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TNF-α通过TNF-R1促进小鼠肾上腺皮质细胞系y1凋亡

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南京医科大学学报（自然科学版） 2011年第3期31卷 364-368,373页

作者：夏海鸣方媛黄培林东南大学医学院病理学与病理生理学系江苏南京210009 东南大学附属第二医院生物治疗中心江苏南京210003

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对小鼠肾上腺皮质细胞(y1细胞)caspase8/3的影响是否主要通过TNF-R1。方法:小RNA干扰法下调y1细胞中TNF-R1基因的表达,分光光度法分别检测一定浓度TNF-α对y1细胞及TNF-R1基因干扰抑制后的y1(miRNA-y1)... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对小鼠肾上腺皮质细胞(y1细胞)caspase8/3的影响是否主要通过TNF-R1。方法:小RNA干扰法下调y1细胞中TNF-R1基因的表达,分光光度法分别检测一定浓度TNF-α对y1细胞及TNF-R1基因干扰抑制后的y1(miRNA-y1)细胞caspase8/caspase3影响。结果:miRNA-y1细胞TNF-R1基因的干扰效率为71.74%;TNF-α处理y1细胞后,细胞caspase8/3活性明显升高(Py1细胞,细胞caspase8/3活性与未处理组相比无显著差异(P>0.05)。结论:TNF-α对y1细胞caspase8/3活性的影响主要是通过TNF-R1受体实现的。

关键词：肿瘤坏死因子α y1细胞 caspase shRNA TNF-R1

TNF-α对小鼠肾上腺皮质细胞系y1皮质醇合成的影响

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江苏医药 2010年第19期36卷 2296-2299,I0001页

作者：夏海鸣方媛孙佳黄培林东南大学医学院内科学教研室南京市210009 东南大学附属第二医院东南大学医学院病理学与病理生理学系东南大学医学院传染病学教研室

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对小鼠肾上腺皮质细胞系y1皮质醇合成及其合成过程中的关键基因StAR的变化。方法 50U/ml的TNF-α或(和)10-9mol/L促肾上腺皮质激素(ACTH)在不同作用时间处理小鼠肾上腺皮质细胞系y1。台盼蓝拒染法检测细... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对小鼠肾上腺皮质细胞系y1皮质醇合成及其合成过程中的关键基因StAR的变化。方法 50U/ml的TNF-α或(和)10-9mol/L促肾上腺皮质激素(ACTH)在不同作用时间处理小鼠肾上腺皮质细胞系y1。台盼蓝拒染法检测细胞数目,放免法检测细胞皮质醇合成水平,RT-PCR检测类固醇急性调节蛋白相关基因(StAR)的表达变化。结果 50U/mlTNF-α或(和)10-9mol/LACTH处理y1细胞不同时间,发现TNF-α和ACTH共同作用后,皮质醇合成水平明显下降(P0.05);ACTH单独作用时y1细胞皮质醇的合成明显升高(P<0.05);StARmRNA表达明显升高(P<0.05)。结论 TNF-α与ACTH共同作用通过抑制StAR表达进而抑制皮质醇合成能力;而TNF-α单独作用无明显抑制作用,ACTH单独作用后其表达量则明显升高。

关键词：肿瘤坏死因子α 促肾上腺皮质激素 y1细胞类固醇急性调节蛋白相关基因

IL-6对小鼠肾上腺皮质细胞系y1合成皮质醇的影响

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东南大学学报（医学版） 2014年第4期33卷 456-460页

作者：文小平夏海鸣东南大学医学院江苏南京210009 东南大学附属第二医院江苏南京210003

目的:探讨白介素6(IL-6)对小鼠肾上腺皮质细胞系y1合成皮质醇能力及合成过程中类固醇急性调节蛋白(StAR)相关基因表达的影响。方法:100 ng·ml-1IL-6单独或联合10-9mol·L-1促肾上腺皮质激素(ACTH)处理y1细胞后,台盼蓝拒染法检测细胞活... 详细信息

