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Candida amazonensis FLP/FRT基因敲除系统的构建及初步验证

微生物学报 2017年第12期57卷 1839-1852页

作者：高芝张梁李由然顾正华丁重阳石贵阳江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

【目的】构建一个适用于Candida amazonensis抗性标记可重复使用的FLP/FRT基因敲除系统,并通过敲除C.amazonensis的丙酮酸脱羧酶基因(Pyruvate decarboxylase,PDC)对该系统进行初步验证。【方法】以gfpm(绿色荧光蛋白基因)为报告基因,... 详细信息

【目的】构建一个适用于Candida amazonensis抗性标记可重复使用的FLP/FRT基因敲除系统,并通过敲除C.amazonensis的丙酮酸脱羧酶基因(Pyruvate decarboxylase,PDC)对该系统进行初步验证。【方法】以gfpm(绿色荧光蛋白基因)为报告基因,通过添加相应诱导剂评估Spathaspora passalidarum来源启动子(SpXYLp、SpMAL6p、SpMAL1p、SpGAL1p)和Saccharomyces cerevisiae来源Sc GAL1p启动子在C.amazonensis中的诱导调控性能。选择严格诱导型启动子调控FLP重组酶的表达,并在FLP表达盒和潮霉素(Hygromycin B)抗性标记基因(hphm)两端添加同向重复的FRT位点,以PDC基因作为靶基因构建敲除盒PRFg HRP,转化宿主菌C.amazonensis CBS 12363,筛选得到阳性转化子后,通过添加诱导剂,表达FLP重组酶,实现FRT位点间片段切除。【结果】诱导调控实验表明启动子SpGAL1p(受半乳糖诱导)和SpMAL1p(受麦芽糖诱导)是适用于C.amazonensis的严格诱导型启动子。以SpGAL1p调控FLP基因表达,构建的敲除盒PRFg HRP成功转化宿主菌,获得阳性转化子C.amazonensis PDC01,通过添加半乳糖诱导,成功切除基因组中FLP表达盒和抗性标记盒,获得突变株C.amazonensis PDC02。【结论】首次建立了一个适用于C.amazonensis抗性标记可重复使用的FLP/FRT基因敲除系统,并利用该系统成功敲除了C.amazonensis内的PDC基因,为进一步利用代谢工程改造C.amazonensis酵母奠定了良好基础。

关键词： Candida amazonensis FLP/FRT 诱导型启动子基因敲除

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Antileishmanial assessment of leaf extracts from Pluchea carolinensis,Pluchea odorata and Pluchea rosea

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Asian Pacific Journal of Tropical Medicine 2011年第10期4卷 836-840页

作者： Marley Garcia Wilmer H Perera Ramon Scull Lianet Monzote Parasitology Department Institute of Medicine Tropical "Pedro Kourl"Havana CityCuba Institute of Ecology and Systematic Havana CityCuba Institute of Pharmacy and Food Havana CityCuba Parasitology Department Institute of Medicine Tropical "Pedro Kouri"Havana CityCuba

Objective:To evaluate the antileishmanial activity of different extracts from three Cuban Pluchea species.Methods:In in vitro assays the IC50was calculated in the promastigotes and amastigotes forms as cytotoxicity in murine macrophages.In leishmaniasis cutanea experiment,mortality, weight loss,lesion size and burden parasite were measured.Results:Extracts evaluated showed inhibitive effect on growing of promastigote form;however,active extracts caused a high toxicity. Ethanol and n-hexane extracts demonstrated specific antileishmanial activity.Ethanol and n-hexane extracts from Pluchea carolinensis（P.carolinensis） caused similar inhibition against amastigote form.The intraperitoneal administration of the ethanol extract of P.carolinensis at 100 mg/kg prevented lesion development compared with control groups.Conclusions:The antileishmanial experiment suggests that ethanol extracts from P.carolinensis is the most promising.Further studies are still needed to evaluate the polential of this plant as a source of new antileishmanial agents.

关键词： Pluchea carolinensis Pluchea odorata Pluchea rosea Medicinal plants Leishmania amazonensis

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