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RNA结合蛋白Aly/REF输出因子通过上调Yes相关蛋白表达促进胃癌细胞的增殖和迁移

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中国生物化学与分子生物学报 2023年第4期39卷 622-630页

作者：李睿邵爽孟玮金丹郭纪伟滨州医学院附属医院消化内科山东滨州256603 滨州医学院附属医院检验科山东滨州256603 滨州医学院附属医院医学研究中心山东滨州256603

胃癌是一种常见的发病率高、起病隐匿、侵袭性强的消化道恶性肿瘤,其发病机制错综复杂。RNA结合蛋白Aly/REF输出因子(RNAbinding protein Aly/REF export factor, ALYREF)作为一种RNA胞嘧啶的5-甲基化修饰(m~5C)后的结合蛋白质,在调控RN... 详细信息

胃癌是一种常见的发病率高、起病隐匿、侵袭性强的消化道恶性肿瘤,其发病机制错综复杂。RNA结合蛋白Aly/REF输出因子(RNAbinding protein Aly/REF export factor, ALYREF)作为一种RNA胞嘧啶的5-甲基化修饰(m~5C)后的结合蛋白质,在调控RNA出核及稳定其表达的过程中具有关键作用;Yes相关蛋白(yes-associated protein, YAP)作为Hippo-YAP信号通路中的关键分子,调控各种恶性肿瘤的生长和转移。本文旨在探讨ALYREF与YAP在促进胃癌细胞增殖和迁移中是否存在相关性,并初步探索这两者之间的作用机制。本文在胃癌细胞AGS和MKN-45中运用RT-PCR和Western印迹方法检测相关基因表达;CCK8试验检测细胞增殖;划痕试验和Trans-well试验分别检测细胞迁移和侵袭。结果显示,过表达ALYREF后YAP的表达增加(P<0.05),并且促进细胞的增殖、迁移和上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)(P<0.05);靶向敲低YAP,细胞的增殖、迁移和EMT能力显著抑制(P<0.05);过表达ALYREF且靶向敲除YAP与单独过表达ALYREF相比,YAP的表达显著降低(P<0.05),且细胞的增殖、迁移和EMT能力同样得到抑制(P<0.05);靶向敲低ALYREF,细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力显著抑制(P<0.01)。综上所述,ALYREF通过上调YAP表达进而促进胃癌细胞的增殖和迁移。

关键词：胃癌增殖和迁移 RNA结合蛋白Aly/REF输出因子 Yes相关蛋白

缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/Yes相关蛋白(YAP)在非酒精性脂肪性肝病中的调控作用

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临床肝胆病杂志 2023年第9期39卷 2191-2197页

作者：张华寇萱萱邓婧鑫张建刚兰州大学基础医学院病理学研究所兰州730000

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是目前最为常见的慢性肝病,并与多种代谢性疾病密切相关,如2型糖尿病、胰岛素抵抗,以及与高血压和血脂异常相关的心脑血管并发症。NAFLD病因和病理机制复杂,微环境因素和基因表达调节异常存在于疾病进展的各... 详细信息

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是目前最为常见的慢性肝病,并与多种代谢性疾病密切相关,如2型糖尿病、胰岛素抵抗,以及与高血压和血脂异常相关的心脑血管并发症。NAFLD病因和病理机制复杂,微环境因素和基因表达调节异常存在于疾病进展的各个阶段,并通过累加效应促进疾病发展。缺氧诱导因子(HIF)是核转录因子、Yes相关蛋白(YAP)是转录辅助调节因子,二者通过调节肝脂质沉积与氧化应激,促进炎性因子释放,与NAFLD进展密切相关。本文对HIF-1α/YAP在NAFLD及其相关代谢性疾病进展中的作用进行综述,为探索NAFLD疾病进展过程中的相关治疗靶点提供理论依据。

