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云南宣威肺腺癌细胞系(xwlc-05)染色体畸变初步分析

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云南宣威肺腺癌细胞系(XWLC-05)染色体畸变初步分析

作者：徐丽霞昆明医学院

学位级别：硕士

背景与目的:云南省宣威地区是我国肺癌高发地区之一,以女性高发为特征,女性肺癌死亡率居全国首位,本研究旨在系统地分析宣威肺腺癌细胞(xwlc-05)的染色体异常,并为高发区肺癌的防治提供依据。方法:制作xwlc-05和正常人淋巴细胞的染色... 详细信息

背景与目的:云南省宣威地区是我国肺癌高发地区之一,以女性高发为特征,女性肺癌死亡率居全国首位,本研究旨在系统地分析宣威肺腺癌细胞(xwlc-05)的染色体异常,并为高发区肺癌的防治提供依据。方法:制作xwlc-05和正常人淋巴细胞的染色体中期分裂相,以人正常染色体为探针进行染色体荧光原位杂交(Chromosome FISH)。荧光显微镜下观察记录和分析杂交信号的特征。结果:xwlc-05细胞株的整套染色体(1～22+X)中只有4号,18号和X染色体为正常,其余染色体均有异常情况存在,其共有15种易位存在:t(3;1),t(1;9;11),t(15;2),t(15;2;8),t(3;5),t(20;5),t(6;15),t(6;7),t(5;3;10),t(9;11;9),t(21;12,t(19;13,t(8;22;14),t(15;15),t(15:17)。结论:本研究证实了肺癌染色体变异的复杂多样性,其中1,3,5,6,8,9,15号染色体较频繁参与染色体间的易位,而15号染色体则是最频繁发生易位的染色体,其参与了5种易位。了解了宣威肺癌染色体畸变的基本情况,有助于了解肺癌染色体畸变的基本规律及肺癌特征性基因的筛选及定位克隆,进而从局部的基因图中遴选出结构、功能相关的基因进行分析,从中发现与肺癌相关的特征基因,为肺癌防治的提供可行方案。

关键词：肺腺癌 xwlc-05 G-带荧光原位杂交染色体畸变

云南宣威肺腺癌原代细胞和肺腺癌细胞株xwlc-05体外形态学比较

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昆明医学院学报 2011年第8期32卷 30-33页

作者：袁兵谭燕王盛兰赵珊王廷华张云辉昆明医学院附属昆华医院云南省第一人民医院呼吸内科云南昆明650032 昆明医学院神经科学研究所云南昆明650031

目的比较宣威肺腺癌原代细胞和已建立的宣威肺腺癌细胞株xwlc-05的形态学变化.方法用含10%胎牛血清的RPMI Medium1640培养基培养宣威肺腺癌细胞和xwlc-05,观察两者的形态学变化,比较不同时间点肺癌细胞数量变化,探讨其生长特性.结果培... 详细信息

目的比较宣威肺腺癌原代细胞和已建立的宣威肺腺癌细胞株xwlc-05的形态学变化.方法用含10%胎牛血清的RPMI Medium1640培养基培养宣威肺腺癌细胞和xwlc-05,观察两者的形态学变化,比较不同时间点肺癌细胞数量变化,探讨其生长特性.结果培养的肺癌原代细胞为贴壁成团片状生长,为多边形或类圆形,异型性明显;而xwlc-05细胞成翼状,多边形,增殖速度比本实验室培养肺癌原代细胞快.结论肺癌原代细胞形态学上不同于xwlc-05,有其自身生长特性.

