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MicroRNA-153-5p在大鼠骨癌痛中的作用

MicroRNA-153-5p在大鼠骨癌痛中的作用

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作者：卫世有江苏大学

学位级别：硕士

癌症转移到骨所引起的骨癌痛(bone cancer pain,BCp)是癌症患者中重度疼痛的主要来源,是降低癌症患者生活质量的重要因素。现有的癌痛三阶梯疗法不能完全有效控制BCp,究其原因,其复杂的发生发展机制尚不十分清楚,故探明BCp的机制将为临... 详细信息

癌症转移到骨所引起的骨癌痛(bone cancer pain,BCp)是癌症患者中重度疼痛的主要来源,是降低癌症患者生活质量的重要因素。现有的癌痛三阶梯疗法不能完全有效控制BCp,究其原因,其复杂的发生发展机制尚不十分清楚,故探明BCp的机制将为临床治疗提供帮助。微RNA(microRNA,miRNA)是长约22nt,具有转录后调控功能的非编码RNA,其广泛参与机体的病理生理过程,且与疼痛具有相关性。其中miR-153在机体各器官广泛表达,能够抑制多种肿瘤的侵袭和迁移,参与氧化应激,控制炎症和信号通路传到等过程,但尚缺乏关于疼痛的研究。本研究将模拟临床BCp,建造、验证大鼠胫骨BCp模型,并探讨miR-153-5p在BCp中的作用。第一章建造BCp模型目的建造、验证大鼠胫骨BCp模型。方法取36只雌性清洁级SD大鼠随机分成3组:正常组(normal group,N组)n=12;骨癌痛模型组(BCp group,BCp组)n=12,向大鼠左胫骨骨髓腔接种10μl Walker 256乳腺癌细胞悬液;假手术组(sham group,sham组)n=12,同样方法接种相同体积热杀死细胞。并于0、1、3、6、9、12、15、18 d,进行疼痛行为学观测即行走痛评分(ambulatory score,AS)测定和大鼠患肢机械痛敏缩足阈值(paw withdrawal threshold,pWT)测定;并分别在造模后6、12、18 d,行X线摄片检查左胫骨结构改变情况。结果08 d,sham组与N组之间比较,AS及pWT差异均无统计学意义;BCp组在造模后08 d,AS从0±0分逐渐增加至3.46±0.31分,pWT从30.25±5.87g下降至3.33±1.01 g。造模后68 d BCp组的AS及pWT与sham组相比,差异有统计学意义(pp组大鼠,于造模后6 d出现骨密度降低,造模后12 d骨密度降低的范围增大,且可伴有骨皮质破坏缺损;造模后18 d出现肿大,向周围侵犯伴形态改变。结论大鼠胫骨骨髓腔种植Walker256乳腺癌细胞可建立BCp模型,通过影像学、疼痛行为学实验验证模型稳定可靠,为进一步的机制研究奠定基础。第二章miR-153-5p在BCp大鼠脊髓中的表达变化目的探讨miR-153-5p在BCp大鼠脊髓中的表达变化情况。方法取32只雌性清洁级SD大鼠随机分成BCp组和sham组,每组16只,各组的建造方法同第一章。每组于0、9、12、18 d,取材脊髓腰膨大,通过RT-q pCR测定miR-153-5p的相对表达。结果与0 d相比,BCp组miR-153-5p的相对表达逐渐降低;与sham组相比,造模后9、12、18 d BCp组miR-153-5p的相对表达明显下降(p153-5p在BCp大鼠脊髓表达下降,表明其有可能参与BCp。第三章鞘内注射agomir-153-5p对BCp的影响目的研究鞘内注射agomir-153-5p对BCp的影响。方法取24只大鼠,BCp造模后随机分为BCp+鞘内注射生理盐水(BCp+NS)组、BCp+鞘内注射agomir-153-5p(BCp+agomir)组和BCp+鞘内注射agomir-153-5p negative control(BCp+NC)组,每组8只。造模后9 d各组大鼠行鞘内置管,3 d修复期后,行鞘内注射,每次注射10μl,连续注射3 d。BCp+agomir组注射10μl共1nmol agomir-153-5p,BCp+NC组注射10μl共1nmol agomir-153-5p NC,而BCp+NS组按相同方法注射等体积的NS。分别观察记录注药前和注药后大鼠AS和pWT。结果BCp+NS组与BCp+NC组相比较,AS和pWT在整个观察期间差异无统计学意义。而BCp+agomir组在鞘内注射agomir-153-5p后AS从2.59±0.16分逐渐降低至0.79±0.25分,pWT从5.67±0.62 g升高至13.96±1.24g,与BCp+NS组相比,差异具有统计学意义(pagomir-153-5p鞘内注射可有效缓解BCp,提示miR-153-5p可能参与骨癌痛过程。

关键词： BCp 动物模型 AS pWT miR-153-5p RT-q pCR 骨癌痛模型鞘内置管 agomir-153-5p

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