检索结果-南通市图书馆

作者：何丽第三军医大学

学位级别：硕士

研究报道随着年龄的逐渐增长,老化所引起的雌激素(estrogen,E)水平降低在痴呆症如阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)的学习记忆方面扮演着重要的角色。目前,AD的具体发病机制仍未完全明确,现有的治疗方案疗效并不理想。因此,研究探... 详细信息

研究报道随着年龄的逐渐增长,老化所引起的雌激素(estrogen,E)水平降低在痴呆症如阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)的学习记忆方面扮演着重要的角色。目前,AD的具体发病机制仍未完全明确,现有的治疗方案疗效并不理想。因此,研究探索AD的发病机理和治疗方法对于预防和治疗AD,促进医疗护理和家庭照护都具有深远的影响。E不仅可以影响女性的生理发育,还在改善老年的记忆力衰退方面也具有积极的作用,在调控海马突触可塑性以及学习记忆的调节过程中需要借助雌激素受体(estrogen receptor,ER)的参与来产生作用。E的受体分为两大类:一类是膜受体GPR30,位于细胞内的膜性成分包括细胞膜、线粒体膜、内质网等,通过第二信使途径介导E对某些生理功能的调节;另一类是经典的核受体,包括雌激素α受体(estrogen receptorα,ERα)和雌激素β受体(estrogen receptorβ,ERβ),它们主要在细胞核内通过与DNA结合从而调节靶基因的转录。类固醇受体辅助活化因子-1(steroid receptor coactivator-1,SRC-1)作为是促进核受体调节靶基因转录活动所必需的辅助因子之一,高表达于海马、大脑皮层等脑区,其表达受产后发育和性腺切除的影响。有研究表明在给予卵巢切除手术和核受体抑制剂处理后海马突触蛋白表达和突触及树突棘密度明显下降,雌激素替代治疗及其核受体激动剂可以增加突触蛋白的表达和树突棘的密度,但ERβ在当中的作用机制目前尚不明确。ERβ克隆于1996年,过去20年的研究发现ERβ在多种动物的体内均有较为广泛的表达,并且参与了E对多种脑功能作用的调节,且在不同的分区其表达分布和功能作用也不尽相同。在中枢神经系统内,大脑皮层、海马等区域有大量ERβ的表达,提示ERβ可能扮演着介导E调控学习记忆的功能性受体的角色。在生殖系统,睾丸、卵巢等组织器官内可检测到ERβ的存在,它可能参与E调节生殖细胞的生长、分化等过程。另外,在心血管、消化道等系统内也可检测到ERβm RNA,并且也具有十分重要生理意义。脑内的研究发现,利用ERβ特异性拮抗剂以及基因敲除等方法抑制ERβ后,发现海马突触蛋白表达显著下降,树突棘密度降低,出现空间学习记忆障碍。通过ERβ激动剂活化ERβ可改善突触可塑性和提高空间学习记忆,提示ERβ对学习记忆有着重要的调控作,但是其具体机制尚不清楚。肌动蛋白(actin)是构成细胞骨架的重要成分,actin聚合与解聚的动态变化是突触可塑性的基础,也是学习记忆的基础。球状肌动蛋白(即G-actin)在Profilin-1等分子的诱导下聚合成为螺旋状的肌动蛋白(F-actin)。因此,F-actin/G-actin比例的变化常作为衡量的肌动蛋白聚合程度的指标。研究还发现哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体2(mammalian target of rapamycincomplex 2,m TORC2)对actin细胞骨架的聚合有着重要的调节作用,敲除m TORC2的核心成分Rictor导致actin聚合程度与树突棘密度下降,并导致严重的学习记忆障碍,而直接激活Rictor的效应分子p-AKT(AKT ser473)可逆转上述学习记忆障碍,证明m TORC2在调节actin细胞骨架聚合与学习记忆中的重要作用。既往研究报道ERβ可调节树突棘密度和学习记忆行为,但是ERβ是否调控actin细胞骨架聚合尚不清楚。目的:探讨ERβ在调控海马神经元actin细胞骨架多聚化以及学习记忆中的作用及其机制。方法:1、为了解ERβ在生后小鼠不同时相点海马的表达情况,我们运用蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)、免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)实验方法检测了ERβ在生后不同发育时期(P0,P7,P14,P28,P56)雌、雄小鼠海马的表达变化。2、为了探讨激活ERβ对海马actin细胞骨架聚合以及学习记忆的影响,将成年小鼠进行卵巢切除(ovariectomy,OVX),1w后在颈背部皮下注射不同剂量ERβ激动剂DPN进行预实验,分为假手术对照(Control)、卵巢切除(OVX)、OVX+1.25 mg/kg DPN、OVX+2.5 mg/kg DPN、OVX+5.0 mg/kg DPN共5组,通过检测上述处理条件下海马SRC-1、Rictor及下游靶分子p-AKT以及actin细胞骨架聚合蛋白(p-cofilin/cofilin、Profilin-1)的表达变化确定DPN处理的最佳剂量。然后,在最佳剂量(5.0 mg/kg DPN)的处理条件下,检测了DPN对OVX后上述分子表达、actin聚合状态(F-actin/G-actin比值)的变化、海马树突棘密度以及

