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Adeno-associated virus mediated apoa-i and apoa-iMilano expression in skeletal muscular cells

Journal of Nanjing Medical University 2005年第5期19卷 236-240页

作者： Ming Gui Zhiguang Wang Li Jiang Leming Fan Kejiang Cao Qi Chen Jun Huang Department of Cardiovascular Medicine the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University Nanjing 210029 Atherosclerosis Research Center Nanjing Medical University Nanjing 210029 China

Objective： To construct recombinant adeno-associated virus type 2（rAAV2） vectors encoding human apoa-i/apoa-lMilano protein, and explore an effective and safe method to prevent and treat the atherosclerotic diseases. Methods： Human apoa-i cDNA with a His-tag in the upward stream of cDNA sequence were obtained with RT-PCR and PCR, and human apoa-iMilano cDNA was prepared by QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit. After extracted rAAV vectors with a most economic and convenient method, the particle numbers of rAAV vectors were measured by Dot-blot, and the purity was assayed by SOS-Page. The expression efficiency of the apoa-i or apoa-iMilano in C2C12 infected by rAAV vectors were detected by ELiSA method. Results： apoa-i cDNA was gained by RT-PCR and a His-tag was added in the upward stream of apoa-i cDNA successfully. apoa-i cDNA was mutanted to apoa-iMilano cDNA successfully by QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit. The both titres of the rAAV vectors of apoa-i and apoa-iMilano were about 2×10^14/L, and the result of SOS-Page showed that the purity of the rAAV vectors was satisfied. The expression level of apoa-i was （0.39±0.04） μg/ml and the apoa-iMilano was （0.31±0.03） μ/ml in the DMEM culture medium at the first 24h after transfection. Conclusion： The success of the rAAV vectors construction, purification and the expression of apoa-i and apoa-iMilano in C2C12 cells mediated by these vectors, makes possible to inject rAAVA and rAAVAM vectors into mice muscle, and rises a new hope on finding a new way to prevent and treat atherosclerotic diseases and cardiovascular disease.

关键词： atherosclerosis apoa-i apoa-iMilano adeno-associated viruse gene transfer

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自拟黄芪桂枝五物方在AMi患者PCi介入术后再灌注损伤中的应用及对内皮功能、血apoa-i、D-D和NTpro-BNP/BNP水平的影响

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四川中医 2019年第2期37卷 79-82页

作者：闫行西安市中医医院陕西西安710021

目的:观察自拟黄芪桂枝五物方在急性心肌梗死(AMi)患者急诊经皮冠状动脉介入术(PCi)后再灌注损伤中的应用及对心功能、内皮功能的影响。方法:将92例AMi经PCi术治疗后发生再灌注损伤患者用计算机随机数字法分为研究组和对照组各46例。对... 详细信息

目的:观察自拟黄芪桂枝五物方在急性心肌梗死(AMi)患者急诊经皮冠状动脉介入术(PCi)后再灌注损伤中的应用及对心功能、内皮功能的影响。方法:将92例AMi经PCi术治疗后发生再灌注损伤患者用计算机随机数字法分为研究组和对照组各46例。对照组患者予以常规西医治疗,研究组患者在此基础上加用自拟黄芪桂枝五物方。比较两组患者疗效差异;观察治疗前、治疗12周后中医证候积分、心功能(左室射血分数、室壁运动计分指数)、血管内皮功能[内皮素-1 (ET-1)、一氧化氮(NO)、血管性血友病因子(vWF)]、预后指标[血浆载脂蛋白A-i (apoa-i)、D二聚体(D-D)和氨基末端B型脑钠肽前体/脑钠肽(NTpro-BNP/BNP)]水平变化情况。结果:研究组患者治疗总有效率高于对照组(Pi水平均较治疗前升高,且研究组高于对照组(Pi经PCi术治疗后发生再灌注损伤患者经自拟黄芪桂枝五物方治疗后临床症状明显改善,心功能和血管内皮功能有所提高,且心血管损伤较小,预后良好。

关键词：自拟黄芪桂枝五物方 AMi PCi apoa-i NTpro-BNP

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浅析冠心病患者血浆和HDL标本中apoa-i及SAA的组分变化

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医学检验与临床 2016年第5期27卷 73-74页

作者：曾海莲刘发河郑小江茂名市人民医院检验科广东茂名525000

冠心病（CHD）是一种冠状动脉血管出现动脉粥样硬化病变，并因此导致血管发生阻塞或者狭窄，从而引起心肌缺氧、缺血等一系列症状的心脏病。在冠心病高危因素中，血脂异常是最主要的危险因素，大量临床研究证实，在CHD发生发展中，高密... 详细信息