关键词：非酒精性脂肪性肝病代谢综合征缺氧诱导因子1,α亚基 Yes相关蛋白

Yes相关蛋白在电离辐射后表皮干细胞分化中的作用

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中国药理学与毒理学杂志 2024年

作者：王丽彬陈俊飞袁方王景泽刘鹿王学武袁增强中国人民解放军总医院第五医学中心肿瘤内科南华大学衡阳医学院军事科学院军事医学研究院研究生协作培养基地军事科学院军事医学研究院黄山市黄山区人民医院兰陵县结核病防治所青岛大学基础医学院

目的研究Yes相关蛋白（YAP）在电离辐射后表皮干细胞分化中的作用。方法 (1)采用小鼠背部皮肤损伤后60Co γ射线（剂量为7Gy）局部照射法，建立电离辐射皮肤损伤小鼠模型；在造模后0,1,3,6,9,12 d收集创面皮肤组织制备蛋白或RNA样品，... 详细信息

目的研究Yes相关蛋白（YAP）在电离辐射后表皮干细胞分化中的作用。方法 (1)采用小鼠背部皮肤损伤后60Co γ射线（剂量为7Gy）局部照射法，建立电离辐射皮肤损伤小鼠模型；在造模后0,1,3,6,9,12 d收集创面皮肤组织制备蛋白或RNA样品，通过Western印迹法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测电离辐射创面愈合过程中YAP蛋白和mRNA变化。(2)用人表皮干细胞进行60Co γ射线（剂量为4或8Gy）建立电离辐射表皮干细胞模型；在辐射后4,12,24,36 h后收集细胞制备蛋白或RNA样品，通过RTqPCR检测细胞损伤后表皮干细胞分化标记物（K1,K10）及YAP mRNA变化，Western印迹法检测YAP蛋白水平。(3)使用慢病毒sh-YAP构建YAP敲降稳转细胞株，用Western印迹法验证sh-YAP的敲降效率。RTqPCR检测电离辐射后YAP敲低对分化标记物K1、K10 mRNA的影响。结果 (1)与小鼠对照组相比，电离辐射组小鼠在创面愈合过程中YAP蛋白量减少（P蛋白水平下降（P蛋白水平显著降低（P<0.01）；电离辐射后敲降YAP后表皮干细胞分化标记物K1,K10的mRNA水平明显降低（P<0.01）。结论 YAP调控电离辐射后创面愈合过程中表皮干细胞的分化。

关键词：电离辐射 Yes相关蛋白表皮干细胞细胞分化

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实用医学杂志 2023年第3期39卷 289-297页

作者：刘晶晶陈昌贵孙茹雪李立为湖北省武汉市中西医结合医院(武汉市第一医院)心血管内科重症监护室武汉430022

目的基于Yes相关蛋白(YAP)/同源异型盒转录因子(PROX1)通路探讨淋巴管新生在高血压心肌重构中的作用。方法将小鼠分为4组,每组10只:假手术(Sham)+YAP-KO组、TAC+YAP-KO组、Sham+WT组和TAC+WT组。通过超声心动图获得小鼠心动图参数。... 详细信息

目的基于Yes相关蛋白(YAP)/同源异型盒转录因子(PROX1)通路探讨淋巴管新生在高血压心肌重构中的作用。方法将小鼠分为4组,每组10只:假手术(Sham)+YAP-KO组、TAC+YAP-KO组、Sham+WT组和TAC+WT组。通过超声心动图获得小鼠心动图参数。通过免疫组织化学染色分析小鼠心脏组织中淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE1)表达。小鼠淋巴管内皮细胞(LECs)分为以下6组进行:对照(Control)组、AngⅡ+NC组、AngⅡ+si-YAP组、AngⅡ+YAP组、AngⅡ+si-YAP+Vector组和AngⅡ+si-YAP+PROX1组。通过伤口愈合试验和EDU染色检测LECs的迁移、增殖。结果与TAC+WT组相比,TAC+YAP-KO组小鼠心脏质量比、心肌细胞大小和间质纤维化面积均显著增加(P <0.05),和淋巴微血管密度显著降低(P <0.05)。与对照组相比,AngⅡ+NC组愈合面积、细胞增殖、管形成数量显著下降(P <0.05),并且AngⅡ+si-YAP组下降程度较AngⅡ+NC组更大(P <0.05),而AngⅡ+YAP组的愈合面积、细胞增殖、管形成数量较AngⅡ+NC组显著增加(P <0.05)。与AngⅡ+si-YAP+Vector组相比,AngⅡ+si-YAP+PROX1组LECs的愈合面积、增殖细胞和管形成数量显著增加(P <0.05)。结论 YAP/PROX1信号通路介导的淋巴管新生可能是一种治疗压力过载引起的心脏功能障碍的潜在靶点。

