1300: GFP) and expressed in tobacco leaf epidermal cells for subcellular localization analysis. The transient expression results indicated that the 408 protein is located in the nuclei and cytoplasm of tobacco leaf cells. However, the pap protein is located in the cytoplasm of tobacco leaf cells, which may help the pathogen invade into plant cells. This research is an important foundation for the preparation of the antiserum against Candidatus Liberibacter asiaticus and the early detection of HLB disease.

关键词： Candidatus Liberibacter asiaticus Secretory Protein DNA Amount RNA Transcription Subcellular Localization

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利用Gateway技术筛选Candidatus Liberibacter asiaticus致病相关基因研究

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植物病理学报 2017年第6期47卷 816-823页

作者：钱艳杰刘敏欧阳立力王世玲洪霓王国平丁芳华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病虫害检测与安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学国家果树脱毒种质资源室内保存中心武汉430070

柑橘黄龙病是危害全球柑橘产业健康发展的最严重病害之一,病原为韧皮部限制性细菌,我国的柑橘黄龙病由亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CaLas)引起。由于该病原菌难以获得离体纯培养,从而限制了其致病分子机制的研究。本试验... 详细信息

柑橘黄龙病是危害全球柑橘产业健康发展的最严重病害之一,病原为韧皮部限制性细菌,我国的柑橘黄龙病由亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CaLas)引起。由于该病原菌难以获得离体纯培养,从而限制了其致病分子机制的研究。本试验根据已经报道的植物病原细菌致病相关基因特点,从黄龙病菌亚洲种Psy62菌株全基因组序列(Psy62:NC_012985.1)中选取3个假定致病相关基因,分别标记为PalCa _(Las)、MotCa _(Las)和HlyCa _(Las),利用Gateway技术的同源重组原理,将3个基因通过BP反应和LR反应,分别构建到植物表达载体psk103中,接种本生烟(Nicotiana benthamiana)后,通过瞬时表达筛选可诱导_(N.)benthamiana产生过敏性坏死反应的功能基因。经过PCR克隆和测序验证,PalCa _(Las),、MotCa _(Las)和HlyCa _(Las)基因均成功构建至植物表达载体上。本生烟瞬时表达试验证实:当含有目的基因的根癌农杆菌菌悬液OD600值介于_(0.)6_(~0.)^(8,)测试本生烟苗龄6周左右,PalCa _(Las)基因在接种4 dpi时可引发明显的HR(hypersensitive reaction)反应,12 dpi时HR反应更为强烈。同等条件下MotCa _(Las)和HlyCa _(Las)均不能引发类似反应。由此证实,Gateway技术可成功用于筛选CaLas致病相关基因,PalCa _(Las)基因可能在CaLas致病过程中发挥重要作用。该报道为国内首次采用Gateway技术进行CaLas致病相关基因功能研究,为后续开展CaLas病原寄主互作分子机制研究奠定了基础。

关键词：黄龙病菌 Candidams Liberibacter asiaticus 致病相关基因 Gateway技术

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中国不同地区亚洲韧皮杆菌遗传多样性分析

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植物病理学报 2009年第6期39卷 593-599页

作者：王中康周彬彬田圣超石小刚贤家旭陈世伟殷幼平重庆大学生物工程学院重庆市基因功能与调控重点实验室重庆400030 广西利添生物科技发展公司北海536128

柑桔黄龙病是最严重的柑桔病害之一,现已威胁世界柑桔产业。已被证实在中国南部该病害通过嫁接和木虱传播。因此黄龙病的流行病学研究就显得尤为重要。本研究中,基于外膜蛋白(omp)基因的PCR-RFLP的方法被用来研究中国南部各柑桔主产区... 详细信息

柑桔黄龙病是最严重的柑桔病害之一,现已威胁世界柑桔产业。已被证实在中国南部该病害通过嫁接和木虱传播。因此黄龙病的流行病学研究就显得尤为重要。本研究中,基于外膜蛋白(omp)基因的PCR-RFLP的方法被用来研究中国南部各柑桔主产区的亚洲韧皮部杆菌的遗传多样性。研究采用不同的限制性内切酶消化各地区的亚洲韧皮部杆菌的omp基因产生了不同的RFLP指纹图谱,并对各地亚洲韧皮部杆菌的omp基因进行克隆测序然后构建系统发育树。结果显示:中国不同地理区域的亚洲韧皮部杆菌具有一定的遗传多样性,即便在某一特定的地区也有一定的差异。序列分析显示中国地区的亚洲韧皮部杆菌有很高的同源性。这些结果对揭示中国柑桔黄龙病的流行病学及制定科学有效的防治策略具有一定的指导意义。

关键词：黄龙病 Candidatus Liberibacter asiaticus RFLP 遗传多样性系统进化分析

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环境因子对胭脂鱼精子活力影响的研究

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淡水渔业 2009年第4期39卷 22-28页

作者：李飞万全安徽农业大学动物科技学院合肥230036

通过观察精子的快速运动时间和寿命,研究了6种环境因子对胭脂鱼（Myxocyprinus asiaticus Bleeker）精子活力的影响。结果表明：胭脂鱼精子对酸碱的耐受能力较强,在pH值为4-10时,精子均可以快速运动,且在pH值为8时精子的活力最强。不同... 详细信息

