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yap蛋白与肿瘤

基础医学与临床 2014年第2期34卷 262-265页

作者：蒋宁顾恺牛远杰天津医科大学第二医院天津市泌尿外科研究所天津300211

Hippo-yap信号通路是新发现的生长控制信号通路,能够限制调结细胞的生长增殖,细胞凋亡,信号通路异常有利于肿瘤的发生。yap蛋白还参与调控AKT-mTORC、WNT和MAPK等信号通路,进而影响肿瘤细胞的生长和侵润转移。yap蛋白在多种类型的人类... 详细信息

Hippo-yap信号通路是新发现的生长控制信号通路,能够限制调结细胞的生长增殖,细胞凋亡,信号通路异常有利于肿瘤的发生。yap蛋白还参与调控AKT-mTORC、WNT和MAPK等信号通路,进而影响肿瘤细胞的生长和侵润转移。yap蛋白在多种类型的人类肿瘤中表达异常增加,或许成为肿瘤新的治疗靶点。

关键词： yap蛋白信号通路肿瘤

yap、TAZ蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

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上海口腔医学 2018年第4期27卷 415-418页

作者：涂敏松李逸松张雄杭州市第一人民医院口腔颌面外科浙江杭州310003 昆明医科大学附属第一医院整形外科云南昆明650031

目的:探讨yap、TAZ蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义。方法 :选取2014年2月—2017年3月保存的口腔鳞状细胞癌组织标本113例,选取癌旁组织(距癌组织>2 cm)作为对照,采用免疫组织化学染色法检测yap和TAZ蛋白的表达,比较其与临床病理特... 详细信息

目的:探讨yap、TAZ蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义。方法 :选取2014年2月—2017年3月保存的口腔鳞状细胞癌组织标本113例,选取癌旁组织(距癌组织>2 cm)作为对照,采用免疫组织化学染色法检测yap和TAZ蛋白的表达,比较其与临床病理特征的关系。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :癌组织yap和TAZ蛋白阳性表达率分别为65.49%和61.95%,显著高于癌旁组织(P4 cm的患者,yap蛋白阳性表达率分别为83.64%、80.33%、82.35%和82.61%,显著高于高分化、无淋巴结转移、临床Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm的患者(P4 cm的患者,TAZ蛋白阳性表达率分别为80.00%、85.29%和82.61%,显著高于高分化、临床Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm的患者(Pyap蛋白与TAZ蛋白表达呈正相关(r_s=0.571,Pyap和TAZ蛋白在口腔鳞状细胞癌中呈高表达,与肿瘤分化程度、肿瘤直径等临床病理特征有关,提示Hippo信号通路可能参与了口腔鳞状细胞癌的发生与发展。

关键词：口腔鳞状细胞癌 yap蛋白 TAZ蛋白 Hippo信号通路

Hippo信号通路核心蛋白yap在小鼠卵母细胞减数分裂中的作用

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生殖医学杂志 2022年第8期31卷 1111-1118页

作者：崔秋盈马雪山姚桂东路新乐毕钡钡胡琳莉郑州大学第一附属医院生殖医学中心郑州450052

目的探究Hippo信号通路的核心蛋白yap对小鼠卵母细胞减数分裂过程的影响及其可能的机制。方法收集5周龄雌性小鼠的生发泡(GV)期卵母细胞并随机分为3组进行相应处理,分别为对照组(仅使用M2培养液培养)、抑制剂组(使用含有1μmol/L Vert... 详细信息

目的探究Hippo信号通路的核心蛋白yap对小鼠卵母细胞减数分裂过程的影响及其可能的机制。方法收集5周龄雌性小鼠的生发泡(GV)期卵母细胞并随机分为3组进行相应处理,分别为对照组(仅使用M2培养液培养)、抑制剂组(使用含有1μmol/L Verteporfin的M2培养液培养)和激动剂组(使用含有6μmol/L XMU-MP-1的M2培养液培养),20枚/组。于体外培养4 h和12 h后在体视镜下观察统计各组生发泡破裂(GVBD)率和第一极体排出率,并使用实时定量PCR技术检测各组卵母细胞中Hippo信号通路主要成分yap1、Lats1和Tead1的mRNA表达水平,采用免疫荧光技术分析各组卵母细胞内yap蛋白的分布情况和对纺锤体、微丝帽等结构的影响。结果 yap1 mRNA在减数分裂的各个时期都有表达并且表达水平逐渐上升,Lats1 mRNA在GV、GVBD、MⅠ期表达量偏低,到了MⅡ期表达量显著增高(Pyap蛋白在GV期定位于细胞质内,细胞核中没有yap蛋白的分布。在随后的GVBD、MⅠ和MⅡ期中,yap蛋白均匀地分布在卵母细胞胞质中;体外培养12 h后,抑制剂组与对照组相比第一极体排出率相近,而激动剂组与对照组相比第一极体排出率显著下降(Pyap蛋白的活性增强会破坏小鼠卵母细胞的纺锤体结构和阻碍微丝帽的形成,进而导致其阻滞于第一次减数分裂中期。