关键词： Yes相关蛋白同源异型盒转录因子淋巴管新生高血压心肌重构

靶向下调Yes相关蛋白抑制喉癌细胞Warburg效应和侵袭能力的研究

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2019年第11期54卷 857-862页

作者：唐晓敏孙宇轩李万举陈浩万光伦孙家强潘春晨孙敬武中国科学技术大学附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科合肥230001

目的探讨靶向下调Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)对Hep-2细胞能量代谢及侵袭能力的影响。方法构建慢病毒YAP载体下调Hep-2细胞系为下调组,同时建立无处理对照组和空载体组。检测各组细胞葡萄糖及乳酸水平以反映Warburg效应变... 详细信息

目的探讨靶向下调Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)对Hep-2细胞能量代谢及侵袭能力的影响。方法构建慢病毒YAP载体下调Hep-2细胞系为下调组,同时建立无处理对照组和空载体组。检测各组细胞葡萄糖及乳酸水平以反映Warburg效应变化情况,通过划痕实验、Transwell实验观察细胞迁移及侵袭情况,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹试验(Western Blot)技术检测上皮-间叶转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白vimentin蛋白及E-cadherin蛋白的表达水平。以Graphpad Prism 7.0绘图并进行统计学分析,两组计量资料比较采用t检验。结果YAP表达下调后,下调组的葡萄糖水平和乳酸水平分别为(18.51±1.72)%、103.40±8.32,均低于对照组[(41.20±1.11)%、743.69±19.49]及空载体组[(39.60±0.78)%、705.22±17.20],差异有统计学意义(葡萄糖水平:t1=19.20、t2=19.34,乳酸水平:t1=52.33、t2=54.56;P值均相关蛋白E-cadherin蛋白表达上调(6.16±0.11)、vimentin蛋白表达下调(1.08±0.09),相对于对照组(0.97±0.10、5.67±0.12)及空载体组(1.13±0.09、5.51±0.12)差异具有统计学意义(E-cadherin:t1=35.70、t2=36.28,vimentin:t1=29.91、t2=29.04;以上P值均<0.01)。结论靶向下调YAP通过抑制喉癌细胞Warburg效应及EMT进展,可以减弱喉癌细胞迁移、侵袭能力。

关键词：喉肿瘤 Yes相关蛋白糖酵解上皮间质转化肿瘤侵润

那可丁对肺癌细胞血管生成、Yes相关蛋白及敏感性的作用机制

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中国老年学杂志 2024年第2期44卷 377-382页

作者：汤顾航杜先凤姜力豪重庆市大足区人民医院重庆402360

目的探讨那可丁对肺癌细胞血管生成、Yes相关蛋白(YAP)及敏感性的作用机制。方法A549按照1.5×106/ml接种于96孔板中,分为肺癌组(无干预的A549细胞)、低浓度那可丁组(A549细胞与20μmol/L的那可丁共培养)、中浓度那可丁组(A549细胞与40... 详细信息

