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yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

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国际流行病学传染病学杂志 2023年第5期50卷 331-336页

作者：程林芳杨帆刘福民姚航平吴南屏吴海波浙江大学医学院附属第一医院传染病重症诊治全国重点实验室国家感染性疾病临床医学研究中心感染性疾病诊治协同创新中心杭州310003

目的制备yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的特异性单克隆抗体,建立检测yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA方法。方法用yamagata系乙型流感病毒(B/Phuket/3073/2013)抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与... 详细信息

目的制备yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的特异性单克隆抗体,建立检测yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA方法。方法用yamagata系乙型流感病毒(B/Phuket/3073/2013)抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合,通过4次有限稀释获得阳性杂交瘤细胞并建株。将单克隆抗体1F7和2H6分别作为捕获抗体和检测抗体,建立一种检测yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA法。结果该方法中捕获抗体1F7在96孔板的包被量为40 ng/孔,检测抗体2H6工作浓度为100 ng/孔;该方法仅能与yamagata系乙型流感病毒发生反应,具有较强特异性。灵敏度分析显示,该方法对病毒尿囊液和病毒纯化HA蛋白最低检测值分别为2-1 HAU/100μL和1.22 ng/mL,具有较高灵敏度。重复性试验表明,该方法批内和批间重复性变异系数均小于5%。结论本研究建立的ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为yamagata系乙型流感病毒快速诊断及定量检测提供技术支持。

关键词：流感病毒B型 yamagata系病毒检测方法 ELISA 单克隆抗体特异性

2007年深圳市yamagata系B型流感病毒基因特性的分析

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中国人兽共患病学报 2008年第7期24卷 647-650页

作者：吕星程小雯何建凡吴春利房师松逯建华谷利妞赖剑伟深圳市疾病预防控制中心深圳518020

目的分析2007年深圳市yamagata系B型流感病毒血凝素(HA)基因的特性。方法将2007年深圳市分离到的yamagata系B型流感毒株进行血凝素HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用SIMMONIC软件和Mega软件对其进行分析。结果2007年在深圳... 详细信息

目的分析2007年深圳市yamagata系B型流感病毒血凝素(HA)基因的特性。方法将2007年深圳市分离到的yamagata系B型流感毒株进行血凝素HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用SIMMONIC软件和Mega软件对其进行分析。结果2007年在深圳市流行的yamagata系B型流感病毒根据197-199位氨基酸的差异可以划分为A、B、C3个分支。分支C在197位上有糖基化位点的增加,而分支A、B则未在该区域呈现出糖基化位点的特征性结构。此外与今年的国内代表株B/Fujianxinluo/54/06相比,除了40号位点上的氨基酸变异为共同存在外,其余大多数的氨基酸点变异是散发存在的。部分的变异位点处在HA1区的抗原表位,可能会导致病毒的抗原性改变。结论2007年在深圳市流行的yamagata系B型流感病毒与B/Fujianxinluo/54/06相比基因特性已发生变化,并呈现出多样性的变化趋势。

关键词： yamagata系 B型流感基因特性糖基化位点

2012年邯郸市乙型yamagata系流感病毒HA1基因变异分析

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中国病原生物学杂志 2014年第6期9卷 527-530页

作者：李燕霞郭瑞玲黄亮闫永飞邓健郭娜娜张治芳马燕霞李晓伟邯郸市疾病预防控制中心急性传染病防制科河北邯郸056008

目的研究邯郸市2012年流感监测中分离的yamagata系乙型流感毒株HA1的抗原性和基因特性，阐明HA1基因的变异与流感流行的关系。方法用MDCK细胞分离培养流感病毒，提取病毒核酸，采用RT—PCR方法特异性扩增病毒HA1基因，进行核苷酸序列测... 详细信息