冠心病（CHD）是一种冠状动脉血管出现动脉粥样硬化病变，并因此导致血管发生阻塞或者狭窄，从而引起心肌缺氧、缺血等一系列症状的心脏病。在冠心病高危因素中，血脂异常是最主要的危险因素，大量临床研究证实，在CHD发生发展中，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平有着密切关系，并呈现为负相关。但近几年关于HDL水平表达对心血管保护的研究逐渐深入，也有学者认为其并不具备心血管保护效果，为此，对HDL进行重新认识非常有必要。本研究拟采集冠心病患者血浆，对其HDL中蛋白组分与CHD之间的相关性进行研究。有关情况报道如下。

关键词： HDL-C 冠心病患者蛋白组分 apoa-i 血浆 SAA 高密度脂蛋白胆固醇动脉粥样硬化病变

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血清apoa-i、CD40L、VCAM-1水平与老年SP患者SHG及预后相关性

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分子诊断与治疗杂志 2021年第4期13卷 651-654页

作者：沈晶晶刘建华曹亮河北北方学院附属第一医院呼吸与危重症监护病房河北张家口075000

目的研究血清载脂蛋白A-i(apoa-i)、肿瘤坏死因子相关激活蛋白(CD40L)、血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)水平与老年重症肺炎(SP)患者应激性高血糖(SHG)及预后相关性。方法选取本院2018年1月至2020年9月收治的97例SP患者(重症组)和102例普通... 详细信息

目的研究血清载脂蛋白A-i(apoa-i)、肿瘤坏死因子相关激活蛋白(CD40L)、血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)水平与老年重症肺炎(SP)患者应激性高血糖(SHG)及预后相关性。方法选取本院2018年1月至2020年9月收治的97例SP患者(重症组)和102例普通肺炎患者(普通组)进行研究,另选取同期来本院体检的104例健康人作为对照组。根据是否合并SHG将SP患者分为合并组(n=55)与未合并组(n=42)。根据SP患者28 d生存情况将预后分为存活组(n=67)和死亡组(n=30)。检测各组患者血清apoa-i、CD40L、VCAM-1水平,并采用Logistic回归模型分析老年SP患者预后影响因素。结果重症组患者血清CD40L、VCAM-1水平明显高于普通组和对照组,血清apoa-i水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(Papoa-i显著低于未合并组,血清CD40L、VCAM-1水平和APACHEⅡ评分显著高于未合并组,差异均有统计学意义(Papoa-i水平与APACHEⅡ评分呈负相关(P0.05),但存活组患者APACHEⅡ评分、血清CD40L、VCAM-1水平均显著高于死亡组,血清apoa-i显著低于死亡组,差异均有统计学意义(Papoa-i、CD40L、VCAM-1均是影响SP患者预后的独立影响因素(Papoa-i、CD40L和VCAM-1在SP患者体内表达异常,且与患者疾病严重程度、SHG的发生密切相关,可作为临床评估SP患者预后的重要指标。

关键词： apoa-i CD40L VCAM-1 应激性高血糖

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复方调脂合剂对高脂血症大鼠血清apoa—i、appB100的影响

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中华医药学杂志 2003年第8期2卷 6-8页

作者：马全庆河北省邯郸市峰峰矿务局第二医院056201

目的观察复方调脂合剂对高脂血症大鼠血清apoa—i、apoB100的影响。方法采用喂食高脂饲料方法复制大鼠高脂血症模型，以脂必妥为对照，检测各组大鼠血清apoa—i、apoB100的含量。结果复方调脂合剂可显著升高模型大鼠血清apoa—i含量... 详细信息

目的观察复方调脂合剂对高脂血症大鼠血清apoa—i、apoB100的影响。方法采用喂食高脂饲料方法复制大鼠高脂血症模型，以脂必妥为对照，检测各组大鼠血清apoa—i、apoB100的含量。结果复方调脂合剂可显著升高模型大鼠血清apoa—i含量，降低apoB100含量。结论复方调脂合剂通过提高apoa—i含量，增强LCAT和LPL的活性表达而调节血脂，这可能是复方调脂合剂治疗高脂血症的主要机制。

关键词：复方调脂合剂高脂血症大鼠血清 apoa-i appB100 中药

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含apoa-i蛋白脂质体的初步研究(简报)

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中国医学科学院学报 1985年第5期 370-370页

作者：李志高郝杆林王克勤中国医学科学院基础医学研究所

王克勤等曾发现鸭血清含有丰富的HDL。并以超速离心分离提纯了HDL,纯化其中apoa-i,然后用apoa-i、磷脂(合成的L-α-phosphatidyl choline Dimyristoyl),胆固醇和3H标记胆固醇,用胆酸盐透析法合成了蛋白脂质体。该apoa-i和脂质形成的复... 详细信息