关键词：海马雌激素雌激素β受体类固醇受体辅助活化因子-1 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体2 actin细胞骨架学习记忆

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雌激素β受体对小鼠海马actin聚合调节蛋白表达的影响及其机制

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第三军医大学学报 2017年第9期39卷 852-858页

作者：何丽赵焱钢邱林利张媛媛赵继凯邢方舟张吉强李巍第三军医大学护理学院野战护理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 西南大学生命科学学院重庆400715

目的初步探讨雌激素β受体(estrogen receptor beta,ERβ)在小鼠海马不同发育时期的表达以及ERβ活性改变对actin细胞骨架聚合调节蛋白表达的影响及其机制。方法 C57BL/6小鼠按性别和出生后时间[出生后0(P0)、7(P7)、14(P14)、28(P28)、... 详细信息

目的初步探讨雌激素β受体(estrogen receptor beta,ERβ)在小鼠海马不同发育时期的表达以及ERβ活性改变对actin细胞骨架聚合调节蛋白表达的影响及其机制。方法 C57BL/6小鼠按性别和出生后时间[出生后0(P0)、7(P7)、14(P14)、28(P28)、56 d(P56)]分为10组,用免疫组化和Western blot检测小鼠海马中ERβ的表达变化。另取动情间期成年雌性C57BL/6小鼠用随机数字表法分为5组:对照组和腹腔注射ERβ活性抑制剂PHTPP(100μg/kg)1、3、5、7 d组。再取同种小鼠用随机数字表法分为5组:假手术对照组,卵巢切除(ovariectomy,OVX)组,OVX 1周后再皮下注射ERβ活性激动剂DPN 1.25、2.5、5.0 mg/kg组,均连续注射1周。用免疫组织化学方法检测海马类固醇受体辅助活化因子-1(steroid receptor coactivator-1,SRC-1)的表达,用Western blot检测海马Rictor、磷酸化蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-Akt)、Profilin-1、磷酸化cofilin(phospho-cofilin ser3,p-cofilin)和SRC-1的蛋白水平表达变化。结果免疫组化和Western blot检测发现,ERβ在雌、雄小鼠海马P0组表达较高,P7组和P14组表达较P0组降低(Pactin细胞骨架聚合调节蛋白及SRC-1的表达发生改变,提示ERβ可能通过SRC-1/Rictor/p-Akt途径对actin细胞骨架聚合状态进行调节并最终介导雌激素(estrogens,E2)对学习记忆的调节。

关键词：雌激素海马雌激素β受体 actin细胞骨架 SRC-1

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低氧和糖皮质激素上调stomatin的机制及其生物学意义

低氧和糖皮质激素上调stomatin的机制及其生物学意义

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作者：陈继承第二军医大学

学位级别：硕士

缺氧是最重要的应激反应之一,是也临床最常见的病理生理过程,与心血管疾病和高原性肺水肿等的发生密切相关。糖皮质激素作为体内最重要的应激激素,在机体对低氧适应中发挥重要作用。人工合成的糖皮质激素-地塞米松(Dex)在临床上被广泛... 详细信息