关键词：卵母细胞减数分裂 Hippo信号通路 yap蛋白

yap/TAZ蛋白与Stanford A型主动脉夹层患者术后院内死亡风险的研究

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中华胸心血管外科杂志 2020年第5期36卷 278-283页

作者：姜文剑薛源张宏家首都医科大学附属北京安贞医院心脏外科北京市心肺血管疾病研究所 100029 首都医科大学附属北京朝阳医院心脏外科 100016

目的探索Yes相关蛋白(yap)和包含WW结构域的转录调节蛋白1(TAZ)与Stanford A型主动脉夹层(STAAD)患者术后院内死亡风险之间的关系。方法使用β-aminopropionitrile monofumarate(BAPN)小鼠STAAD模型研究yap/TAZ蛋白在其外周血中的变化。... 详细信息

目的探索Yes相关蛋白(yap)和包含WW结构域的转录调节蛋白1(TAZ)与Stanford A型主动脉夹层(STAAD)患者术后院内死亡风险之间的关系。方法使用β-aminopropionitrile monofumarate(BAPN)小鼠STAAD模型研究yap/TAZ蛋白在其外周血中的变化。2016年7月至2016年12月在首都医科大学附属北京安贞医院接受常规体检的139例健康人的血样作为对照组,接受外科手术的95例STAAD患者纳入研究队列,主要的结局变量是术后院内死亡,并将其血样作为试验组。使用单因素分析确定STAAD术后院内死亡的风险因素,并使用多元回归分析模型对患者血液中TAZ蛋白水平与术后院内死亡之间的关系进行分析。结果与对照组相比,BAPN诱导的STAAD模型小鼠和STAAD患者血液中的yap水平变化不大,但是TAZ蛋白的浓度却显着增加。多元回归模型分析结果显示:在原始模型中,TAZ蛋白水平与院内死亡呈现正相关(OR=1.327,95%CI:1.014~1.737,P=0.0392)。在模型Ⅰ和模型Ⅱ中发现了类似的结果(OR=1.348,95%CI:1.010~1.803,P=0.0429;OR=1.353,95%CI:1.008~1.816,P=0.0442)。结论STAAD患者术前血液中高水平的TAZ蛋白预示着手术效果可能不佳,且TAZ蛋白水平≥13 ng/ml的患者术后院内死亡风险较高。

关键词： Stanford A型主动脉夹层 yap蛋白 TAZ蛋白术后院内病死率

yap蛋白通过调控TGF-β信号通路促进成人T细胞白血病发生的机制研究

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YAP蛋白通过调控TGF-β信号通路促进成人T细胞白血病发生的机制研...

作者：王雍浙江师范大学

学位级别：硕士

人类T细胞白血病1型病毒（Human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1）是一种逆转录病毒,它的感染可引起成人T细胞白血病（Adult T-cell leukemia,ATL）的发生。HTLV-1病毒除了表达病毒结构蛋白gag、pol和env之外,还编码了包括p12、p2... 详细信息