目的研究邯郸市2012年流感监测中分离的yamagata系乙型流感毒株HA1的抗原性和基因特性，阐明HA1基因的变异与流感流行的关系。方法用MDCK细胞分离培养流感病毒，提取病毒核酸，采用RT—PCR方法特异性扩增病毒HA1基因，进行核苷酸序列测定，用DNAStar中Megalign软件进行分析。结果2012年分离的yamagata系乙型流感病毒与2008-2009年代表株B／Florida／4／2。06相比亲缘关系较远，核苷酸同源性为96．2％～96．8％，氨基酸同源性为96．5％～97．4％，HA1区9个位点氨基酸发生替换，其中6个参与抗原表位构成；与WHO推荐的2012～2013年疫苗株B／Wisconsin／01／2010相比亲缘关系近，核苷酸同源性为98．8％～99．4％，氨基酸同源性为97．4％～98．5％，有5个位点发生氨基酸替换，其中3个参与抗原表位的构成；与国家流感中心提供的标准抗血清的血凝抑制滴度≥1：640。结论邯郸市2012年分离的yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白HA1与B／Florida／4／2006相比已形成新的变种，与B／Wisconsin／01／2010相比也发生了新的变异，但尚不能确定是否形成yamagata系有代表性的新变种。

关键词：流感病毒B型 yamagata系基因序列分析

2014-2015年盐城地区乙型流感病毒yamagata系HA1基因变异分析

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现代预防医学 2016年第16期43卷 3028-3032页

作者：陈国清邵荣标李春香王瑶仇思婕陈玉宏盐城市疾病预防控制中心盐城市妇幼保健院

目的研究盐城市2014-2015年流感监测中分离的乙型yamagata系流感病毒血凝素HA1区的基因特性,揭示HA1基因的变异与流行的关系。方法将盐城市2014-2015年流感监测哨点医院以及流感暴发点采集的流感样病例标本进行核酸、病毒分离检测,选取2... 详细信息

目的研究盐城市2014-2015年流感监测中分离的乙型yamagata系流感病毒血凝素HA1区的基因特性,揭示HA1基因的变异与流行的关系。方法将盐城市2014-2015年流感监测哨点医院以及流感暴发点采集的流感样病例标本进行核酸、病毒分离检测,选取2014-2015年各5株乙型yamagata系毒株,采用一步法RT-PCR方法扩增HA1基因,扩增产物经纯化测序,采用相应的生物信息软件进行核苷酸、氨基酸序列比对及基因种系进化特征分析。结果抽取的10株乙型流感病毒的HA1基因与WHO推荐的疫苗株B/Wisconsin/1/2010相比,3个位点氨基酸替换具有普遍性,其中N116K位于抗原决定簇;与B/Massachusetts/2/2012相比,11个位点氨基酸替换具有普遍性,4个位点位于抗原决定簇。绘制的种系发生树显示,B/JSYC/1530/2014与B/Massachusetts/2/2012亲缘关系较近,其他9株与B/Wisconsin/1/2010亲缘关系较近。结论 2014-2015年盐城地区流行的乙型yamagata系流感病毒的HA1基因特性正逐渐发生变异,这些变异位点的积累很可能会导致流感病毒发生实质性的抗原性的漂移,加强流感病原学监测工作对及时发现新的流感病毒变异株有重要意义。

关键词：乙型流感 yamagata系 RT-PCR HA1基因序列分析

新余市2013年-2014年B型yamagata系流感病毒HA1基因特性分析

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中国卫生检验杂志 2015年第15期25卷 2570-2572页

作者：潘虹刘瑞弘文奇刘琴周银古熊英新余市疾病预防控制中心江西新余338000 江西省疾病预防控制中心江西南昌338025

目的了解2013年-2014年新余市yamagata系乙型流感病毒的序列特性和变异特点,分析WHO推荐流感疫苗株对人体的保护情况。方法选取新余市2013年-2014年通过狗肾传代细胞（MDCK）培养分离到的yamagata系乙型流感毒株9株,提取病毒RNA,反转录... 详细信息

