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酸性骆驼刺多糖PLGA纳米佐剂的制备及佐剂活性机理的研究

酸性骆驼刺多糖PLGA纳米佐剂的制备及佐剂活性机理的研究

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作者：特列克·阿依恒别克新疆农业大学

学位级别：硕士

本试验目的为加强酸性骆驼刺多糖的生物利用度、制备成具有良好免疫增强及长效作用的疫苗佐剂,为禽流感畜禽传染病的预防提供一种良好的疫苗佐剂,为有效利用地方药材提供研究方法。本试验采用响应面法提取骆驼刺多糖(Acidic Alhagi spar... 详细信息

本试验目的为加强酸性骆驼刺多糖的生物利用度、制备成具有良好免疫增强及长效作用的疫苗佐剂,为禽流感畜禽传染病的预防提供一种良好的疫苗佐剂,为有效利用地方药材提供研究方法。本试验采用响应面法提取骆驼刺多糖(Acidic Alhagi sparsifolia shap Polysaccharide,aasp),对多糖进行纯化及结构鉴定,aasp体内外免疫增强作用检测,制备负载aasp的PLGA纳米乳液(aasp-ppas)进行表征检测,将aasp-ppas作为H9N2的纳米疫苗佐剂,免疫雏鸡进行佐剂活性检测,主要结果如下:1.确定提取最佳条件为:提取温度为95℃、提取时间为2.1 h、料液比为1:26,此条件下多糖得率为1.645%;2.粗多糖经过凝胶纤维DEAE-52和Sephadex G-100柱纯化得到纯化的多糖aasp,红外光谱检测该多糖含有醛酸;单糖组测定该多糖主要含有阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖;含量检测显示中性多糖含量为81.8±1.2%,醛酸含量为17.34±0.75%,蛋白含量为0.54±0.08%,检测结果表明骆驼刺多糖为酸性骆驼刺多糖。3.aasp可以增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,诱导小鼠脾脏T淋巴细胞IL-4、IL-6、TNF-α及IFN-γ的分泌,促进脾脏CD4T和CD8aT淋巴细胞分化。4.aasp可以增强鸡脾脏淋巴细胞的增殖,能够促进机体IL-4、IL-6和IFN-γ的分泌,能够促进脾脏生发中心的产生,具有良好的免疫作用。5.aasp-ppas/H9N2在30 d内具有良好的缓释效果,64 d内均无沉淀,有良好的稳定性,aasp-ppas/H9N2的抗原负载率64.7±3.34%,aasp-ppas冷冻扫描电镜下均呈圆球形表面呈草莓状。6.aasp-ppas/H9N2能够刺激机体产生高HI滴度和IgG作用效果与阳性对照组Oil/H9N2组之间无显著差异(P>0.05),能够显著刺激促进IL-4、IL-6、TNF-α及IFN-γ的分泌。

关键词：酸性骆驼刺多糖 aasp-ppas IgG 血凝抑制免疫器官指数

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