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生物工程学报 2023年第4期39卷 1696-1709页

作者：马箫彤王瑞龙王菲陈定双李艳艳林亚秋王友利刘伟西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 赤峰应用技术职业学院内蒙古赤峰024031 西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室四川成都610041

本研究旨在克隆获取锌指蛋白家族36(zinc finger protein 36-like 1,zfp36l1)基因,并明确其表达特性,阐明其在山羊不同组织中的表达模式。采集简州大耳羊的心、肝、脾、肺、肾等15种组织样品,应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcrip... 详细信息

本研究旨在克隆获取锌指蛋白家族36(zinc finger protein 36-like 1,zfp36l1)基因,并明确其表达特性,阐明其在山羊不同组织中的表达模式。采集简州大耳羊的心、肝、脾、肺、肾等15种组织样品,应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增获得山羊zfp36l1基因,通过在线工具对基因及蛋白质序列进行生物学分析;再应用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测zfp36l1基因在山羊各个组织及不同分化阶段的肌内前体脂肪细胞中的表达水平,并分析其组织表达谱以及细胞时序表达谱。结果表明,克隆获得山羊ZFR36l1基因序列长度为1224 bp,编码序列(coding sequence,CDS)区为1017 bp,编码338个氨基酸,是主要定位于细胞核、细胞质的非分泌不稳定蛋白;组织表达谱显示,zfp36l1基因在各组织中均有表达,在内脏组织、小肠表达量最高(P1)。在肌肉组织以背最长肌表达量最高(P1)。在脂肪组织中,皮下脂肪组织的表达量显著高于其他组织(P1)。诱导分化结果显示,该基因在肌内前体脂肪细胞成脂分化过程中表达呈上调趋势(P1)。以上研究为阐明山羊zfp36l1基因的生物学功能提供数据支持。

关键词：山羊 zfp36l1 基因克隆肌内前体脂肪细胞诱导分化

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zfp36l1对ESCs自我更新及分化影响的研究

ZFP36L1对ESCs自我更新及分化影响的研究

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作者：黄少刚哈尔滨医科大学

学位级别：硕士

背景及目的:胚胎干细胞(ESCs)和滋养层干细胞(TSCs)是研究小鼠胚胎发育机制的重要实验模型。小鼠胚胎在围着床期(E4.5～7.5)发育阶段需要经历多次细胞谱系分化,才能形成包含十几种不同细胞类群的原肠胚。胚胎在此过程中伴随着多次转录... 详细信息

背景及目的:胚胎干细胞(ESCs)和滋养层干细胞(TSCs)是研究小鼠胚胎发育机制的重要实验模型。小鼠胚胎在围着床期(E4.5～7.5)发育阶段需要经历多次细胞谱系分化,才能形成包含十几种不同细胞类群的原肠胚。胚胎在此过程中伴随着多次转录本的重塑,而对于该重塑过程的研究依旧空白。zfp36l1是m RNA转录后调控蛋白,可广泛调控包括发育相关的多种m RNA的空间定位、翻译和降解,其调控方式和结果受多种因素的影响。在本次研究中,我们以ESCs为实验模型研究zfp36l1在胚胎发育过程中的作用。方法:使用免疫荧光确定zfp36l1在小鼠围着床期胚胎中的表达,使用CRISPR-Cas9体系构建敲除zfp36l1基因的ESCs,使用免疫荧光、RTq-PCR、CCK-8、流式细胞术方式确定zfp36l1基因敲除对ESCs的细胞周期、干性维持和分化能力的影响。结果:我们初步检测了zfp36l1在小鼠胚胎E4.5～7.5的表达,确定zfp36l1在胚胎极化过程中在其上胚层、下胚层以及滋养外胚层中表达且存在极性分布;通过CRISPR-Cas9体系转染ESCs进行药物筛选及单克隆挑取,我们成功构建出zfp36l1第2外显子571 bp碱基缺失的ESCs;缺失zfp36l1的ESCs不影响其细胞周期分布,但显著加快ESCs的增殖速率;同时zfp36l1缺失的ESCs显示会导致Nanog转录水平上调,Oct4和UTF1转录水平的不稳定性增加;zfp36l1缺陷的ESCs在EB自发分化的d0～d3阶段转录组表现为晚期外胚层标记物(Nestin)和内胚层标记物(Gata4和AFP)的上调和早期中胚层标记物(Mitf)的下调;而EB d9后,zfp36l1缺陷的ESCs出现中胚层标记物(Mitf和Acta2)的上调和内、外胚层标记物(PRCE、Nestin、Gata4和AFP)的下调。结论:zfp36l1在小鼠围着床期胚胎发育过程中的上下胚层、滋养外胚层以及ESCs、TSCs的极化过程呈现极性分布;zfp36l1缺陷ESCs细胞增殖加快,但不影响其细胞周期分布;zfp36l1缺陷有利于ESCs维持na(?)ve状态;不影响ESCs的分化能力,但更倾向于向中胚层谱系分化。