目的了解2013年-2014年新余市yamagata系乙型流感病毒的序列特性和变异特点,分析WHO推荐流感疫苗株对人体的保护情况。方法选取新余市2013年-2014年通过狗肾传代细胞（MDCK）培养分离到的yamagata系乙型流感毒株9株,提取病毒RNA,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增HA1基因片段,对序列进行处理和特性分析。结果 2013年-2014年的乙型流感病毒均为B型yamagata系。9株流感毒株HA1区与疫苗推荐株B/Wisconsin/01/2010的核苷酸同源性为97.8%～99.4%,氨基酸替换数为3个～4个,其中8株均在3个相同的氨基酸位点发生变异;与代表株B/yamagata/16/1988的核苷酸同源性为94.4%～96.2%。B/Jiangxi Yushui/1221/2014与疫苗株B/Massachusetts/02/2012的核苷酸同源性为99.3%,氨基酸替换数为3个。结论新余市2013年-2014年B型yamagata系流感病毒都发生了抗原性变化,WHO推荐的2011年-2012年疫苗对88.89%的B型yamagata系流感仍有预防效果,当年度的疫苗株能很好地预防另外11.11%流感的流行。

关键词：乙型流感病毒血凝素基因 yamagata系进化分析

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中国流感疫苗接种所面临的挑战和应对策略

中华微生物学和免疫学杂志 2016年第1期36卷 1-2页

作者：舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

本期流感专栏刊出有关流感疫苗研究、生产和应用的4篇文章，其中涉及世界卫生组织推荐的北半球疫苗组分与我国流感流行病毒是否匹配的问题。根据对2014--2015监测年度中国H3N2亚型流感病毒和B型流感病毒病原学特征分析，比较了疫苗株与... 详细信息

本期流感专栏刊出有关流感疫苗研究、生产和应用的4篇文章，其中涉及世界卫生组织推荐的北半球疫苗组分与我国流感流行病毒是否匹配的问题。根据对2014--2015监测年度中国H3N2亚型流感病毒和B型流感病毒病原学特征分析，比较了疫苗株与流行病毒的匹配性。结果显示，世界卫生组织推荐的疫苗株与我国H3N2亚型流行株匹配性不好；在B型流感病毒方面，我国流行的B型yamagata系病毒与疫苗株匹配较好，但Victoria系病毒与四价疫苗的匹配性不佳。提示应结合我国流行病毒的抗原性和基因特性，选择与我国流行病毒匹配更好的疫苗株用于流感的预防。

关键词：流感疫苗疫苗接种中国 B型流感病毒 yamagata系 Victoria系世界卫生组织 H3N2亚型

2015-2017年盐城市乙型流感病毒HA1、NA基因分子特征

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中华疾病控制杂志 2020年第2期24卷 145-150页

作者：陈国清李春香王瑶李峰徐士林李长城邵荣标盐城市疾病预防控制中心病原微生物检验科盐城224000 盐城市妇幼保健院遗传室 224000

目的对盐城市2015-2017年流行的乙型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因进行分子进化特征研究。方法将盐城市2015-2017年流感监测哨点医院以及流感暴发点采集的流感样病例咽拭子标本进行核酸、病毒... 详细信息

目的对盐城市2015-2017年流行的乙型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因进行分子进化特征研究。方法将盐城市2015-2017年流感监测哨点医院以及流感暴发点采集的流感样病例咽拭子标本进行核酸、病毒分离检测定型,对选取的18株乙型流感病毒分离株采用一步法RT-PCR方法扩增其HA1基因和NA基因,扩增产物经纯化测序,采用生物信息软件从核苷酸、氨基酸以及分子进化层面对毒株进行分子特征分析。结果盐城市2015-2017年分离的乙型流感病毒HA1基因和NA基因聚类的分支关系基本一致,2015年yamagata系毒株位于yamagata Clade 3分支,属Phuket/3073类毒株;2016-2017年Victoria系毒株分布于Victoria Clade 1A分支,属Brisbane/60类毒株。yamagata系所有毒株在190-helix抗原表位均发生了D196N位点的变异;Victoria系毒株共涉及2个抗原表位,120-loop抗原表位的117、129位点,190-helix抗原表位的197、199位点。盐城株未发生系内、系间重配。18株分离株未发生NA蛋白酶活性位点以及耐药位点的变化。结论 2015年yamagata系毒株与疫苗株B/Phuket/3073/2013匹配性较好。2016-2017年Victoria系毒株HA1和NA抗原基因变异位点在积累,这些变异位点的积累很可能会导致流感病毒发生实质性的抗原性的漂移,降低与流感疫苗株的匹配度,减弱流感疫苗的保护作用。