通过观察精子的快速运动时间和寿命,研究了6种环境因子对胭脂鱼（Myxocyprinus asiaticus Bleeker）精子活力的影响。结果表明：胭脂鱼精子对酸碱的耐受能力较强,在pH值为4-10时,精子均可以快速运动,且在pH值为8时精子的活力最强。不同浓度的NaCl、KCl、葡萄糖、CaCl2、MaCl2溶液对胭脂鱼精子运动的诱导效果不同。5种溶液最适于胭脂鱼精子运动的浓度分别为：NaCl 102 mmol/L;KCl 75 mmol/L;葡萄糖100 mmol/L;CaCl275.6 mmol/L;MgCl275.6 mmol/L。且在5种溶液低浓度时精子活力较强,超过一定浓度精子的运动开始被抑制。

关键词：胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus Bleeker) 环境因子精子活力影响

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Using an image segmentation and support vector machine method for identifying two locust species and instars

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Journal of Integrative Agriculture 2020年第5期19卷 1301-1313页

作者： Shuhan LU YE Si-jing Department of Computer and Information Science College of Art and ScienceOhio State UniversityColumbusOH 43210USA State Key Laboratory of Earth Surface Processes and Resource Ecology Beijing Normal UniversityBeijing 100875P.R.China Center for Geodata and Analysis Beijing Normal UniversityBeijing 100875P.R.China

Locusts are agricultural pests around the world. To cognize how locust distribution density and community structure are related to the hydrothermal and vegetation growth conditions of their habitats and thereby providing rapid and accurate warning of locust invasions, it is important to develop efficient and accurate techniques for acquiring locust information. In this paper, by analyzing the differences between the morphological features of Locusta migratoria manilensis and Oedaleus decorus asiaticus, we proposed a semi-automatic locust species and instar information detection model based on locust image segmentation, locust feature variable extraction and support vector machine(SVM) classification. And we subsequently examined its applicability and accuracy based on sample image data acquired in the field. Locust image segmentation experiment showed that the proposed GrabCut-based interactive segmentation method can be used to rapidly extract images of various locust body parts and exhibits excellent operability. In a locust feature variable extraction experiment, the textural, color and morphological features of various locust body parts were calculated. Based on the results, eight feature variables were selected to identify locust species and instars using outlier detection, variable function calculation and principal component analysis. An SVM-based locust classification experiment achieved a semi-automatic detection accuracy of 96.16% when a polynomial kernel function with a penalty factor parameter c of 2 040 and a gamma parameter g of 0.5 was used. The proposed detection model exhibits advantages such as high applicability and accuracy when it is used to identify locust instars of L. migratoria manilensis and O. decorus asiaticus, and it can also be used to identify other species of locusts.

关键词： locust identification machine learning support vector machine L.migratoria manilensis O.decorus asiaticus

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砂糖橘红鼻子果与韧皮部杆菌侵染相关性研究

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热带作物学报 2011年第4期32卷 738-742页

作者：张培关磊刘蕤蒲雪莲邓晓玲华南农业大学资源环境学院植物病理系广东广州510642

利用TaqMan实时荧光定量PCR技术对广东清远、四会、云浮地区砂糖橘90个红鼻子果样品进行检测。结果表明,韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)阳性检出率高达100%。分别对病树上无症状果实、斑驳叶片以及黄化叶片样品进行实... 详细信息

利用TaqMan实时荧光定量PCR技术对广东清远、四会、云浮地区砂糖橘90个红鼻子果样品进行检测。结果表明,韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)阳性检出率高达100%。分别对病树上无症状果实、斑驳叶片以及黄化叶片样品进行实时荧光定量PCR检测,阳性检出率分别为27.3%、91.8%、52.0%,因此,可将砂糖橘红鼻子果作为田间诊断黄龙病的典型症状。红鼻子果的果柄和果轴均可检测到病原,且果柄部位病原浓度明显高于果轴。对红鼻子果果柄韧皮部扫描电镜观察,发现果柄筛管中有大量淀粉粒沉积,且韧皮部筛管明显缢缩,阻碍了植株体内糖分和有机质向果实运输。

关键词：砂糖橘黄龙病红鼻子果 Candidatus Liberibacter asiaticus TaqMan实时荧光定量PCR

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Experimental Study on the Disease-preventing Model of Culturing Chinese Sucker( Myxocyprinus asiatius) in River Crab( Eriocheir sinensis) Pond

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Agricultural Biotechnology 2019年第1期8卷 112-115,120页

作者： Jiansheng YE Suzhen ZHAO Sheng YUAN Meijian LIU Jiamei WANG Jianhua DAI Jiangsu Agri-animal Husbandry Veterinary College

From 2015 to 2016,the hepatopancreatic lesion syndrome had a higher mortality rate,which caused great economic losses to farmers. In order to study the high-efficiency disease-preventing crab pond intercropping mode,an experiment was successfully conducted to intercrop Chinese sucker( Myxocyprinus asiaticus) in a crab pond in 2017. We optimized the traditional stocking mode,and mainly cultured river crabs when intercropping Chinese suckers. Meanwhile,the cultivation environment was strengthened,and the test pond was not affected by disease throughout the year. The results showed that the production benefits were river crab 115 620 yuan/hm^2,Chinese sucker 44 280 yuan/hm^2,and silver carp and bighead carp 5 418 yuan/hm^2,with a total output of 165 318 yuan/hm`2,and the output-input ratio was 1∶ 1. 72. The Chinese sucker-intercropping river crab culture mode promoted the improvement of pond culture environment,effectively controlled the occurrence of hepatopancreatic lesion syndrome,and significantly improved the economic benefits of crab pond culture.

关键词： Eriocheir sinensis Myxocyprinus asiaticus Disease prevention model Experimental study

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