关键词：胚胎干细胞 zfp36l1 自我更新胚层分化

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zfp36l1在痛风性关节炎中的作用及其调节的分子机制

ZFP36L1在痛风性关节炎中的作用及其调节的分子机制

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作者：唐欢川北医学院

学位级别：硕士

目的:RNA结合蛋白中的zfp36家族是许多炎症反应的负调节因子,在多种炎性疾病和自身免疫性疾病中高表达,本研究主要目的是探索zfp36家族中的zfp36l1在痛风性关节炎自发缓解过程中的作用机制,拟为痛风治疗提供新的思路。方法:收集川北医... 详细信息

目的:RNA结合蛋白中的zfp36家族是许多炎症反应的负调节因子,在多种炎性疾病和自身免疫性疾病中高表达,本研究主要目的是探索zfp36家族中的zfp36l1在痛风性关节炎自发缓解过程中的作用机制,拟为痛风治疗提供新的思路。方法:收集川北医学院附属医院2019.10-2020.10期间门诊痛风患者及体检中心健康人外周血标本,实验室分离血清和外周血单核细胞(PBMCs),ElISA检测血清Il-1β及TGF-β的表达水平,RT-qPCR检测zfp36l1、TGF-β、Il-1β、Il-6、TNF-α 的 mRNA 表达水平,比较正常人、痛风患者急性期、间歇期之间的表达差异。实验室培养人源性巨噬细胞THP-1及鼠源性巨噬细胞RAW264.7,干扰THP-1来源的巨噬细胞、RAW264.7细胞zfp36l1表达后再用一定浓度的MSU晶体刺激,RT-qPCR 检测细胞 zfp36l1、TGF-β、Il-1β、Il-6、HSP70、TNF-α、COX-2、NOS2的mRNA的表达水平,ElISA检测正常人、急性期、间歇期患者血清及THP-1来源的巨噬细胞Il-1β、TGF-β表达水平,并比较其表达差异。结果:zfp36l1表达水平在痛风患者的PBMCs中高于正常人,而急性期病人的PBMCs中zfp36l1表达水平高于间歇期。不同浓度MSU晶体刺激THP-1来源巨噬细胞,zfp36l1表达水平也不同程度的升高。干扰THP-1来源的巨噬细胞和RAW264.7细胞的zfp36l1表达,再用MSU晶体刺激,炎症因子如Il-1β、NOS2等表达水平明显升高,抗炎因子TGF-β表达量却有所下降。结论:zfp36l1参与痛风性关节炎;在MSU晶体诱发的炎症反应中,zfp36l1可以通过调节炎症相关基因的表达来调节炎症反应,zfp36l1可能作为急性痛风性关节炎治疗的潜在靶点。

关键词： zfp36l1 痛风性关节炎分子机制

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Role of zfp36l1 in the Development and Progression of Bladder Cancer

Role of ZFP36L1 in the Development and Progression of Bladde...

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作者： Ghassan Bashir 深圳大学

学位级别：硕士

膀胱癌是一种威胁人类健康的恶性肿瘤,具有较高的发病率和死亡率,且现阶段其诊疗费用也居高不下。在工业化国家,90%的膀胱癌属于移行细胞癌。据美国癌症协会估计,在2020年,膀胱癌新增病例将达81400例,其中女性约19300例,男性约62100例,... 详细信息

