检索结果-南通市图书馆

第四军医大学学报 2009年第22期30卷 2591-2594页

作者：任谦熊鸿燕朱才众张世界第三军医大学军事预防医学院军队流行病学教研室重庆400038 西藏军区山南军分区后勤部卫生科西藏山南850700

目的:获得黄粉甲抗冻蛋白基因afptx及相关生物信息学资料.方法:从黄粉甲幼虫中提取总RNA,通过RT-PCR合成黄粉甲抗冻蛋白基因afptx的cDNA片段,克隆入载体pMD19-T,进行测序分析.酶切后将其亚克隆入表达栽体pET32a(+),构建表达质粒pET32a-a... 详细信息

目的:获得黄粉甲抗冻蛋白基因afptx及相关生物信息学资料.方法:从黄粉甲幼虫中提取总RNA,通过RT-PCR合成黄粉甲抗冻蛋白基因afptx的cDNA片段,克隆入载体pMD19-T,进行测序分析.酶切后将其亚克隆入表达栽体pET32a(+),构建表达质粒pET32a-afptx,并转化到大肠杆菌DL21后提取质粒,双酶切鉴定.采用MEGA4.0,BioEdit5.0.6软件对本研究克隆的抗冻蛋白基因afptx进行氨基酸序列同源性变异及进化分析.结果:测序结果afptx的cDNA长度为336bp;编码112个氨基酸;酶切、电泳结果表明克隆和亚克隆获得成功.抗冻蛋白氨基酸序列相似性分析表明afptx与GenBank上提交的23条黄粉甲抗冻蛋白的氨基酸序列平均一致性为88%;与11条赤翅甲抗冻蛋白氨基酸序列的平均一致性为67%,2种甲虫的平均一致性为63%.进化树分析结果显示黄粉甲与赤翅甲抗冻蛋白序列是同源序列.赤翅甲的序列趋异度显著大于黄粉甲抗冻蛋白基因序列.结论:成功克隆了本地黄粉甲的afptx基因,该序列是GenBank上提交的黄粉甲与赤翅甲抗冻蛋白的同源序列.

关键词：黄粉甲抗冻蛋白克隆 afptx基因生物信息学

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