人类T细胞白血病1型病毒（Human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1）是一种逆转录病毒,它的感染可引起成人T细胞白血病（Adult T-cell leukemia,ATL）的发生。HTLV-1病毒除了表达病毒结构蛋白gag、pol和env之外,还编码了包括p12、p21、p30、p13、Tax和HBZ等具有调节功能的蛋白。其中Tax蛋白是HTLV-1病毒的关键蛋白,它能够通过调控肿瘤细胞内的多条信号通路促进肿瘤的发生。有研究显示,Tax能够抑制TGFβ（Transforming Growth Factorβ）信号通路对肿瘤细胞生长的负调控作用,从而促进ATL细胞的恶性增殖。然而在ATL发展的后期,Tax的表达会逐渐下降甚至不表达。因此,在ATL后期肿瘤细胞内是通过何种机制抑制TGFβ信号通路,从而促进ATL细胞恶性增殖的呢?已有报道显示,yap是Hippo信号通路的关键蛋白。在哺乳动物体内,Hippo/yap通路除了能调控器官大小和细胞再生外,它还能通过调控其他信号通路从而影响细胞的生长。而且已有报道显示TGFβ及Hippo/yap信号通路可能存在相互作用。据此,我们推测:在ATL细胞中,yap是否可以通过调控TGFβ信号通路,从而促进成人T细胞白血病的发生呢?为了证明这一推断并阐明其分子机制,本课题从以下几个方面进行研究:第一部分:yap在ATL细胞株中高表达及其分子机制我们首先通过RT-PCR技术检测了ATL细胞株中yap mRNA的表达情况。我们发现,相较于对照组细胞株（Hut78、MOLT-4、Jurkat）,ATL细胞株（MT-4、TL-Om-1、ATL-T、ATL-2、MT-1、MT-2）中yap基因存在不同程度的高表达。为了进一步研究yap在ATL细胞株中高表达的分子机制,我们进行了双荧光素酶报告基因实验。结果表明,HTLV-1编码的Tax蛋白能够激活yap的启动子活力。同时,Western bolt实验进一步证实了,在T细胞中过表达Tax蛋白可以促进yap蛋白的表达。第二部分:yap对TGFβ信号通路的调控作用为了研究yap对TGFβ信号通路是否具有调控作用,我们首先通过报告基因实验检测发现,yap能够显著抑制TGFβ信号通路。我们还利用不同的TGFβ信号通路报告基因质粒以及多种细胞株进行实验,均证实了yap对TGFβ信号通路的抑制作用。随后,我们通过慢病毒感染的方式构建了沉默yap及过表达yap的ATL-T稳定株,并利用报告基因实验检测稳定株中的TGFβ信号通路激活情况。实验结果显示,在yap沉默稳定株中,随着ATL-T细胞中yap表达量的下调,TGFβ信号通路的激活有所上调。而在yap的过表达稳定株内,TGFβ信号通路的活化受到显著抑制。因此,该部分实验进一步证明了在ATL-T细胞中TGFβ信号通路受到了yap的负调控。第三部分:yap调控TGFβ信号通路的分子机制为了研究yap调控TGFβ信号通路的分子机制,我们首先运用Western blot实验检测yap对TGFβ信号通路关键蛋白Smad3的半衰期是否存在影响。结果显示yap对Smad3蛋白的降解无任何影响。随后,我们通过免疫共沉淀实验发现,yap能与Smad3蛋白结合。我们还利用yap及Smad3的突变体进行免疫共沉淀实验发现,yap蛋白的WW1及部分TAD结构域参与了与Smad3的结合,且yap蛋白主要作用于Smad3蛋白的MH2结构域。我们随后发现yap并不影响Smad3与Smad4、及Smad7的结合作用。同时,报告基因实验显示,Smad3的共转录激活因子p300能回复被yap抑制的TGFβ信号通路,而且免疫共沉淀实验显示yap抑制Smad3与p300的结合。此外,免疫共沉淀实验还表明yap可加强抑制型Smad蛋白Smad7与TGFβI型受体的结合。第四部分:yap通过抑制TGFβ信号通路促进ATL细胞生长为了研究yap是否可以通过抑制TGFβ信号通路从而影响ATL细胞的生长,我们首先利用沉默yap的ED稳定株及过表达yap的ATL-T稳定株。通过MTT实验我们发现,过表达yap能够促进ATL-T细胞的生长。流式细胞术检测结果显示,沉默yap影响了ED细胞周期G1/S期的转换,进而影响细胞生长。随后,我们构建了过表达yap蛋白的Mv-1Lu细胞株。通过MTT实验检测发现,空白对照组Mv-1-Lu细胞在处理TGFβ后,细胞的死亡率会会随着TGFβ的浓度升高而逐渐上升。然而过表达yap的Mv-1Lu细胞在处理TGFβ的条件下细胞的死亡率并没有发生显著的改变。该结果提示,yap拮抗了TGFβ因子对细胞生长的抑制作用。最后,我们运用qRT-PCR技术检测发现,在ATL细胞株中过表达yap可显著抑制TGFβ下游靶基因——细胞周期抑制因子p15基因的表达,从而促进细胞周期的转换以及细胞生长。综上所述,我们通过本