缺氧是最重要的应激反应之一,是也临床最常见的病理生理过程,与心血管疾病和高原性肺水肿等的发生密切相关。糖皮质激素作为体内最重要的应激激素,在机体对低氧适应中发挥重要作用。人工合成的糖皮质激素-地塞米松(Dex)在临床上被广泛用于治疗肺水肿和肺损伤,它的这种作用是通过降低血管内皮细胞的通透性、加速肺泡腔中液体的清除以及增强肺上皮屏障功能来实现的。Stomatin是一个重要的脂筏标志蛋白,它广泛表达在人和小鼠的各组织细胞中,参与脂筏结构的装配,囊泡运输、物质的跨膜转运、以及对离子通道和细胞骨架的调节等生理过程。但是迄今对stomatin的功能了解的有限,对其在生理和病理条件下的调节研究的更少。我们前期研究了低氧和地塞米松(Dex)单独及联合作用对大鼠肺脏和人肺腺癌A549细胞stomatin表达的影响。结果发现低氧和Dex在体内和体外均可以上调stomatin的表达。本课题将从细胞和整体水平进一步确定糖皮质激素和低氧单独或共同作用对stomatin基因表达的影响,在此基础上,重点研究低氧和地塞米松上调stomatin表达的机制,并初步探讨stomatin表达上调的生物学意义。采用Real time-PCR和Western Blot的方法,我们首先在大鼠肺脏和原代培养的肺泡上皮细胞水平进一步证实了地塞米松和低氧不仅单独可诱导stomatin的表达,二者还能联合上调stomatin表达。接下来我们研究了低氧和地塞米松上调stomatin的机制。研究发现,stomatin mRNA有一个相当长的半衰期,约为32小时,低氧和地塞米松处理都能够增强stomatin mRNA的稳定性,使它的半衰期分别延长至原来的1.22倍和1.5倍。我们用荧光素酶报告基因实验研究发现,低氧不能诱导stomatin启动子的转录活性,与低氧不同的是,地塞米松能够以时间和浓度依赖性的方式诱导stomatin启动子的活性,这个结果表明地塞米松也能够直接在转录水平上诱导stomatin mRNA的表达。为了进一步定位stomatin启动子对糖皮质激素诱导反应的位点,我们构建了一系列含stomatin启动子5’端不同截短形式的报告基因载体,荧光素酶活性分析试验表明,启动子的-162至+244区域是对糖皮质激素诱导反应所不可缺少的,而且这一区域在多种细胞类型中均贡献了stomatin基因的绝大部分基础转录活性,因此我们推测这一区域是它的核心启动子区。随后,我们用软件预测了这一区域所包含的可能介导糖皮质激素诱导反应的转录因子结合位点,并且构建了这些位点的相应突变型报告基因载体。结果发现,其中一个位点GRE3,突变之后能够使stomatin启动子失去对地塞米松的诱导反应,这说明GRE3介导了地塞米松对stomatin的诱导反应。因此我们认为,地塞米松在转录水平上对stomatin的诱导是通过激活的糖皮质激素受体与这个GRE3位点结合来实现的。最后,我们用激光共聚焦显微镜的方法观察了A549细胞中stomatin的表达与actin细胞骨架的关系。结果发现,stomatin在膜周与actin细胞骨架存在共定位。低氧暴露或Dex处理均能使膜周actin增加,干扰内源性stomatin表达后低氧暴露或Dex处理A549细胞都能使actin细胞骨架在膜周分布显著减少,表明低氧和Dex能通过上调stomatin表达,增加与细胞膜连接的细胞骨架,从而增强肺泡上皮细胞膜的稳定性。这可能是低氧和GC增强肺泡上皮细胞屏障的功能,从而使得机体产生对低氧适应性反应的机制之一。

关键词：糖皮质激素糖皮质激素受体低氧 stomatin actin细胞骨架

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富勒醇对肿瘤转移的抑制效应及机制研究

富勒醇对肿瘤转移的抑制效应及机制研究

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作者：秦艳霞华南理工大学

学位级别：硕士

研究显示,95%肿瘤患者的死亡是由肿瘤转移造成的。肿瘤转移是一个复杂的生物学过程,主要包括肿瘤细胞的侵袭、內渗进入血管、外渗出血管以及在远端组织形成转移克隆四个过程。通过抑制这些转移相关过程能够有效抑制肿瘤转移。本文中,我... 详细信息

