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zo-1基因甲基化状态分析在骨髓增生异常综合征鉴别诊断中的意义

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中国实验血液学杂志 2011年第1期19卷 76-80页

作者：康慧媛王新荣王莉莉王畅岑坚高丽刘洋李永辉于力中国人民解放军总医院血液科北京100853 吉林大学第一医院血液肿瘤科吉林长春130021 海军总医院血液科北京100037 中国人民解放军总医院老年血液科北京100853

为探讨zo-1基因甲基化状态改变在骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndrome MDS)与血液系统非恶性疾病鉴别诊断中的意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)及逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptio... 详细信息

为探讨zo-1基因甲基化状态改变在骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndrome MDS)与血液系统非恶性疾病鉴别诊断中的意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)及逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测MDS细胞系MUTZ1、1例再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者及正常供者的骨髓(normal bone marrow,NBM)。通过甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specificPCR,MS-PCR),对37例MDS-RA患者、20例疑诊MDS患者及55例血液系统非恶性疾病患者骨髓标本进行检测。结果显示:①zo-1基因在MDS细胞系MUTZ1中呈完全甲基化且不表达,在1例AA患者骨髓及NBM中呈完全非甲基化且有表达;②zo-1基因在55例血液系统非恶性疾病患者骨髓标本中呈完全非甲基化状态,在MDS-RA患者骨髓中甲基化阳性率48.6%(18/37),二者差异有统计学意义(pzo-1基因甲基化阳性率为35%(7/20)。随访甲基化阳性患者中的2例,均在1年内诊断为MDS。结论:MDS患者骨髓zo-1基因启动子区发生了高甲基化状态的改变,而血液系统良性疾病患者骨髓呈非甲基化状态。zo-1基因启动子区高甲基化在MDS患者骨髓标本中较特异,推测zo-1基因异常甲基化状态可能成为基因标志,它有助于MDS与AA等血液系统良性疾病的鉴别诊断,可应用于临床。

关键词： zo-1基因甲基化骨髓增生异常综合征鉴别诊断

zo-1基因甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤骨髓检测中的临床意义

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山东医药 2010年第8期50卷 26-28页

作者：杜瑜王畅康慧媛刘洋王欣荣高晓宁王莉莉韩晓蘋孙敬芬高丽于力中国人民解放军总医院 100853 中国人民解放军总医院第一附属医院吉林大学第一医院

目的探讨紧密连接蛋白-1(zo-1)基因启动子区甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤(NHL)检测中的临床意义。方法采用甲基化特异性PCR方法(MS-PCR)分析10例非血液系统肿瘤者骨髓及45例NHL患者骨髓标本的zo-1基因启动子区甲基化状况。结果zo-1基因... 详细信息

目的探讨紧密连接蛋白-1(zo-1)基因启动子区甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤(NHL)检测中的临床意义。方法采用甲基化特异性PCR方法(MS-PCR)分析10例非血液系统肿瘤者骨髓及45例NHL患者骨髓标本的zo-1基因启动子区甲基化状况。结果zo-1基因在10例良性血液病及正常人中呈完全非甲基化状态,在39例初治、复发、未完全缓解的淋巴瘤患者中甲基化阳性率53.85%(Pzo-1基因甲基化阳性率64.29%,11例Ⅰ、Ⅱ期的NHL患者zo-1基因甲基化阳性率27.27%(Pzo-1基因启动子区高甲基化与疾病分期及缓解明显相关,它可以作为判断NHL进展和评价预后的辅助指标,并以此指导临床治疗。

关键词：淋巴瘤非霍奇金 zo-1基因甲基化

急性白血病zo-1基因启动子区甲基化状态分析及其临床意义

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中华内科杂志 2008年第2期47卷 111-113页

作者：王畅王冠军谭业辉李薇刘春蕙于力解放军总医院血液科北京100853 吉林大学第一医院血液肿瘤科

目的探讨紧密连接蛋白-1（zonula oecludem-1，zo-1）基因启动子区甲基化状态在人急性白血病（AL）发生、发展中的作用及作为通用性基因标志物的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）检测白血病细胞系HL60、Molt4、NK9... 详细信息