关键词：成人T细胞白血病 yap蛋白 TGFβ信号通路 Smad3蛋白 p15

yap蛋白和Survivin蛋白在结直肠癌的表达及意义

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YAP蛋白和Survivin蛋白在结直肠癌的表达及意义

作者：杨帆华中科技大学

学位级别：硕士

目的:研究yap(Yes-associated-protein)和Survivin在结直肠癌组织和癌旁正常组织的表达,探究两者在结直肠癌组织中的表达情况、两者的相关性及其与结直肠癌发生、发展及临床病理因素的联系。方法:运用免疫组织化学(SABC)法检测yap和Surv... 详细信息

目的:研究yap(Yes-associated-protein)和Survivin在结直肠癌组织和癌旁正常组织的表达,探究两者在结直肠癌组织中的表达情况、两者的相关性及其与结直肠癌发生、发展及临床病理因素的联系。方法:运用免疫组织化学(SABC)法检测yap和Survivin在65例结直肠癌组织及20例结直肠癌癌旁正常组织中表达情况,并结合临床病理学资料进行统计分析。结果:1.yap在结直肠癌的阳性表达率(63.08%)显著高于正常组织的阳性表达率(10%),结直肠癌组织yap的表达与正常组织中的yap表达相比具有统计学意义,pyap蛋白的表达与分化程度、TNM分期及是否有淋巴结转移有关(p0.05);3.Survivin在结直肠癌的阳性表达率(60%)显著高于正常组织的阳性表达率(15%),在结直肠癌组织中Survivin的表达与正常组织中其表达相比具有统计学意义,p蛋白的表达与分化程度、TNM分期及是否有淋巴结转移有关(p0.05);5.在统计学相关性分析显示,yap和Survivin蛋白表达正相关(r=0.351,pyap在结直肠癌中的阳性表达率显著高于正常组织,并且与结直肠癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,提示yap可能促进结直肠癌的发生发展,并在肿瘤的侵袭和转移中起重要作用;2.Survivin在结直肠癌中的阳性表达率显著高于正常组织,并且与结直肠癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,提示Survivin可能促进结直肠癌的发生发展,并在肿瘤的侵袭和转移中起重要作用;3.在结直肠癌中,yap可能促进Survivin的表达,两者的表达可能成正相关。yap的异常激活可能诱导Survivin的过表达。

关键词：结直肠癌 yap蛋白 Survivin蛋白免疫组织化学

yap蛋白对NF-κB信号通路的调控及其分子机制研究

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YAP蛋白对NF-κB信号通路的调控及其分子机制研究

作者：张熠玲浙江师范大学

学位级别：硕士

成人T细胞白血病（adult T-cell leukemia,ATL）是一种恶性淋巴系增殖性肿瘤疾病,其病原体为人类T细胞白血病病毒1型（human T-cell leukemia virus type1,HTLV-1）。在ATL的发生过程中,HTLV-1编码的关键病毒蛋白Tax能够参与激活多条与... 详细信息