王克勤等曾发现鸭血清含有丰富的HDL。并以超速离心分离提纯了HDL,纯化其中apoa-i,然后用apoa-i、磷脂(合成的L-α-phosphatidyl choline Dimyristoyl),胆固醇和3H标记胆固醇,用胆酸盐透析法合成了蛋白脂质体。该apoa-i和脂质形成的复合物用Sepharose 4B凝胶过滤柱层析分离、获单一峰、鉴定峰顶部的蛋白脂质体的化学组成,发现所含apoa-i,胆固醇和磷脂的克分子浓度比为1:4:63。用磷钨酸钠负染法在电镜下观察其形态为圆盘状,类似新生HDL的结构。以该蛋

关键词：脂质体化学组成蛋白脂质胆固醇化学成分胆甾醇 apoa-i 蛋白

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心肌梗死幸存者血浆apoa-i、apoB的变化

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国际检验医学杂志 1999年第4期 185-185页

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Effect of Apolipoprotein A-i on ATP Binding Cassette Transporter A1 Degradation and Cholesterol Efflux in THP-1 Macrophage-derived Foam Cells

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2004年第3期36卷 218-226页

作者： Chao-Ke TANG1,2, Guo-Hua TANG1, Guang-Hui Yi1, Zuo WANG1, Lu-Shan LiU1, Shuang WAN1, Zhong-Hua YUAN1, Xiu-Sheng HE1, Jun-Hao YANG1, Chang-Geng RUAN1, and Yong-Zong YANG1* 1institute of Cardiovascular Disease of Nanhua University, Hengyang 421001, China 2Xiangya Medical School, Central Southern University, Changsha 410078, China institute of Cardiovascular Disease of Nanhua University Hengyang 421001 China Xiangya Medical School Central Southern University Changsha 410078 China

Cholesterol-loaded macrophage foam cells are a central componentof atherosclerotic lesions. ATP binding cassette transporter A1 (ABCA1), the defective molecule inTangier disease, mediates the efflux of phospholipid and cholesterolfrom cells to apolipoprotein A-i (apoa-i), reversing foam cell formation. This study investigated the effect of apoa-i on ABCA1 degradation and cholesterol efflux in THP-1 macrophage- derived foam cells. After exposure of the cultured THP-1 macrophage-derived foam cells to apoa-i for different time, cholesterol efflux, ABCA1 mRNA and protein levels were determined by FJ-2107P type liquid scintillator, RT-PCR and Western blot, respectively. The mean ABCA1 fluorescence intensity on THP-1 macrophage-derived foam cells was detected by flow cytometry. Results showed that apoa-i markedly increased ABCA1-mediated cholesterol efflux from THP-1 macrophage-derived foam cells. This was accompanied by an increase in the content of ABCA1. apoa-i did not alter ABCA1 mRNA abundance. Significantly, thiol protease inhibitors increased the level of ABCA1 protein and slowed its decay in THP-1 macrophage-derived foam cells, whereas none of the proteosome-specific inhibitor lactacystin, other protease inhibitors, or the lysosomal inhibitor NH4Cl showed such effects. The apoa-i-mediated cellular cholesterol efflux was enhanced by thiol protease inhibitors. Our results suggested that thiol protease inhibitors mightprovide an alternative way to upregulate ABCA1 protein. Thisstrategy is especially appealing since it may mimic the stabilizingeffect of the natural ligands apoa-i.

关键词： ATP binding cassette transporter A1 apoa-i flow cytometry cholesterol lipoproteins

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用Monarch自动生化分析仪测定血清中apoa-Ⅰ及B

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临床检验杂志 1990年第4期8卷 186-187页

作者：仇世宏蒋仁礼郭素琴江苏省人民医院生化科南京210029

apoa-Ⅰ及B 被视为心血管病危险因素的重要指标.apoa-Ⅰ及B 的测定方法很多,我们参考了国内外有关文献^(〔1～3〕),根据免疫透射比浊法的原理,建立了用于Monarch 离心式自动生化分析仪的方法.该法为二点法。

关键词：心血管病血清 apoa-i 诊断

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老年男性冠心病和高血压病病人中载脂蛋白apo A-i与apo B-100的调查

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沈阳部队医药 1994年第2期7卷 127-128页

作者：胡小玲鲍卫东宋凤茹李桂华冯丽雅佟铭沈阳军区总医院心血管内科沈阳军区总医院检验科沈阳军区总医院

本文对378名老年男性进行了apo A-Ⅰ与apo B-100的调查。结果表明,健康老年男性apo A-Ⅰ为1.48±0.3g/*** B-100 0.97±0.28g/L;冠心病病人apo B-100增高(P<0.01);高血压病人apo A-Ⅰ降低(P<0.05),apo B-100增高(P<0.01)。这提示apo的变化可能是高血压病人易罹患冠心病的原因。apo B-100与胆固醇呈正相关(r=0.22.P<0.05),apo A-Ⅰ与纤维蛋白原呈负相关(r=-0.20.P<0.05),推测高apo A-Ⅰ与低apo B-100是冠心病的保护因素。

关键词：老年人男性冠心病高血压载脂蛋白 apoa-i apoB-100

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