目的探讨紧密连接蛋白-1（zonula oecludem-1，zo-1）基因启动子区甲基化状态在人急性白血病（AL）发生、发展中的作用及作为通用性基因标志物的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）检测白血病细胞系HL60、Molt4、NK92和40例非恶性血液病以及81例AL骨髓zo-1基因启动子区的甲基化状态。结果zo-1基因启动子区在白血病细胞系中呈完全甲基化状态；而在40例非恶性血液病标本中均为非甲基化；81例AL标本中甲基化阳性率为60．49％（49／81），其中难治复发组为92．86％（13／14），高于初诊未治疗组65．85％（27／41）及完全缓解组34．62％（9／26）；急性髓细胞白血病组61．54％（32／52）与急性淋巴细胞白血病组58．62％（17／29）比较差异无统计学意义。结论首次证明zo-1基因启动子区高甲基化状态在人AL中具有较高的特异性，与疾病发生、发展密切相关，可作为一个新的白血病通用分子标志。

关键词：白血病甲基化 zo-1基因

儿童神经母细胞瘤zo-1基因甲基化状态临床意义分析

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中华肿瘤防治杂志 2014年第3期21卷 203-206,210页

作者：刁玉巧曲凡杨明娟孟建辉陈健李梅河北医科大学第四医院儿科河北石家庄050011 昌邑市人民医院儿科山东昌邑261300

目的:探讨紧密连接蛋白(zonula occludens protein-1,zo-1)基因启动子区甲基化状态在儿童神经母细胞瘤检测中的临床意义。方法:将2002-01-15-2012-12-15河北医科大学第四医院儿科35例确诊为神经母细胞瘤(Ⅳ期)患儿的骨髓标本作为研究组... 详细信息

目的:探讨紧密连接蛋白(zonula occludens protein-1,zo-1)基因启动子区甲基化状态在儿童神经母细胞瘤检测中的临床意义。方法:将2002-01-15-2012-12-15河北医科大学第四医院儿科35例确诊为神经母细胞瘤(Ⅳ期)患儿的骨髓标本作为研究组,20例非血液肿瘤患儿骨髓作为对照组。采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法动态检测研究组与对照组骨髓中zo-1基因启动子区甲基化状态。逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)法检测两组zo-1基因mRNA的表达情况,同时用zo-1基因经MS-PCR扩增后的甲基化条带进行凝胶成像系统荧光强度半定量分析后的荧光强度(integrated option density,IOD)积分值,观察研究组化疗过程中IOD的动态变化。结果:MS-PCR检测结果显示,研究组治疗前32例出现zo-1基因甲基化条带,阳性率为91.4%(32/35),对照组20例,均呈非甲基化状态,χ2=15.11,P1;动态观察研究组31例zo-1基因甲基化阳性率,治疗前为90.3%(28/31),化疗早期为80.6%(25/31),化疗后期为71.0%(22/31)。临床完全缓解3例,仍有2例可检出。治疗前与化疗早期、后期比较差异均无统计学意义,χ2=0.4,P=0.819。RT-PCR检测结果显示,研究组治疗前35例提取总RNA,3例见到zo-1基因表达,阳性率为8.6%(3/35),对照组20例均有表达,阳性率为100.0%(20/20),χ2=16.616,P1。动态观察研究组31例zo-1基因表达阳性率,治疗前为9.7%(3/31),化疗早期为19.4%(6/31),化疗后期为29.0%(9/31)。临床完全缓解3例,2例未见到zo-1基因表达。治疗前与化疗早期、化疗后期比较差异均无统计学意义,χ2=2.53,P=0.500。性别(t=0.530,P=0.25)、年龄(r=0.080,P=0.25)与IOD值线性无关。外周血白细胞总数与IOD值线性无关,r=0.093,P=0.25。骨髓中瘤细胞数与IOD值线性相关,且呈正相关,r=0.669,P=0.036 5。结论:zo-1基因在儿童神经母细胞瘤中呈特异性高甲基化状态,导致该基因表达沉默,动态观察甲基化消失不明显,这与肿瘤恶性程度、发生、发展及转归密切相关,可能是预后不良因素之一。