成人T细胞白血病（adult T-cell leukemia,ATL）是一种恶性淋巴系增殖性肿瘤疾病,其病原体为人类T细胞白血病病毒1型（human T-cell leukemia virus type1,HTLV-1）。在ATL的发生过程中,HTLV-1编码的关键病毒蛋白Tax能够参与激活多条与肿瘤形成相关的信号通路。有研究表明,Tax通过激活NF-κB信号通路从而促进ATL细胞的恶性增殖,进而导致ATL的发生。然而,在ATL发生后期,Tax由于表观遗传学或非表观遗传学的方式导致其表达下降甚至不表达,而NF-κB信号通路仍然持续激活。这表明在ATL中还存在其他的分子机制维持NF-κB信号通路的激活。越来越多的研究发现,Hippo信号通路的关键蛋白yap在多种肿瘤中存在高表达,且Hippo信号通路不仅与器官的大小和细胞的再生有关,还与体内的多条信号通路存在交互作用,从而影响了肿瘤的生长。据此,我们推测:在ATL细胞中,yap是否可以通过参与NF-κB信号通路的调控,从而促进肿瘤细胞的生长呢?为了探究yap对NF-κB信号通路的调控作用及其分子机制,本课题从以下几方面开展研究:第一部分:yap在ATL中高表达首先,我们通过qRT-PCR检测了HTLV-1阳性细胞株ATL-T、ATL-2、MT-1、MT-2、MT-4、TL-Om1,HTLV-1阴性对照细胞株MOTL-4、Hut78、Jurkat及PHA刺激的正常人外周血单核细胞中yap基因的表达情况。结果显示,在ATL细胞株中yap基因高表达。随后我们运用Western blot进一步从蛋白水平验证了yap在ATL细胞中存在高表达。最后,我们在ATL临床病人样品中运用qRTPCR检测了yap基因的表达情况,结果显示,在ATL临床病人样品中,yap存在高表达。第二部分:yap对NF-κB信号通路的调控作用为了研究yap对NF-κB信号通路的调控作用,我们首先通过报告基因实验检测了yap对Tax介导的NF-κB信号通路的影响。实验结果显示yap单独不能激活NF-κB信号通路,但能促进Tax介导的NF-κB信号通路。前期研究表明Tax同时参与经典和非经典NF-κB信号通路的激活。为了研究yap是否能同时对两条NF-κB信号通路产生作用,我们运用报告基因实验分别检测了yap对p52介导的非经典NF-κB信号通路和p65介导的经典NF-κB信号通路的作用。结果显示,yap对p52介导的非经典的NF-κB信号通路无明显作用,但能显著激活p65介导的经典NF-κB信号通路。随后,我们构建了沉默及过表达yap的ATL-T稳定株,在T细胞中验证yap对经典的NF-κB的作用。结果表明,在沉默yap的稳定株中,随着yap表达量的下降,NF-κB信号通路的激活有所下降。在过表达yap的稳定株中,NF-κB信号通路得到进一步的激活。因此,上述结果表明ATL-T细胞中yap参与激活了经典的NF-κB信号通路。第三部分:yap调控NF-κB信号通路的分子机制研究为了研究yap调控NF-κB信号通路的分子机制,我们首先运用Western blot实验检测yap对NF-κB信号通路关键蛋白p65的稳定性是否产生影响。结果显示yap对p65的蛋白稳定性无明显作用。随后,我们通过免疫共沉淀实验发现yap能与p65结合。免疫荧光检测发现yap与p65蛋白共定位在细胞核中。在利用yap及p65的突变体进行免疫共沉淀实验中我们发现,yap主要通过其TAD结构域参与了与p65的结合,而p65主要通过RHD同源结构域与yap产生互作。随后我们发现yap本身不能与p50结合,但yap能够促进p65与p50二聚体的形成。此外,我们通过免疫荧光实验发现yap能够促进p65的入核。第四部分:yap调控ATL细胞中NF-κB下游靶基因的表达为了研究yap是否可以通过激活NF-κB信号通路从而对NF-κB信号通路下游靶基因的表达产生影响,我们首先利用yap抑制剂VP处理ATL-T细胞。通过RT-PCR实验我们检测发现,当yap的功能被抑制时,NF-κB下游靶基因TNFα、ICAM-1、CCR7、IL2RA、IRF4,IRF1、VEGF的表达明显下调。这一结果表明,yap能够对NF-κB下游的靶基因产生调控从而影响ATL的发生与发展。综上所述,在本研究中我们发现,yap在ATL中高表达,而且yap异常表达可以激活ATL细胞中NF-κB信号通路。机制研究显示,yap可以与p65结合,同时,yap能够加强p65与p50的结合并促进p65的入核,进而激活NF-κB信号通路。最后,研究证明yap可以对NF-κB下游的靶基因产生调控,最终影响ATL的发生。本研究为阐明在ATL后期Tax非依赖的NF-κB通路持续激活的分子机制提供了新的思路,同时还将为ATL的临床诊断及治疗提供新的靶点和策略。

