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Cloning, Expression of apxl gene of Actinobacillus pleuropneumoniae and Development of ELISA

Agricultural Sciences in China 2003年第5期2卷 578-582页

作者： LIU Jian-jie, HE Qi-gai, CHEN Huan-chun, WU Bin, XU Xiao-juan, LIU Jun-fa, TANG Xian-chun and BEI Wei-chengCollege of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070 , P.R. China

Based on the published nucleotide sequence of the apxica of Actinobacillus pleuropneumoniae in Genbank(S4074), a pair of primers were designed. A 3 640 bp(4 687 - 8 326 bp)gene fragment was amplified by PCR from the isolated strain of A. pleuropneumoniae serovar 1. Then, it was cloned into pMD18-T, identified by both restriction endonuclease and sequence analysis, and inserted into pET-28a expression vector to yield the expression plasmid. SDS-PAGE result indicated expression of apxica in BL21 (DE3), Western blot analysis showed the protein's immunogenicity. Using the expressed protein, ELISA was established to detect serum antibody against ApxI. The feature of ELISA to detect highly virulent A. pleuropneumoniae strains infection was proved by primary clinical application.

关键词： Actinobacillus pleuropneumoniae apxica gene Cloning Prokaryotic expression ELISA

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