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作者：席启明甘肃农业大学

学位级别：硕士

氧分子是生命活动的物质基础,当机体缺氧时内环境稳态遭到破坏,会发生一系列适应性应答反应。藏绵羊经过长期的适应性进化,已经在遗传和生理生化等方面适应了高原环境,对长期的低氧胁迫有着很好的适应能力,但其低氧适应机制仍未充分阐明... 详细信息

氧分子是生命活动的物质基础,当机体缺氧时内环境稳态遭到破坏,会发生一系列适应性应答反应。藏绵羊经过长期的适应性进化,已经在遗传和生理生化等方面适应了高原环境,对长期的低氧胁迫有着很好的适应能力,但其低氧适应机制仍未充分阐明,调控藏绵羊低氧适应性的功能基因及其分子机制还需进一步研究。本研究以藏绵羊为研究对象,湖羊为对照,基于绵羊生活环境的氧浓度差,通过RT-q PCR方法测定4个低氧相关基因（EPAS1、VHL、EPO和zeb1）在不同海拔梯度（100 m、2500 m、3500 m、4500 m）藏绵羊和湖羊心脏、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏和背最长肌中的m RNA表达水平,分析基因表达特征在藏绵羊高原低氧适应中的作用模式,并通过PCR-SSCP、测序技术及KASP分型技术检测基因SNPs位点,然后对基因遗传多态性与血气进行关联性分析。主要研究结果如下:（1）在EPAS1基因第15外显子检测到4个等位基因（A、B、C、D）,它们在藏绵羊和湖羊群体中分布差异较大。在藏绵羊群体中,B为优势等位基因,而在湖羊群体中4个等位基因普遍存在。在4个等位基因中共鉴定出6个单核苷酸多态性（SNPs）,其中一个是非同义突变（p.F606L）;EPAS1基因的一个变异区域与p O和s O升高有关;EPAS1在3个海拔藏绵羊（2500 m,3500 m,4500m）的心脏、肝脏、脾脏和背最长肌中的表达量显著高于湖羊（P1基因的表达与氧浓度有关,较低的氧浓度可导致该基因较高的表达水平。（2）在VHL基因第2、3外显子及3′-UTR区各检测到1个SNPs（g.3788 G>A、g.6400 G>C和g.6626 A>G）,分别命名为VHL-SNP1、VHL-SNP2和VHL-SNP3,且3个SNPs均有3种基因型;关联性分析显示VHL-SNP3位点与p CO显著相关（P基因在藏绵羊和湖羊肺脏中的表达量均显著高于其他5个组织（P基因在绵羊肺脏的表达具有组织差异性和品种差异性。（3）在EPO基因第1外显子检测到1个SNPs（g.855 A>C）,第4外显子检测到2个SNPs（g.1985 T>G和g.2115 G>C）,分别命名为EPO-SNP1、EPO-SNP2和EPO-SNP3,且3个SNPs都有3种基因型;关联性分析显示EPO-SNP3位点与p O呈显著相关（P基因均在两个绵羊品种的肾脏中表达量最高,在肌肉中表达量最低,表明该基因的表达具有组织差异性。EPO基因在4500 m海拔藏绵羊的心脏、肺脏和肝脏中的表达量显著高于湖羊（P基因在藏绵羊心脏的表达量有上升趋势。（4）在zeb1基因第7外显子检测到4个SNPs（g.35010273 A>G、g.35010343A>G、g.35010347 G>C、g.35010376 A>G）,第7内含子检测到1个SNPs（g.35010458 T>G）,第12外显子检测到2个SNPs（g.35035102 G>A和g.35036245）,分别命名为zeb1-SNP1、zeb1-SNP2、zeb1-SNP3、zeb1-SNP4、zeb1-SNP5、zeb1-SNP6和zeb1-SNP7,且7个SNPs均有3种基因型;关联性分析显示zeb1-SNP3和zeb1-SNP6位点与p O显著相关（Pzeb1-SNP3与s O显著相关（Pzeb1基因在4500 m海拔藏绵羊心脏的表达量显著高于2500 m海拔藏绵羊（P0.05）。该基因在藏绵羊肝脏中的表达量随海拔升高呈上升趋势,在3个海拔藏绵羊肺脏中的表达量显著高于湖羊（P基因的表达具有品种差异性。综上所述,EPAS1、VHL、EPO和zeb1基因的突变和表达调控与绵羊氧代谢有关。相较于低海拔群体,4个低氧相关基因在高海拔藏绵羊群体部分组织的高水平表达可能是低氧环境下机体维持正常生物学功能的分子基础。因此,EPAS1、VHL、EPO和zeb1基因可作为低氧适应性研究的基因标记。

关键词：藏绵羊 EPAS1基因 VHL基因 EPO基因 zeb1基因 SNPs

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zeb1基因在甲状腺乳头状癌诊断中的意义及对细胞上皮-间质转化的影响

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实用癌症杂志 2022年第8期37卷 1224-1228页

作者：柳家荣张琪平煤神马医疗集团总医院 467000

目的探讨zeb1基因在甲状腺乳头状癌诊断中的意义及对细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法选取90例甲状腺乳头状癌患者作为甲状腺乳头状癌组,另外选取同期进行体检的健康者90例作为正常对照组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测2组血清zeb1基... 详细信息