目的:探讨白介素6(IL-6)对小鼠肾上腺皮质细胞系y1合成皮质醇能力及合成过程中类固醇急性调节蛋白(StAR)相关基因表达的影响。方法:100 ng·ml-1IL-6单独或联合10-9mol·L-1促肾上腺皮质激素(ACTH)处理y1细胞后,台盼蓝拒染法检测细胞活力,放免法检测细胞皮质醇合成量,实时荧光定量PCR法检测StAR mRNA表达水平。结果:IL-6单独或联合ACTH处理y1细胞后,皮质醇合成量增加(Py1细胞合成皮质醇的能力。

关键词：白介素6 y1细胞皮质醇细胞色素P450侧链裂解酶

TNFα对小鼠肾上腺皮质细胞系y1增殖、凋亡的影响

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东南大学学报（医学版） 2010年第1期29卷 81-85页

作者：方媛夏海鸣孙佳黄培林东南大学基础医学院病理学与病理生理学系江苏南京210009 东南大学附属第二医院江苏南京210003 东南大学临床医学院传染病学教研室江苏南京210009

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对小鼠肾上腺皮质细胞系y1增殖、凋亡的影响。方法:不同浓度、不同作用时间的TNFα处理小鼠肾上腺皮质细胞系y1;MTT法检测细胞的增殖;台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;分光... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对小鼠肾上腺皮质细胞系y1增殖、凋亡的影响。方法:不同浓度、不同作用时间的TNFα处理小鼠肾上腺皮质细胞系y1;MTT法检测细胞的增殖;台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;分光光度法检测细胞caspase8/3的变化。结果:不同浓度的TNFα处理y1细胞不同时间后,细胞的增殖能力明显下降(P细胞凋亡水平明显提高(P细胞caspase8/3水平明显升高(Py1细胞增殖,并通过提高caspase8/3的活性而诱导及促进细胞凋亡。

关键词：肿瘤坏死因子α y1细胞增殖凋亡 caspase8 caspase3

佛司可林促进小鼠肾上腺皮质瘤细胞皮质酮分泌的作用研究

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中国药理学通报 2015年第10期31卷 1408-1413页

作者：潘志强梁龙龙方肇勤上海中医药大学基础医学院上海201203

目的研究佛司可林(FSK)对小鼠肾上腺皮质瘤细胞皮质激素的促分泌作用。方法以y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,采用1、10μmol·L-1FSK处理y1细胞15min^24 h等不同时程,观察y1细胞生长形态变化,运用ELISA方法检测细胞分泌液皮质酮含量... 详细信息

目的研究佛司可林(FSK)对小鼠肾上腺皮质瘤细胞皮质激素的促分泌作用。方法以y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,采用1、10μmol·L-1FSK处理y1细胞15min^24 h等不同时程,观察y1细胞生长形态变化,运用ELISA方法检测细胞分泌液皮质酮含量,RT-q PCR方法检测相关基因mRNA表达,Western blot方法检测相关蛋白表达。结果 1μmol·L-1FSK干预y1细胞3 h后细胞形态开始皱缩并逐渐形成圆球状生长。与对照组比较,1μmol·L-1FSK治疗24 h后明显升高y1细胞皮质酮水平(Pyp11a1和皮质酮合成最后一步关键酶Cyp11b1基因表达(Py1细胞15 min^12 h不同时程后,发现1 h后即可明显增加Star基因表达,并呈现典型的时效关系(Py1小鼠肾上腺皮质瘤细胞对腺苷酸环化酶激活剂佛司可林具有强烈的应答反应,佛司可林是皮质激素分泌的强有效诱导剂。

关键词：佛司可林肾上腺皮质 y1细胞皮质酮类固醇激素合成酶 Star Cyp11b

黄柏酮通过影响线粒体功能抑制肾上腺皮质瘤细胞皮质酮合成的研究

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南京中医药大学学报 2021年第2期37卷 251-257页