膀胱癌是一种威胁人类健康的恶性肿瘤,具有较高的发病率和死亡率,且现阶段其诊疗费用也居高不下。在工业化国家,90%的膀胱癌属于移行细胞癌。据美国癌症协会估计,在2020年,膀胱癌新增病例将达81400例,其中女性约19300例,男性约62100例,此外将有大约17980人死于膀胱癌,其中男13050人,女4930人。报道显示,膀胱癌的死亡率处于总体稳定状态,膀胱癌女性新发人数和与膀胱癌相关的死亡人数近年来略有下降,男性的发病率也在下降,尽管如此,作为男性第四大常见癌症,膀胱癌在发病率上略高于女性。膀胱癌的主要危险因素包括接触职业、环境致癌物以及烟草。膀胱癌患者多经肉眼血尿（尿中带血）确诊,确诊后一般行经尿道行膀胱肿瘤电切术（TURBT）进行手术治疗。膀胱癌根据浸润程度分为非肌层浸润型和肌层浸润型,且这些亚型具有不同的分子生物学机制和病理特征。癌症基因组图谱计划已经确定了膀胱癌的基因驱动因素,更好地了解膀胱癌的基因可以带来新的治疗方法。先前发表的数据表明,zfp36l1在膀胱癌是高频突变基因之一,属于zfp36家族,该家族成员包括zfp36、zfp36l1和zfp36l2。这些是具有两个串联锌指（TZF）区域的CCCH型锌指蛋白。这些蛋白质可以通过与富含AU的区域结合而破坏mRNA的分子稳定性。zfp36家族在先前作为多种肿瘤的抑制性因子被报道;在正常组织中,zfp36家族在膀胱、结肠和肺中高度表达。同理,zfp36l1的低表达标志着zfp36l1表达水平异常预示着较差的患者生存率和预后。在本实验中,我们发现zfp36l1在膀胱癌样本中的表达明显低于其对应的正常膀胱组织。因此,我们推测zfp36l1的低水平表达与癌细胞的自我更新能力、分化、侵袭和细胞迁移能力有关。此外,我们还发现zfp36l1在体外对膀胱癌细胞增殖有抑制作用。通过克隆形成实验、Oncosphere形成实验、Transwell侵袭实验中提高zfp36l1的表达水平,结果显示zfp36l1抑制了膀胱癌细胞株的自我更新能力,促进了膀胱癌细胞株的侵袭能力。而zfp36l1的敲除促进了膀胱癌细胞的自我更新能力,抑制了膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力。Nanog是已知的调节肿瘤干细胞自我更新的基因,RNA表达分析显示,zfp36l1的过表达使Nanog的表达下调。由于zfp36l1是一种可以破坏mRNA稳定的蛋白质,所以它必须与mRNA共同作用来影响细胞的生长能力。综上所述,我们的研究结果表明,zfp36l1和Nanog在膀胱癌细胞迁移、侵袭和自我更新能力方面可能存在联系,这种关系可能会影响患者的总生存率。

关键词：膀胱癌 zfp36l1 mRNA降解疾病预后

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Involvement of Xzfp36l1,an RNA-binding protein,in Xenopus neural development

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Zoological Research 2012年第S3期33卷 82-88页

作者： Yingjie XIA Shuhua ZHAO Bingyu MAO State Key laboratory of Genetic Resources and Evolution Kunming Institute of Zoologythe Chinese Academy of SciencesKunming 650223China Graduate University of Chinese Academy of Sciences Beijing 100049China Yunnan Key laboratory of Fertility Regulation and Minority Eugenics Yunnan Population and Family Planning Research InstituteKunming 650021China

Xenopus zfp36l1(zinc finger protein 36,C3H type-like 1)belongs to the zfp36 family of RNA-binding proteins,which contains two characteristic tandem CCCH-type zinc-finger domains.The zfp36 proteins can bind AU-rich elements in 3'untranslated regions of target mRNAs and promote their turnover.However,the expression and role of zfp36 genes during neural development in Xenopus embryos remains largely unknown.The present study showed that Xenopus zfp36l1 was expressed at the dorsal part of the forebrain,forebrain-midbrain boundary,and midbrain-hindbrain boundary from late neurula stages to tadpole stages of embryonic development.Overexpression of Xzfp36l1 in Xenopus embryos inhibited neural induction and differentiation,leading to severe neural tube defects.The function of XZP36l1 requires both its zinc finger and C terminal domains,which also affect its subcellular localization.These results suggest that Xzfp36l1 is likely involved in neural development in Xenopus and might play an important role in post-transcriptional regulation.

关键词： zfp36l1 RNA-binding protein Neural development Xenopus Post-transcriptional regulation

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