关键词：成人T细胞白血病 NF-κB信号通路 yap蛋白 p65蛋白

yap蛋白调控HTLV-1病毒转录的分子机制研究

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YAP蛋白调控HTLV-1病毒转录的分子机制研究

作者：邹丰浙江师范大学

学位级别：硕士

成人T细胞白血病(Adult T-cell leukemia,ATL)是一种由人类T淋巴细胞白血病病毒1型(Human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1)感染引起的恶性肿瘤疾病。HTLV-1通过病毒编码调节蛋白影响宿主细胞的功能,HTLV-1病毒主要编码一些结构基... 详细信息

成人T细胞白血病(Adult T-cell leukemia,ATL)是一种由人类T淋巴细胞白血病病毒1型(Human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1)感染引起的恶性肿瘤疾病。HTLV-1通过病毒编码调节蛋白影响宿主细胞的功能,HTLV-1病毒主要编码一些结构基因如gag、pol、env,以及包括Tax、HBZ、Rex、p12、p13、p30在内的调节基因。其中Tax蛋白在HTLV-1病毒转录中起到重要作用,促进ATL发生。Hippo/yap信号通路首先在果蝇中被发现,yap作为Hippo通路关键蛋白在ATL发生过程中也具有重要作用,而yap蛋白如何影响HTLV-1病毒转录的功能及其分子机制尚未阐明。前期研究表明,在ATL发生过程中,Hippo通路被抑制而yap蛋白高表达,且yap与Tax蛋白互作。因此,我们猜想yap是否通过对HTLV-1病毒编码关键蛋白Tax的调控,影响HTLV-1病毒转录,进而引起肿瘤发生呢?为了证实这一猜想,本课题主要探究yap蛋白对Tax介导的HTLV-1病毒转录的调控作用,进一步分析了该调控作用的分子机制和生理意义。主要研究内容如下:第一部分:yap蛋白对HTLV-1病毒启动子的调控作用为了探究yap蛋白对HTLV-1病毒启动子活力的影响,利用Jurkat、293T细胞及过表达/沉默yap的ATL-T稳定株,利用报告基因技术对yap调控Tax介导的HTLV-1 5’LTR及3’LTR启动子活力进行检测分析。首先通过双荧光素酶报告基因实验发现yap抑制Tax激活的5’LTR启动子活力,而对Tax激活的3’LTR启动子活力无影响。而且单独yap对5’LTR及3’LTR启动子活力均无影响。随后的报告基因实验结果显示yap同源物TAZ同样能抑制Tax激活的5’LTR启动子活力,且单独TAZ对5’LTR启动子活力无影响。紧接着探究了yap对不同信号通路调控机制。实验结果显示单独yap不激活NF-κB、AP-1信号通路,而yap进一步加强Tax激活的NF-κB信号通路,抑制Tax激活的AP-1信号通路,提示yap对Tax激活的不同信号通路调控机制有所差异,表明yap对Tax介导的HTLV-1启动子活力的不同调控作用是合理的。随后,利用过表达/沉默yap的ATL-T稳定株,结果显示在ATL-T细胞中外源性高表达yap后,抑制了Tax介导的5’LTR启动子活力,而在ATL-T中yap蛋白表达下降后,则激活了Tax介导的5’LTR启动子活力。最后,利用yap抑制剂VP处理293T细胞,该药物显著激活了Tax介导的5’LTR启动子活力。上述结果表明yap抑制Tax激活5’LTR启动子活力,而对HTLV-1 3’LTR启动子活力无影响。第二部分:yap调控HTLV-1病毒启动子活力的分子机制为了探究yap调控HTLV-1病毒启动子活力的分子机制,通过Co-IP实验发现Tax、CREB、p300与yap蛋白均有结合,且TAZ蛋白与Tax也有结合。利用yap突变体与Tax进一步分析yap与Tax的结合位点,免疫共沉淀结果表明参与Tax蛋白互作的主要是yap aa150-300结构域,而Tax与yap蛋白互作主要通过Tax aa1-319结构域。接着借助Co-IP实验发现yap不影响Tax与CREB互作,而yap显著抑制Tax与p300结合。报告基因结果显示yap抑制Tax激活的5’LTR启动子活力主要通过影响p300。进一步免疫荧光实验分析yap对Tax与p300在胞内定位的影响,发现yap抑制Tax与p300在核内的共定位,而且抑制了Tax诱导p300入核。此外,报告基因结果显示yap抑制Tax介导的5’LTR启动子活力不通过yap蛋白的磷酸化途径。第三部分:yap调控HTLV-1病毒基因转录及其生理效应为了研究yap调控HTLV-1病毒基因转录及其生理现象,首先利用VP药物处理ATL-T细胞株。研究发现VP处理抑制yap后,Tax基因表达水平上升,而HBZ基因表达水平无影响。随后利用高表达/沉默yap的ATL-T稳定株,Western blot实验检测结果显示高表达yap后抑制HTLV-1病毒编码蛋白p19、p24、gp46表达,而沉默yap后HTLV-1病毒编码蛋白表达水平增强。q RT-PCR结果再次表明高表达yap后抑制病毒编码基因p19、p24、gp46表达。最后病毒侵染实验发现,ATL细胞株中高表达yap后HTLV-1病毒侵染能力受到抑制,而在ATL细胞株中沉默yap后,显著增强了HTLV-1病毒侵染能力,表明yap通过抑制病毒转录,从而对HTLV-1病毒的侵染能力有抑制作用。综上所述,本研究发现yap抑制Tax介导的HTLV-1 5’LTR启动子活力,而对HTLV-1 3’LTR启动子活力无影响。yap通过p300抑制Tax激活的5’LTR启动子活力,且yap抑制