作者：谢海纳潘志强上海中医药大学基础医学院上海201203

目的研究黄柏酮对肾上腺皮质激素合成与分泌的影响。方法体外培养y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞,采用2.5~160μmol/L黄柏酮干预细胞24 h,运用MTT法检测细胞活性;以80μmol/L黄柏酮处理细胞24 h后采用流式细胞术检测细胞周期,共聚焦显微镜检测... 详细信息

目的研究黄柏酮对肾上腺皮质激素合成与分泌的影响。方法体外培养y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞,采用2.5~160μmol/L黄柏酮干预细胞24 h,运用MTT法检测细胞活性;以80μmol/L黄柏酮处理细胞24 h后采用流式细胞术检测细胞周期,共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜变化;以ELISA法检测细胞分泌液皮质酮含量;以40~160μmol/L黄柏酮干预细胞24 h,80μmol/L黄柏酮干预细胞24~48 h,运用qPCR法检测皮质酮合成酶mRNA表达,Western blot检测其蛋白表达。结果与对照组比较,2.5~40μmol/L黄柏酮对细胞的抑制率约为35%(P细胞的抑制率为60%以上(P细胞显著增加并促进线粒体膜亮度增强(Pyp11a1、Cyp11b1、Hsd3b2、SF-1基因表达(Pyp21a1、Nr4a1、Nr4a2基因表达(Pyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Hsd3b2基因表达(PyP11A1蛋白表达,然而促进Star基因表达(P细胞皮质酮合成过程,可能与其阻滞细胞周期及影响线粒体膜上类固醇激素合成酶表达有关。

关键词：黄柏酮皮质酮 y1细胞肾上腺皮质类固醇激素合成酶

人参-黄芪与熟地-山茱萸影响肾上腺皮质瘤细胞皮质酮生成的比较研究

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世界科学技术-中医药现代化 2021年第10期23卷 3638-3645页

作者：谢海纳潘志强上海中医药大学基础医学院上海201203

目的研究“补气生津”人参-黄芪与“填精补肾”熟地-山茱萸对皮质激素生成的影响。方法采用0.25-8 g·L^(-1)人参-黄芪与0.25-8 g·L^(-1)熟地-山茱萸水煎醇沉液分别干预小鼠肾上腺皮质瘤细胞(y1 adrenocortical cell,y1细胞)48 h,采用... 详细信息

目的研究“补气生津”人参-黄芪与“填精补肾”熟地-山茱萸对皮质激素生成的影响。方法采用0.25-8 g·L^(-1)人参-黄芪与0.25-8 g·L^(-1)熟地-山茱萸水煎醇沉液分别干预小鼠肾上腺皮质瘤细胞(y1 adrenocortical cell,y1细胞)48 h,采用MTT比色法(MTT assay,MTT)检测细胞增殖,运用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞分泌皮质酮含量,实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测类固醇激素合成酶基因表达,免疫蛋白印迹法(Western blot,WB)检测蛋白表达。结果与空白组(Control,Con)比较,0.25-8 g·L^(-1)人参-黄芪和熟地-山茱萸均抑制y1细胞增殖(PyP11A1、CyP21A2、CyP11B1蛋白表达(PyP11A1、CyP21A2、CyP11B1蛋白表达(Pyp11a1基因表达(Pyp21a1基因表达(Pyp11b1基因表达(Py1细胞后,FSK不能诱导Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b11基因表达(P<0.01)。结论人参-黄芪促进皮质酮分泌,熟地-山茱萸抑制皮质酮分泌,主要通过调节类固醇激素合成酶表达发挥药效。

关键词：人参-黄芪熟地-山茱萸中药药对肾上腺皮质皮质酮 y1细胞

附子肉桂抑制小鼠肾上腺皮质瘤细胞皮质酮生成的研究

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上海中医药杂志 2020年第12期54卷 65-70页

作者：谢海纳潘志强上海中医药大学基础医学院上海201203

目的研究温热散寒中药药对"附子肉桂"对肾上腺皮质功能的影响。方法以y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,设置空白对照组,1μmol/L佛司可林(FSK)组,以及不同浓度附子肉桂水煎醇沉液组(0.25 g/L、1 g/L、4 g/L、8 g/L),干预y1细胞36 h或4... 详细信息