研究显示,95%肿瘤患者的死亡是由肿瘤转移造成的。肿瘤转移是一个复杂的生物学过程,主要包括肿瘤细胞的侵袭、內渗进入血管、外渗出血管以及在远端组织形成转移克隆四个过程。通过抑制这些转移相关过程能够有效抑制肿瘤转移。本文中,我们以形成乳腺癌肺转移的裸鼠为模型,静脉注射生物相容性优越的小粒径富勒醇纳米颗粒,研究这种纯碳纳米颗粒对乳腺癌转移的抑制效应,并揭示其作用机制。通过尾静脉注射荧光素酶标记的乳腺癌细胞（MDA-MB-231-Luc）,建立裸鼠的乳腺癌肺转移模型。七天后,再按照35 mg/kg体重每天每只裸鼠尾静脉注射浓度5 mg/m L富勒醇溶液。连续给药35天后,利用动物活体荧光成像系统,监测肿瘤细胞转移克隆的形成及生长情况。通过图像三维模拟,HE染色以及免疫组化等方法进一步证明富勒醇有效抑制进入血管的乳腺癌细胞的肺转移。通过进一步的荧光染色,western blot以及体外聚合等实验对其抑制机理进行详细探究,证明富勒醇能够扰乱肿瘤细胞内肌动蛋白（actin）组装的动态平衡。通过原子力显微镜检测细胞的机械性质,发现富勒醇可显著降低细胞的弹性模量;场发射扫描电子显微镜成像结果显示,富勒醇可显著降低乳腺癌细胞表面的丝状伪足数量及长度;同时,富勒醇影响细胞转移过程中的重要黏附蛋白整联蛋白β1（integrinβ1）在细胞内的分布,显著降低integrinβ1表达。通过细胞迁移实验与侵袭实验证明:富勒醇对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力有较强的抑制作用。由此推测:富勒醇纳米颗粒通过扰乱actin组装的动态平衡,破坏F-actin细胞骨架,导致细胞变软、细胞表面丝状伪足减少、整联蛋白分布改变,降低乳腺癌细胞迁移侵袭能力,最终抑制乳腺癌细胞在裸鼠体内的肺转移。

关键词：富勒醇纳米颗粒肿瘤转移 actin细胞骨架丝状伪足整联蛋白β1

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雌激素对睡眠剥夺导致学习记忆障碍的影响

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四川医学 2020年第6期41卷 575-580页

作者：何丽王千程文唐晨曦南充市中心医院神经内科重症医学科护理部四川南充637000

目的初步探讨雌激素对睡眠剥夺所导致的学习记忆能力下降的影响及其机制。方法取SPF级C57BL/6成年雌性小鼠用随机数字表法分为对照组(Con组)、睡眠剥夺组(SD组)、睡眠剥夺+雌激素组(SD+E2组),每组10只,采用Morris水迷宫实验探索小鼠的... 详细信息

目的初步探讨雌激素对睡眠剥夺所导致的学习记忆能力下降的影响及其机制。方法取SPF级C57BL/6成年雌性小鼠用随机数字表法分为对照组(Con组)、睡眠剥夺组(SD组)、睡眠剥夺+雌激素组(SD+E2组),每组10只,采用Morris水迷宫实验探索小鼠的学习记忆变化,通过Western Blot检测Rictor及其下游分子磷酸化AKTser473(P-AKt)、磷酸化cofilin(p-cofilin)的蛋白表达情况。结果 Morris水迷宫结果发现SD组潜伏期成绩较Con、SD+E2两组延长(P actin细胞骨架蛋白下降的学习记忆可得到改善。

关键词：雌激素睡眠剥夺海马学习记忆 actin细胞骨架

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BDNF表达下调抑制HepG2细胞侵袭的相关分子机制研究

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现代肿瘤医学 2012年第5期20卷 895-899页

作者：郭大伟侯学忠孙文郁朱磊张弘彬姜晓峰梁健中国医科大学附属四院肝胆外科辽宁沈阳110032 中国人民解放军463医院普外科辽宁沈阳110042

目的:应用特异性siRNA下调HepG2细胞中BDNF表达,观察对细胞凋亡和侵袭的影响并探讨相关分子机制。方法:在人HCC细胞系HepG2中,采用Western blot方法检测BDNF的表达,采用ELISA方法检测培养液上清BDNF的分泌水平。特异性BDNF-siRNA转染细... 详细信息

目的:应用特异性siRNA下调HepG2细胞中BDNF表达,观察对细胞凋亡和侵袭的影响并探讨相关分子机制。方法:在人HCC细胞系HepG2中,采用Western blot方法检测BDNF的表达,采用ELISA方法检测培养液上清BDNF的分泌水平。特异性BDNF-siRNA转染细胞,采用FITC-phalloidin染色方法检测actin细胞骨架的变化,采用Western blot方法检测细胞内RhoA、Rac1、Cdc42的活化情况。同时,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室测定细胞侵袭能力的变化。结果:HepG2细胞培养上清中BDNF含量为88.56±7.45 pg/ml。在HepG2细胞中,特异性BDNF-siRNA显著抑制BDNF的表达,干扰细胞内actin细胞骨架聚合,RhoA或Rac1活性受到抑制,同时凋亡细胞数增加、细胞侵袭能力下降。结论:干扰BDNF的表达可以显著抑制细胞侵袭能力,这可能与阻断actin细胞骨架聚合、以及RhoA或Rac1活化相关。BDNF/TrkB信号通路可能作为阻断HCC发展演进的新靶点,有待于进一步深入研究。

关键词： BDNF 肝细胞癌侵袭 Rho GTPase actin细胞骨架

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