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Construction of a Food-Grade Expression Vector Based on pMG36e by Using an α-Galactosidase gene as a Selectable Marker

引用

Journal of Integrative Agriculture 2014年第8期13卷 1802-1808页

作者： GU Xin-xi TAN Jian-xin TIAN Hong-tao ZHANG Yu-lan LUO Yun-bo GUO Xing-hua College of Food Science and Technology Agricultural University of Hebei College of F ood Science and Nutritional Engineering China Agricultural University Institute of Microbiology Chinese Academy of Sciences

Construction of a food-grade expression vector for application to lactic acid bacteria（LAB） is of importance for dairy fermentation system. An α-galactosidase（aga） gene encoding an enzyme degrading melibiose was amplified by PCR from the plasmid p RAF800 of Lactococcus lactis NZ9000. The aga gene was introduced into pMG36 e to substitute the p rimary antibiotic selectable marker of pMG36 e, resulting in construction of a new food-grade expression vector pMG36-aga. To testify the expression efficiency of exogenous gene in pMG36-aga, a 1.5 kb long α-amylase（amy） gene from Ba cillus li cheniformis was cloned by PCR and introduced into the plasmid pMG36-aga. The resultant plasimd pMG36-aga-amy was transformed into L. lactis ML23 by electroporation. The positive clones were selected with the medium containing melibiose as the sole carbon source. Th e selection efficiency of aga was 8.71×103 CFU with a standard deviation of 9.1×102 CFU ？g-1 DNA of pMG36-aga. Furthermore, the SDS-PAGE analysis showed that the pMG36-aga-amy expressed a 56.4 kDa protein which was the same as the putati ve molecular weight of α-amylase. The starch plate assay also indicated that L. lactis ML23 displayed high activity of α-amylase by expressing of amy gene of pMG36-aga-amy.

关键词： food-grade expression vector Lactococcus lactis α-galactosidase gene amylase gene pMG36e

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