目的探讨那可丁对肺癌细胞血管生成、Yes相关蛋白(YAP)及敏感性的作用机制。方法A549按照1.5×106/ml接种于96孔板中,分为肺癌组(无干预的A549细胞)、低浓度那可丁组(A549细胞与20μmol/L的那可丁共培养)、中浓度那可丁组(A549细胞与40μmol/L的那可丁共培养)、高浓度那可丁组(A549细胞与80μmol/L的那可丁共培养),顺铂(DDP)组(A549细胞与20μmg/L的DDP共培养),采用Transwell法检测各组A549细胞侵袭数目;划痕实验检测划痕愈合率;观察各组A549细胞体外管腔形成数目;CCK-8检测DDP+那可丁对A549细胞抑制率;免疫印迹分别检测各组A549细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)2、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、YAP及磷酸化(p)-YAP。结果与肺癌组相比,不同浓度的那可丁组及DDP组的侵袭数目、划痕愈合率及管腔形成数目均显著降低(P0.05);DDP组及DDP+那可丁组在DDP浓度为0 mg/L时无统计学意义(P>0.05),在DDP浓度为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 mg/L时DDP+那可丁组的肺癌A549细胞抑制率均显著高于DDP组(P0.05)。结论不同浓度的那可丁均可发挥抗肺癌侵袭、转移及血管管腔形成作用,高浓度效果最佳,研究机制可能与抑制YAP表达而降低bFGF2、VEGF、MMP-9水平相关。

关键词：肺癌那可丁血管管腔 Yes相关蛋白顺铂

三阴性乳腺癌组织环指蛋白181及Yes相关蛋白的表达及其临床意义

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中华实验外科杂志 2022年第2期39卷 340-343页

作者：周瑞侯晋轩何玉琨刘九洋袁芊芊吴高松武汉大学中南医院甲乳外科 430071

目的探讨环指蛋白181(RNF181)及Yes相关蛋白YAP(YAP)在三阴性乳腺癌中表达及其意义。方法采用人类蛋白质图谱图像分类(Human Protein Atlas)数据库及Oncomine数据库分析RNF181在乳腺癌中的表达;采用Kmplot数据库分析RNF181与预后的关系... 详细信息

目的探讨环指蛋白181(RNF181)及Yes相关蛋白YAP(YAP)在三阴性乳腺癌中表达及其意义。方法采用人类蛋白质图谱图像分类(Human Protein Atlas)数据库及Oncomine数据库分析RNF181在乳腺癌中的表达;采用Kmplot数据库分析RNF181与预后的关系;采用免疫组织化学方法检测123例三阴性乳腺癌标本中RNF181和YAP的表达, 分析RNF181表达与临床病理特征及预后的关系;采用Cox回归分析影响三阴性乳腺癌的预后因素。结果通过数据库分析发现RNF181在乳腺癌组织中呈高表达, 三阴性乳腺癌患者的RNF181、YAP表达与预后呈负相关;123例三阴性乳腺癌中RNF181的阳性表达率[82.11%(101/123)]明显高于相对应癌旁组织中的阳性表达[25.2%(31/123), χ^(2)=80.104, P蛋白表达高于阴性的患者(χ^(2)=4.754, P相关(χ^(2)=4.236, P相关(P相关(R=0.348, P相关, 是影响TNBC预后的因素之一。RNF181与YAP表达呈正相关, 可能通过YAP发挥作用。

关键词：三阴性乳腺癌环指蛋白181 Yes相关蛋白

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针刺研究 2023年第11期48卷 1088-1094页

作者：梁晖阮甦王芳严年文王艳旭陈斌罗京刘佳静钟晓勇福建中医药大学附属人民医院神经内科福建中医药大学附属人民医院康复医学科福建中医药大学附属人民医院科研处福州350004

目的:探讨电针通过Yes相关蛋白(Yap)-视神经萎缩蛋白1(OPA1)信号轴激活线粒体融合功能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和电针+Ver组,每组12只。采用大脑中动脉闭塞法制备局灶性CIR... 详细信息