关键词：儿童 zo-1基因甲基化特异性聚合酶链反应甲基化神经母细胞瘤

儿童非霍奇金淋巴瘤zo-1基因甲基化状态分析及临床意义

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中国当代儿科杂志 2014年第6期16卷 619-623页

作者：刁玉巧曲凡杨明娟孟建辉朱秀丽陈健河北医科大学第四医院儿科河北石家庄050011

目的探讨紧密连接蛋白(zo-1)基因启动子区甲基化状态在儿童非霍奇金淋巴瘤(NHL)Ⅳ期检测中的临床意义,以进一步寻找病因及早期诊断方法。方法将55例确诊为NHLⅣ期(T细胞型40例,B细胞型15例)患儿的骨髓标本作为病例组,20例非血液肿瘤患... 详细信息

目的探讨紧密连接蛋白(zo-1)基因启动子区甲基化状态在儿童非霍奇金淋巴瘤(NHL)Ⅳ期检测中的临床意义,以进一步寻找病因及早期诊断方法。方法将55例确诊为NHLⅣ期(T细胞型40例,B细胞型15例)患儿的骨髓标本作为病例组,20例非血液肿瘤患儿骨髓标本作为对照组。采用甲基化特异性PCR法(MS-PCR)检测病例组与对照组骨髓中zo-1基因启动子区甲基化状态,并检测光密度积分值(IOD)。逆转录PCR法(RT-PCR)检测病例组与对照组zo-1基因mRNA的表达情况。结果 MS-PCR检测结果显示病例组治疗前39例出现zo-1基因甲基化条带,阳性率为70.9%(39/55),对照组20例均呈非甲基化状态;治疗过程中,行动态观察NHL患儿47例,其中T细胞型32例,B细胞型15例,治疗前zo-1基因甲基化阳性率分别为72%和67%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。T细胞型与B细胞型NHL患儿治疗前与化疗早期、中期比较差异均无统计学意义(P>0.05),而与化疗后期比较差异均有统计学意义(Pzo-1甲基化阳性病例均无mRNA表达,对照组患儿均表达zo-1 mRNA。外周血白细胞总数与zo-1基因IOD值无直线相关关系(r=0.093,P=0.575);骨髓中恶性肿瘤细胞数与zo-1基因IOD值呈正相关关系(r=0.669,Pzo-1基因在儿童NHL中呈特异性高甲基化状态,其程度与骨髓中恶性肿瘤细胞数呈正相关。zo-1基因可能成为新的分子标志,为临床早期诊断、疗效判断、预后评价、微小残留检测提供新的指标。

关键词： zo-1基因甲基化非霍奇金淋巴瘤儿童

急性白血病zo-1基因启动子区甲基化状态研究

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中国实验血液学杂志 2010年第4期18卷 863-865页

作者：王新荣高晓宁康慧媛王莉莉李永辉于力中国人民解放军总医院血液科北京100853

本研究探讨健康人和急性白血病(AL)不同时期患者zo-1基因启动子区甲基化状态差异。采用硫化测序特异性PCR(BS-PCR)方法对白血病细胞系、AL患者及健康人骨髓标本进行zo-1基因启动子区甲基化状况检测。结果显示:在健康人骨髓中呈低甲基化... 详细信息

