检索结果-南通市图书馆

中华肿瘤防治杂志 2024年第18期31卷 1108-1115页

作者：邱晋李帅广姬美玲杨心茹叶辉任浩李若男安华章曹莉莉山东第一医科大学第一附属医院(山东省千佛山医院)肿瘤中心山东省临床免疫转化医学高校实验室山东省风湿免疫病转化医学重点实验室山东省肺癌研究所山东中医药大学第二临床医学院

目的探讨zdhhc5对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的调节作用以及对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法利用慢病毒感染和质粒瞬转技术对小鼠结肠癌细胞株MC38ova进行zdhhc5敲低和过表达，并进行zdhhc5和Zeste同源物增强子2(EZH2)双重敲低... 详细信息

目的探讨zdhhc5对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的调节作用以及对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法利用慢病毒感染和质粒瞬转技术对小鼠结肠癌细胞株MC38ova进行zdhhc5敲低和过表达，并进行zdhhc5和Zeste同源物增强子2(EZH2)双重敲低；实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测MC38ova细胞株敲低和过表达zdhhc5后IFN-Ⅰ表达水平，并检测同时敲低zdhhc5和EZH2后IFN-Ⅰ表达水平变化；免疫共沉淀实验检测zdhhc5与EZH2蛋白相互作用；细胞计数试剂盒(CCK 8)增殖实验、克隆形成实验和划痕实验检测MC38ova细胞株敲低zdhhc5后细胞增殖和迁移能力变化。结果 qRT-PCR结果显示，与NC-gfp组IFN-α(1.00±0.05)和IFN-β(1.00±0.06)mRNA水平相比，KD-zdhhc5#1-gfp组IFN-α(5.72±0.27,t=29.56,P59±0.03,t=42.90,Pzdhhc5#2组IFN-α(4.74±0.58,t=11.64,P=0.001)和IFN-β(3.85±0.34,t=13.97,Pzdhhc5组IFN-α(0.33±0.02,t=16.64,Pzdhhc5组IFN-α(1.82±0.06,t=8.15,P=0.001)mRNA水平升高。免疫共沉淀实验结果显示，FLAG-zdhhc5能够结合HA-EZH2蛋白。CCK 8结果显示，与NC-gfp组相比，KD-zdhhc5#1-gfp组细胞增殖能力降低(48 h,t=29.89,Pzdhhc5#2组细胞增殖能力降低(48 h,t=20.95,Pzdhhc5#1-gfp组(t=11.44,Pzdhhc5#2组(t=6.02,P=0.004)细胞增殖能力降低。划痕实验结果显示，与NC-gfp组和NC组相比，KD-zdhhc5#1-gfp组(t=5.78,P=0.029)和KD-zdhhc5#2组(t=15.22,P=0.004)细胞迁移能力降低。结论 zdhhc5通过与EZH2相互作用，抑制IFN-α和IFN-β表达，增强结肠癌细胞的增殖和迁移能力。

关键词： zdhhc5 Zeste同源物增强子2 Ⅰ型干扰素结肠癌

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棕榈酰转移酶zdhhc5蛋白在TRAIL诱导的细胞凋亡中的功能研究

棕榈酰转移酶ZDHHC5蛋白在TRAIL诱导的细胞凋亡中的功能研究

引用

作者：余钰云浙江大学

学位级别：硕士

目的:细胞凋亡的异常与癌症的发生发展密切相关,对其机制的探究对于癌症的治疗具有深远意义。肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,,TRAIL)是一种促凋亡配体,能够抑制肿瘤... 详细信息

目的:细胞凋亡的异常与癌症的发生发展密切相关,对其机制的探究对于癌症的治疗具有深远意义。肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,,TRAIL)是一种促凋亡配体,能够抑制肿瘤生长而不损伤正常宿主细胞。已知棕榈酰转移酶zdhhc蛋白的抑制可促进癌细胞死亡。然而到目前为止,棕榈酰转移酶zdhhc与细胞凋亡之间的关系尚未被阐明。在此,我们主要对定位于细胞膜上的棕榈酰转移酶家族成员zdhhc5蛋白在癌症中扮演的角色及其与TRAIL诱导的细胞凋亡之间的相关性进行探究。方法:首先,使用蛋白棕榈酰化抑制剂2-溴代棕榈酸(2‐BP)来处理人骨肉瘤细胞U2OS和宫颈癌细胞He La,利用SYTOX-Green染色法检测细胞死亡水平,利用Western blot技术分析TRAIL诱导的细胞凋亡水平及MAPK、NF-κB信号通路激活水平。随后利用CRISPR-Cas9技术在U2OS细胞中构建zdhhc5敲除型(zdhhc5-KO)细胞系,利用SYTOX-Green染色法、荧光细胞活性检测法(Cell Titer-Glo Assay)、Western blot及Annexin V-FITC/PI染色法来检测野生型与zdhhc5敲除型细胞内TRAIL诱导的细胞凋亡水平。同时利用Western blot及双荧光素报告酶系统(Luciferase)来检测野生型与zdhhc5缺失型细胞内TRAIL诱导的MAPK、NF-κB信号通路激活水平。结果:在2BP处理情况下诱导细胞凋亡的实验结果表明:(1)2BP处理可增加人骨肉瘤细胞U2OS和宫颈癌细胞He La对TRAIL诱导的细胞凋亡敏感性;(2)2BP处理显著抑制了TRAIL诱导的炎症信号通路的激活。随后,在zdhhc5缺陷细胞内诱导细胞凋亡的实验结果表明(1)zdhhc5的缺失可增加U2OS细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡敏感性;(2)TRAIL诱导的炎症信号通路在zdhhc5缺陷细胞中显著下调;(3)zdhhc5在Caspase级联效应的上游发挥作用。结论:我们的实验结果显示,2BP处理或zdhhc5的缺失增加了细胞由TRAIL诱导的细胞凋亡水平,同时下调了由TRAIL诱导的炎症信号通路激活水平。这一结果表明了棕榈酰转移酶家族成员zdhhc5的存在抑制了TRAIL诱导的细胞凋亡。进一步的实验表明,zdhhc5蛋白主要在Caspase级联效应的上游发挥作用。

关键词：细胞凋亡 TRAIL 2BP zdhhc5

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