关键词：肺癌原代培养 xwlc-05 形态学比较

宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力的比较研究

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昆明医学院学报 2011年第7期32卷 36-39,51页

作者：张云辉谭燕袁兵王盛兰赵珊王廷华云南省第一人民医院呼吸内科云南昆明650000 昆明医学院神经科学研究所云南昆明650031

目的比较宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力.方法体外培养宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取传代培养后1 d、3 d、5 d 3个时间点分别计数细胞,MTT检测3时间点细胞活力变化,并进行统计学分析... 详细信息

目的比较宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力.方法体外培养宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取传代培养后1 d、3 d、5 d 3个时间点分别计数细胞,MTT检测3时间点细胞活力变化,并进行统计学分析比较.结果宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株各时间点比较,培养1 d、3 d、5 d组的细胞数量逐渐增加,差异有统计学意义(P05);同时,宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株3 d组细胞活力较1 d组增加,而5 d组的细胞活力较3 d组下降,差异有统计学意义(P05).结论不同肺腺癌细胞株体外增殖和细胞活力不完全一致.

关键词： xwlc-05 A549 肺腺癌

MACC1基因沉默对肺癌细胞促血管生成的影响

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中国老年学杂志 2014年第14期34卷 3964-3966页

作者：袁兵汤琦张云辉许建彪廖凤谭燕黄云超云南省第一人民医院昆明医科大学第三附属医院云南昆明650118

目的探讨结肠癌转移相关基因(MACC1)特异性siRNA对肺癌细胞促进血管形成能力的影响。方法培养五株肺癌细胞株A549,xwlc-05,GLC,SPC-A-1,YTMLC,通过qPCR方法检测五株细胞中MACC1的mRNA水平,选择MACC1表达最高的肺癌细胞株,将其分为MACC1-... 详细信息

目的探讨结肠癌转移相关基因(MACC1)特异性siRNA对肺癌细胞促进血管形成能力的影响。方法培养五株肺癌细胞株A549,xwlc-05,GLC,SPC-A-1,YTMLC,通过qPCR方法检测五株细胞中MACC1的mRNA水平,选择MACC1表达最高的肺癌细胞株,将其分为MACC1-siRNA 1~3组、无义siRNA组及对照组,化学合成MACC1基因特异性siRNA,通过阳离子脂质体Lipofectamine 2000转染该细胞株,RT-PCR检测转染后各实验组肺癌细胞中MACC1基因表达量,细胞培养72 h后收集各组条件培养基接种鸡胚尿膜囊,观察其对血管形成影响。结果荧光定量PCR显示五株细胞系中宣威肺腺癌细胞xwlc-05 MACC1表达水平最高,SPC-A1肺腺癌细胞表达MACC1的水平最低;RT-PCR显示转染MACC1-siRNA 24 h后,siRNA 3组细胞MACC1 mRNA表达水平下调最明显,与空白对照组及无义siRNA组比较差异有统计学意义。siRNA 3组鸡胚尿囊膜新生血管面积较无义siRNA组及空白对照组减少,差异具有统计学意义。结论五株肺癌细胞中宣威肺腺癌细胞xwlc-05中MACC1表达水平最高,MACC1-siRNA能有效地封闭xwlc-05细胞MACC1基因的表达,使MACC1 mRNA表达水平下调,有效降低宣威肺腺癌细胞xwlc-05诱导鸡胚尿膜囊微血管形成的能力。

关键词：结肠癌转移相关基因小干扰RNA xwlc-05 鸡胚尿膜囊实验

苯并（a）芘对宣威女性肺腺癌细胞中Aurora-A蛋白表达影响的研究

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苯并（a）芘对宣威女性肺腺癌细胞中Aurora-A蛋白表达影响的研究

作者：高佳昆明医学院

学位级别：硕士

目的:研究有丝分裂激酶A(Aurora-A)蛋白在宣威女性肺腺癌细胞中的表达及苯并(a)芘对于宣威女性肺腺癌细胞中Aurora-A蛋白表达的影响。方法:1、将人Ⅱ型肺泡上皮细胞、人肺腺癌细胞(A549)及宣威女性肺腺癌细胞(xwlc-05)传至20代,采用流... 详细信息