目的研究温热散寒中药药对"附子肉桂"对肾上腺皮质功能的影响。方法以y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,设置空白对照组,1μmol/L佛司可林(FSK)组,以及不同浓度附子肉桂水煎醇沉液组(0.25 g/L、1 g/L、4 g/L、8 g/L),干预y1细胞36 h或48 h。分别采用MTT检测细胞增殖,运用ELISA检测细胞分泌皮质酮含量,RT-qPCR检测类固醇激素合成酶基因表达,Western blot检测蛋白表达。结果与对照组(Con)比较,0.25 g/L、1 g/L、4 g/L、8 g/L附子肉桂组y1细胞活力被显著抑制(Py1细胞皮质酮分泌显著下降(Pyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1基因表达显著下调(PyP11A1、CyP21A2、CyP11B1蛋白表达。与FSK组比较,4 g/L附子肉桂抑制Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1基因表达后不能再被FSK诱导表达(P细胞活力和下调类固醇激素合成酶表达,以抑制肾上腺皮质功能。

关键词：肾上腺皮质皮质酮 y1细胞附子肉桂补肾中药

不同温补肾阳中药主要组分对小鼠肾上腺皮质瘤细胞增殖及皮质酮分泌的影响

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上海中医药大学学报 2016年第2期30卷 72-77页

作者：梁龙龙潘志强方肇勤刘小美卢文丽吴中华上海中医药大学基础医学院上海201203 上海中医药大学科技实验中心上海201203

目的：研究温补肾阳中药主要组分对小鼠肾上腺皮质瘤细胞增殖及皮质酮分泌的影响。方法：以y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,分别采用0.2~640μmol/L淫羊藿苷、仙茅苷、金丝桃苷、松果菊苷、松脂醇二葡萄糖苷、补骨脂素和耐斯糖干预y... 详细信息

目的：研究温补肾阳中药主要组分对小鼠肾上腺皮质瘤细胞增殖及皮质酮分泌的影响。方法：以y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,分别采用0.2~640μmol/L淫羊藿苷、仙茅苷、金丝桃苷、松果菊苷、松脂醇二葡萄糖苷、补骨脂素和耐斯糖干预y1细胞24~72 h;并以0.1%DMSO为对照组,佛司可林为诱导剂组;通过MTT法检测细胞增殖、q PCR检测细胞皮质酮合成酶基因表达、ELISA检测细胞上清液皮质酮水平。结果：y1细胞铺板0~72 h内,对照组细胞增殖明显,80~640μmol/L淫羊藿苷治疗72 h显著抑制y1细胞增殖,且呈现量效关系（P〈0.05）;640μmol/L松果菊苷治疗24 h、48 h和72 h均显著抑制y1细胞增殖（P〈0.05）;10~80μmol/L补骨脂素治疗48 h显著促进y1细胞增殖（P〈0.05）;大于320μmol/L补骨脂素治疗72 h显著抑制y1细胞增殖（P〈0.05）;然而,仙茅苷、金丝桃苷、松脂醇二葡萄糖苷、耐斯糖对y1细胞增殖无明显影响。基础状态下,与对照组比较,仅10μmol/L补骨脂素显著增强Cyp11b1基因表达（P〈0.05）;佛司可林显著促进各组Star、Cyp11a1和Cyp11b1基因表达及皮质酮分泌（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷、松果菊苷和补骨脂素对y1细胞增殖抑制作用与其浓度和作用时间有关,本研究中采用的温补肾阳中药主要组分对y1细胞皮质酮合成与分泌作用弱。

关键词：温补肾阳肾上腺皮质瘤皮质酮 y1细胞细胞增殖