本研究探讨健康人和急性白血病(AL)不同时期患者zo-1基因启动子区甲基化状态差异。采用硫化测序特异性PCR(BS-PCR)方法对白血病细胞系、AL患者及健康人骨髓标本进行zo-1基因启动子区甲基化状况检测。结果显示:在健康人骨髓中呈低甲基化状态(1.9%),初治、复发和完全缓解的AL患者骨髓中zo-1基因呈高甲基化状态,甲基化率分别为93.2%、66.9%及16.4%,明显高于健康人,差异均有统计学意义(pzo-1基因呈高甲基化状态,且AL不同时期的患者中zo-1基因都发生了不同程度的甲基化改变,对zo-1基因甲基化状态的分析有助于监测AL患者疾病的进展。

关键词： zo-1基因急性白血病 DNA甲基化

骨髓增生异常综合征患者zo-1基因甲基化状态检测的临床意义

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中国实验血液学杂志 2008年第1期16卷 70-73页

作者：康慧媛王畅窦立萍秦耘韩晓蘋孙敬芬刘春蕙卢学春刘洋于力中国人民解放军总医院血液科北京100853 中国人民解放军总医院老年血液科北京100853

本研究探讨紧密连接蛋白(zonula occludens-1,zo-1)基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断中基因标志作用的临床意义。采用甲基化特异性-PCR(MS-PCR)方法分析30例健康人骨髓标本及85例MDS患者骨髓标本的zo-1基因启动子区甲基化... 详细信息

本研究探讨紧密连接蛋白(zonula occludens-1,zo-1)基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断中基因标志作用的临床意义。采用甲基化特异性-PCR(MS-PCR)方法分析30例健康人骨髓标本及85例MDS患者骨髓标本的zo-1基因启动子区甲基化状况。结果显示:zo-1基因在30例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MDS患者骨髓中zo-1基因甲基化阳性率(56.5%)明显高于健康人,二者差异有统计学意义(pzo-1基因启动子区甲基化阳性率均高于健康人,其差异也具有统计学意义(pzo-1基因甲基化阳性率差别无统计学意义(p>0.05)。结论:与健康人相比,MDS病人骨髓中zo-1基因启动子区呈高甲基化状态并具有特异性。MDS是一种常见的克隆增殖性血液系统疾病,在临床诊断中有时很难与其他疾病相鉴别,而zo-1基因甲基化模式的改变与MDS的发生密切相关,因此zo-1基因作为有价值的诊断标志具有重要的临床意义,它可能是一个潜在的血液系统恶性疾病的相关基因。

关键词：基因甲基化 zo-1基因骨髓增生异常综合征

慢性粒细胞白血病zo-1基因启动子区甲基化状态分析及临床意义探讨

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山东医药 2011年第32期51卷 33-35页

作者：王畅于力谭业辉李薇吉林大学第一医院长春130021 中国人民解放军总医院

目的通过对慢性期及急变期慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓标本中人紧密连接蛋白1(zo-1)基因启动子区甲基化状态的分析,初步探讨其在CML病情发展变化中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测5例CML慢性期和10例CML... 详细信息

目的通过对慢性期及急变期慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓标本中人紧密连接蛋白1(zo-1)基因启动子区甲基化状态的分析,初步探讨其在CML病情发展变化中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测5例CML慢性期和10例CML急变期患者骨髓标本中zo-1基因启动子区的甲基化状态。结果在5例CML-CP患者中zo-1基因启动子区呈非甲基化状态;在7例CML-BP患者中zo-1基因启动子区呈高甲基化状态,甲基化阳性率为70%(7/10);1例CML患者其慢性期骨髓标本zo-1基因启动子区呈非甲基化状态,而急变期则呈甲基化状态,经治疗恢复到慢性期时,则又表现为非甲基化状态。结论 zo-1基因启动子区甲基化状态可能与CML病情发展变化密切相关,可能是一个提示CML急变的分子标志物。