目的探讨zeb1基因在甲状腺乳头状癌诊断中的意义及对细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法选取90例甲状腺乳头状癌患者作为甲状腺乳头状癌组,另外选取同期进行体检的健康者90例作为正常对照组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测2组血清zeb1基因表达情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清zeb1基因表达对甲状腺乳头状癌的诊断价值。培养甲状腺乳头状癌细胞TPC-1,作为Con组;将siRNA-Con、siRNA-zeb1转染进入TPC-1,作为siRNA-Con组和siRNA-zeb1组。Transwell检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙粘蛋白(N-cadherin)、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达情况。结果与正常对照组相比,甲状腺乳头状癌组zeb1基因水平表达显著升高(Pzeb1基因表达与临床分期、分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移密切相关(Pzeb1基因表达与年龄无关(P>0.05)。血清zeb1基因表达对甲状腺乳头状癌的诊断价值,灵敏度为90.20%,特异度为93.88%,AUC曲线下面积为0.945,P1。与Con、siRNA-Con组相比,siRNA-zeb1组zeb1 mRNA表达水平以及细胞迁移数、细胞侵袭数显著降低(Pzeb1组zeb1 mRNA表达水平以及N-cadherin蛋白表达明显下调(Pzeb1组ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白表达显著降低(Pzeb1基因表达对甲状腺乳头状癌具有较高的诊断价值,抑制zeb1基因能通过MAPK信号通路降低细胞迁移、侵袭能力,抑制上皮间质转化。

关键词： zeb1基因甲状腺乳头状癌诊断价值上皮-间质转化(EMT)

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miR-205对人胃癌细胞株SGC7901增殖的抑制作用

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临床检验杂志 2012年第4期30卷 270-273页

作者：赵崇晖王梅沈俐顾健美史云燕钱晖许文荣江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013

目的观察miR-205对人胃癌细胞株SGC7901增殖的影响及可能的机制。方法 miR-205 mimics转染SGC7901细胞后,观察其增殖能力;SYBR Green I实时荧光定量PCR检测miR-205的表达水平;RT-PCR检测细胞zeb1和zeb2的基因表达水平。结果与空白对照组... 详细信息

目的观察miR-205对人胃癌细胞株SGC7901增殖的影响及可能的机制。方法 miR-205 mimics转染SGC7901细胞后,观察其增殖能力;SYBR Green I实时荧光定量PCR检测miR-205的表达水平;RT-PCR检测细胞zeb1和zeb2的基因表达水平。结果与空白对照组miR-205表达的相对水平(0.000 619±0.000)及阴性片段对照组(0.001 064±0.001)相比,miR-205 mimics处理组(0.027 33±0.014)miR-205表达水平明显增高(q分别为5.77和5.67,P均zeb1和zeb2 mRNA明显下调。结论 miR-205可抑制胃癌细胞增殖,其机制可能与下调zeb1和zeb2基因表达有关,对研究胃癌分子诊断与治疗具有重要意义。

关键词：胃癌微小RNA-205 细胞增殖 zeb1基因 zeb2基因

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MiR-223靶向IGF2和zeb1调控家禽成肌细胞的增殖和分化

MiR-223靶向IGF2和ZEB1调控家禽成肌细胞的增殖和分化

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作者：李桂焕华南农业大学

学位级别：硕士

MicroRNA是一种内源性小分子非编码RNA,广泛存在于真核生物中并参与调控各类细胞进程。大量研究表明,miRNA参与了鸡胚生长发育、神经细胞和肌肉细胞的增殖和分化、细胞迁移、性成熟和免疫应答等一系列生命活动,对肉鸡的生长、发育和代... 详细信息

MicroRNA是一种内源性小分子非编码RNA,广泛存在于真核生物中并参与调控各类细胞进程。大量研究表明,miRNA参与了鸡胚生长发育、神经细胞和肌肉细胞的增殖和分化、细胞迁移、性成熟和免疫应答等一系列生命活动,对肉鸡的生长、发育和代谢具有重要的调控作用。本研究在实验室前期成果的基础上,筛选出miR-223作为研究肉鸡生长性能的候选基因,并以miR-223为切入点,一方面探索miR-223在骨骼肌生长发育中的生物学功能,另一方面研究miR-223及其靶基因作用于骨骼肌细胞增殖和分化的分子机理。论文主要结果如下:1.通过qRT-PCR技术发现miR-223在鸡胚肌肉发育过程中呈先上升后下降的趋势,其中,在肌肉快速发育的12E-17E高表达,说明miR-223参与鸡胚的肌肉发育。2.通过成肌细胞的体外诱导分化实验发现miR-223在成肌细胞分化过程中持续极显著上升(P1),说明miR-223可能对成肌细胞的分化具有重要调控功能。3.通过流式细胞术、CCK-8和qRT-PCR检测过表达和干扰miR-223的成肌细胞,结果表明:miR-223在成肌细胞中具有抑制细胞增殖和促进细胞分化的功能。4.利用生物信息学分析和参考文献报道,预测与细胞增殖分化相关的IGF2基因和zeb1基因为miR-223的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和western blot等试验,确定miR-223能够靶向抑制IGF2和zeb1基因的表达。5.过表达和干扰IGF2的实验中发现,IGF2基因能够促进家禽成肌细胞的增殖、分裂和分化过程(P1);干扰zeb1基因能够促进家禽成肌细胞的分化(P1)。本研究由上述结果得出结论:gga-miR-223靶向IGF2抑制成肌细胞的增殖,靶向zeb1促进成肌细胞的分化。本论文揭示了miR-223在家禽骨骼肌生长发育中的功能和调控机制,为进一步认识miR-223在细胞增殖、分化和其他生物学进程中的作用提供了依据。

关键词：家禽成肌细胞 miR-223 IGF2基因 zeb1基因细胞增殖细胞分化

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