目的:探讨电针通过Yes相关蛋白(Yap)-视神经萎缩蛋白1(OPA1)信号轴激活线粒体融合功能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和电针+Ver组,每组12只。采用大脑中动脉闭塞法制备局灶性CIRI模型。电针组和电针+Ver组电针“百会”“神庭”,每次20 min,1次/d,干预7 d;电针+Ver组造模成功后1 h腹腔注射1次Verteporfin (10 mg/kg)。采用Zea Longa法评估神经功能缺损情况,TTC染色法评估各组大鼠脑梗死体积百分比;Western blot法及荧光定量PCR法检测梗死侧大脑皮层Yap、OPA1、线粒体融合素(Mfn)1、Mfn2蛋白和mRNA表达水平;Western blot法检测梗死侧大脑皮层凋亡蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平;免疫荧光染色检测梗死侧大脑皮层Yap、OPA1蛋白荧光表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑梗死体积百分比及神经功能评分升高(P蛋白表达显著降低(P蛋白表达升高(P蛋白表达降低(P蛋白表达升高(P蛋白表达升高(P<0.01),Yap及OPA1荧光表达水平上调(P<0.05)。结论:电针“百会”“神庭”可能通过Yap-OPA1信号轴激活线粒体融合功能并减轻CIRI大鼠神经功能损伤。

关键词：脑缺血再灌注损伤电针 Yes相关蛋白视神经萎缩蛋白1 线粒体融合

丹参素对银屑病样细胞Yes相关蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响

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中华皮肤科杂志 2020年第6期53卷 452-458页

作者：贾金靖莫秀梅刘俊峰王宁郑焱陈达灿西安交通大学第二附属医院皮肤科 710004 广州中医药大学第二附属医院皮肤科 510120

目的研究丹参素对M5刺激的HaCaT细胞(银屑病样细胞模型)增殖、凋亡的影响及与Yes相关蛋白(YAP)的关系。方法采用M5(含10μg/L的IL-1α、IL-17、IL-22、TNF-α、Oncostatin M)作用于HaCaT细胞48 h,制作银屑病样细胞模型,同时分别加入0(... 详细信息

目的研究丹参素对M5刺激的HaCaT细胞(银屑病样细胞模型)增殖、凋亡的影响及与Yes相关蛋白(YAP)的关系。方法采用M5(含10μg/L的IL-1α、IL-17、IL-22、TNF-α、Oncostatin M)作用于HaCaT细胞48 h,制作银屑病样细胞模型,同时分别加入0(对照组)、0.125、0.25、0.5 mmol/L丹参素刺激细胞,以未做处理的HaCaT细胞为空白对照组。实时定量PCR及Western印迹检测各组细胞YAP的表达;MTT法检测丹参素刺激细胞24、48、72 h时各组细胞的增殖活性;流式细胞仪检测丹参素对各组细胞周期及凋亡的影响,Western印迹检测各组细胞周期相关蛋白(cyclin A、cyclin B1、cyclin D、cyclin E)及凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、Bcl-2、BAX、p53、p21)的表达。多组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较用LSD-t检验。结果空白对照组与0(对照组)、0.125、0.25、0.5 mmol/L丹参素组细胞YAP mRNA、蛋白的相对表达水平及培养24、48、72 h时的增殖活力差异均有统计学意义(P蛋白的相对表达水平(1.78±0.06、1.49±0.32、1.27±0.04)及培养48 h时的细胞增殖活力(1.66±0.04、1.52±0.02、1.34±0.04)均低于对照组(mRNA:2.04±0.04,蛋白:2.10±0.06,活力:1.82±0.03,均P相关蛋白及凋亡相关蛋白相对表达差异均有统计学意义。结论丹参素可能通过抑制YAP的表达而抑制银屑病样细胞的增殖与促进其凋亡。

关键词：银屑病丹参素角蛋白细胞细胞增殖细胞凋亡 Yes相关蛋白