关键词：白血病,粒细胞,慢性 zo-1基因甲基化

慢性髓细胞白血病疾病分期与zo-1基因甲基化关系研究

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慢性髓细胞白血病疾病分期与ZO-1基因甲基化关系研究

作者：康爽吉林大学

学位级别：硕士

背景：慢性髓细胞白血病(CML)简称慢粒，为恶性血液系统疾病，发生于骨髓造血干细胞，病程分为慢性期(CP)、加速期(AP)、最终急变期(BP/BC)。加速期、急变期被认为是疾病进展期，本病中位发病年龄在60岁5岁。目前酪氨酸激酶抑制剂(TKI)... 详细信息

背景：慢性髓细胞白血病(CML)简称慢粒，为恶性血液系统疾病，发生于骨髓造血干细胞，病程分为慢性期(CP)、加速期(AP)、最终急变期(BP/BC)。加速期、急变期被认为是疾病进展期，本病中位发病年龄在60岁5岁。目前酪氨酸激酶抑制剂(TKI)成为慢粒治疗的一线用药，传统观点认为慢粒患者进入急性期首选异基因造血干细胞移植，且为可能治愈本病的唯一手段。否则病程仅为3个月，但移植费用昂贵且存在风险。所以临床中治疗以维持患者处于慢性期不进展为佳，需重点关注慢粒患者疾病何时发生进展，但目前并没有明确的分子标志物提示慢粒急变。研究显示肿瘤的发生发展同表观遗传学密切相关，其中DNA甲基化是表观遗传调控的重要机制，甲基化异常是白血病发生过程中的一个普遍现象。研究表明在各种白血病中发现了多个基因高甲基化状态，提示DNA甲基化异常修饰同白血病发病相关。前期研究工作显示，人紧密连接蛋白(zo-1)基因启动子区，在急性白血病中呈现特异性高甲基化状态，与急性白血病发生、发展及转归密切相关，是白血病预后一个不良因素。目的：对慢粒和急性白血病的细胞系以及慢粒患者病程不同时期的骨髓标本，进行zo-1基因启动子区甲基化状态检测，探讨慢粒疾病不同时期zo-1基因启动子区甲基化状态的差异，及其与疾病分期转变之间的关系。方法：应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)及亚硫酸氢钠联合限制性内切酶分析法(COBRA)检测K562细胞及HL-60、Molt4等细胞，zo-1基因启动子区甲基化状态，zo-1基因的表达情况，以及去甲基化药物对zo-1基因甲基化状态及表达的影响。检测CML不同疾病分期骨髓标本zo-1甲基化状态，并通过扩大临床标本数目，探讨不同分期CML患者中zo-1基因甲基化阳性患者比例。并对一例CML患者在不同分期阶段骨髓标本检测，检测其慢性期、急变期、急变期治疗后回到慢性期时zo-1基因启动子区甲基化状态及表达的变化。结果： 1. zo-1基因启动子区在K562细胞系中呈现非甲基化状态，在HL-60、Molt-4细胞系中呈现特异性高甲基化状态，同时在急性白血病细胞系中zo-1表达沉默。经去甲基化药物地西他滨处理后的HL-60、Molt-4细胞系，zo-1基因启动子区由高甲基化状态转化为非甲基化状态，同时恢复zo-1基因的表达。 2. zo-1基因启动子区在正常人群呈现非甲基化状态，慢粒患者慢性期呈现非甲基化状态，慢粒患者加速期及急变期中呈现特异性高甲基化状态。对10例CML-CP患者检测，zo-1基因均为非甲基化状态，对8例CML-AP患者检测，4例(50%)呈现高甲基化状态，CML-BC患者7例，5例(70%)呈现zo-1基因高甲基化状态。 3.针对1例慢粒患者在慢性期呈现zo-1基因非甲基化，急变期呈现高甲基化状态，恢复至慢性期后甲基化状态可转变回非甲基化状态。结论： zo-1基因启动子区甲基化状态同慢粒疾病不同时期有相关性。随着疾病进展，zo-1基因甲基化比例升高，出现高甲基化状态提示可能有疾病进展倾向。

关键词：白血病髓细胞慢性 zo-1基因甲基化