关键词：乙型流感 yamagata系 Victoria系 RT-PCR HA基因 NA基因序列分析

2019年不同类型流感病毒在佛山地区流行特征分析

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病毒学报 2021年第3期37卷 541-547页

作者：陈绍森胡佩村郑伟强古勋清张海燕邹林南方医科大学附属佛山市第二人民医院佛山528000

2017-2018年间,流感病毒在我国流行态势严重,为探讨佛山地区流感病毒的流行特征,为佛山市流感的防控提供科学依据,本研究搜集2019年佛山市流感监测哨点医院采集的流感样病例标本,采用实时荧光RT-PCR检测流感病毒核酸,分析佛山市流感流... 详细信息

2017-2018年间,流感病毒在我国流行态势严重,为探讨佛山地区流感病毒的流行特征,为佛山市流感的防控提供科学依据,本研究搜集2019年佛山市流感监测哨点医院采集的流感样病例标本,采用实时荧光RT-PCR检测流感病毒核酸,分析佛山市流感流行病学数据库病人详细信息,分析流行趋势及病毒流行的类型,为制定流感的防控提供科学依据。结果显示:2019年共检测流感样病例咽拭子标本1356例,流感病毒核酸检测阳性率为25.52%,甲型流感病毒阳性率为19.17%,乙型流感病毒阳性率为6.34%。不同职业人群共18个,小学生(7.67%),幼托儿童(3.17%)流感病毒核酸检测阳性率较高。把年龄分成5个年龄段进行分析,流感阳性率最高的是25~59岁组与5~14岁组。2019年佛山地区主要检出新甲H1型、季H3型、BV型三种型别,1月份,12月份为流感活跃的两个高峰,各型别在不同的时间交替或共同流行。不同性别的人群流感阳性率差异无统计学意义。不同型别病毒株在不同性别人群间阳性率差异无统计学意义。本研究结果提示佛山地区主要以甲型流感流行为主,优势亚型为新甲H1型,季H3型,部分乙型流感患者,以BV型为主。流感病毒感染的重点人群是小学生与幼托儿童,不同类型的流感病毒,在不同性别人群间感染无差异。通过对2019年佛山市流感流行特征的分析可以为佛山市流感的防控提供科学依据。

关键词：甲型流感乙型流感新甲型流感H1N1 季节性甲型流感H3N2 Victoria系 yamagata系

珠海市2007-2008年乙型流感病毒基因特性分析

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中国人兽共患病学报 2010年第9期26卷 847-850页

作者：张丽荣林毅雄李红霞魏泉德张静涛方艳梅周兰兰郑予柯珠海市疾病预防控制中心珠海519000

目的了解珠海市近两年乙型流感病毒的基因变异情况。方法采集珠海市流感样病例样本进行流感病毒的分离和鉴定,并对分离到的乙型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行病毒血凝素HA1基因核苷酸序... 详细信息

目的了解珠海市近两年乙型流感病毒的基因变异情况。方法采集珠海市流感样病例样本进行流感病毒的分离和鉴定,并对分离到的乙型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行病毒血凝素HA1基因核苷酸序列测定,用Mega、DNA Star、GeneDoc软件对测序结果进行分析处理,并与WHO推荐的疫苗株基因序列进行比对。结果 2007-2008年分离的乙型流感毒株分属于yamagata系和Victoria系两个谱系,谱系内毒株间距离很近。yamagata系毒株与B/Brisbane/3/2007的核苷酸同源性极高,在99.4%~99.7%之间;Victoria系乙型流感病毒株与B/Malasia/2506/2004的核苷酸同源性亦很高,在98.6%~99.1%之间。与疫苗株和其它流行株相比,本次分离的两个谱系毒株均未发现核苷酸的丢失和插入,但均增加一个潜在的糖基化位点。结论珠海市人群交替流行着yamagata系和Victoria系两个抗原性不同的进化系的乙型流感病毒,病毒的基因发生了变异。2007-2008两年WHO推荐的乙型流感疫苗株与我地区当年流行株为不同谱系毒株,预防保护效果不好。

关键词：乙型流感病毒血凝素基因核苷酸序列 yamagata系 Victoria系