关键词：成人T细胞白血病人类T淋巴细胞白血病病毒1型 yap蛋白 Tax蛋白

yap蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

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YAP蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

作者：曲巧燕青岛大学

学位级别：硕士

目的:检测正常结直肠粘膜组织、增生性息肉组织、腺瘤性息肉组织、腺癌性息肉组织中yap蛋白的表达情况,探讨yap蛋白的表达水平与临床各病理因素之间的关系及意义。方法:选取在青岛大学附属医院黄岛院区内镜室摘除的标本,15例正常结直肠... 详细信息

目的:检测正常结直肠粘膜组织、增生性息肉组织、腺瘤性息肉组织、腺癌性息肉组织中yap蛋白的表达情况,探讨yap蛋白的表达水平与临床各病理因素之间的关系及意义。方法:选取在青岛大学附属医院黄岛院区内镜室摘除的标本,15例正常结直肠粘膜组织、25例增生性息肉组织、40例腺瘤性息肉组织、40例腺癌组织,其中确诊为腺癌的患者均在我院行外科手术,术后病理结果与内镜下病理诊断相符。运用免疫组织化学EnVision法检测yap在上述组织标本中的阳性表达情况,采用半定量积分法,随机选取5个高倍视野进行观察,然后根据阳性细胞的百分比、染色强度进行评分。按照结直肠癌分化程度的不同分为高分化、中分化、低分化组,对yap的表达情况进一步分析,并探讨结直肠癌中yap的表达与临床各病理因素之间的关系。结果:yap在正常结直肠粘膜组织中的表达水平较低(6.7%),在结直肠增生性息肉组织、腺瘤性息肉组织、腺癌组织中的阳性表达率分别为16.0%、35.0%、62.5%,差异有统计学意义(c=21.955,P=0.000)。yap在高分化、中分化、低分化腺癌组织中的阳性表达率分别为40.0%、50.0%、83.3%,有明显的统计学差异(Pyap的阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤的部位、肿瘤的大小经统计学检验均无显著差异(P>0.05)。临床分期为III、IV期yap蛋白的阳性表达率为84.2%,较I、II期的52.4%高,Pyap阳性表达率为86.9%,显著高于无淋巴结转移组的41.2%,与肿瘤患者的淋巴结转移差异有统计学意义(Pyap信号通路参与结直肠癌的发展过程,yap蛋白在正常结直肠粘膜中不表达或低表达。但在良性组织包括增生性息肉、腺瘤性息肉和恶性腺癌组织中表达均升高,且恶性组织中阳性表达相对更明显,待深入研究后yap蛋白可作为结直肠癌早期筛查的肿瘤标志物。yap蛋白高表达与结直肠腺癌的分化程度是有关的,分化程度越低,yap蛋白的阳性表达率相应越高,我们可以凭借yap的表达水平的高低来大致预测患者的预后。yap表达水平与结直肠癌的临床分期、淋巴结转移有关,参与肿瘤的局部浸润及远处转移,对靶向抗肿瘤药物的研发及肿瘤耐药机制研究有一定的临床价值。

关键词： yap蛋白 Hippo信号通路结直肠癌结直肠息肉