目的:研究有丝分裂激酶A(Aurora-A)蛋白在宣威女性肺腺癌细胞中的表达及苯并(a)芘对于宣威女性肺腺癌细胞中Aurora-A蛋白表达的影响。方法:1、将人Ⅱ型肺泡上皮细胞、人肺腺癌细胞(A549)及宣威女性肺腺癌细胞(xwlc-05)传至20代,采用流式细胞仪检测三种细胞中Aurora-A蛋白的表达。2、用MTT法测定不同浓度苯并(a)芘对xwlc-05的抑制率,选择对xwlc-05生长抑制率小于15%的苯并(a)芘浓度。3、将xwlc-05细胞分为A、B两组,每组设N—N六种苯并(a)芘处理浓度,A组作用24小时,B组作用48小时,然后采用流式细胞仪检测(FCM)各处理组xwlc-05中Aurora-A蛋白表达的变化。结果:1、Aurora-A蛋白在宣威女性肺腺癌细胞xwlc-05中表达最强,在人肺腺癌细胞A549中次之,在人Ⅱ型肺泡上皮细胞中表达最弱(P＜0.05)。2、当苯并(a)芘浓度小于200umol/L时,对xwlc-05细胞生长的抑制率小于15%,故选用100umol/L、50umol/L、10umol/L、1umol/L、0.1umol/L及0.01umol/L六种不同浓度处理xwlc-05细胞。3、苯并(a)芘浓度为100umol/L时,对xwlc-05中Aurora-A蛋白的表达有抑制作用(P＜0.05);苯并(a)芘浓度为50umol/L、10umol/L、1umol/L、0.1umol/L时,对xwlc-05中Aurora-A蛋白的表达有增强作用(P＜0.05);苯并(a)芘浓度为0.01umol/L时,对xwlc-05中Aurora-A蛋白表达无影响(P＞0.05)。4、苯并(a)芘浓度为100umol/L时,作用48小时比作用24小时,对xwlc-05中Aurora-A蛋白表达的抑制作用更明显(P＜0.05);苯并(a)芘浓度为50umol/L、10umol/L、1umol/L、0.1umol/L时,作用48小时比作用24小时,对xwlc-05中Aurora-A蛋白表达的增强作用更明显(P＜0.05);苯并(a)芘浓度为0.01umol/时,作用48小时与作用24小时,Aurora-A蛋白的表达无差异(P＞0.05)。结论:1、Aurora-A蛋白在宣威女性肺腺癌细胞中表达水平较高;2、宣威女性肺腺癌细胞(xwlc-05)中Aurora-A蛋白的表达,先随着苯并(a)芘染毒浓度的降低而增强,后随着苯并(a)芘染毒浓度的降低而减弱;并与苯并(a)芘染毒时间成正比。

关键词： xwlc-05 Aurora-A蛋白苯并(a)芘流式细胞术

miR-218在个旧肺鳞癌和宣威肺腺癌细胞中调控机制的研究

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miR-218在个旧肺鳞癌和宣威肺腺癌细胞中调控机制的研究

作者：薛真真云南大学

学位级别：硕士

全世界每年因癌症死亡人数达700多万,而且这一数字还将快速上升。非小细胞肺癌(NSCLC)居全球癌症死因首位,多数患者确诊时已处于晚期,失去手术治疗机会。尽管临床治疗有了较大的进展,但预后仍不理想,5年的生存率较低。本文拟对云南省两... 详细信息

全世界每年因癌症死亡人数达700多万,而且这一数字还将快速上升。非小细胞肺癌(NSCLC)居全球癌症死因首位,多数患者确诊时已处于晚期,失去手术治疗机会。尽管临床治疗有了较大的进展,但预后仍不理想,5年的生存率较低。本文拟对云南省两个地方性非小肺癌的治病机制进行探索,以期为肺癌的诊断治疗提供帮助。本文针对microRNA-218对人肺腺癌细胞、个旧肺鳞癌细胞和宣威肺腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡的影响进行研究。通过(1)检测miR-218在几株目的细胞株中的表达情况;(2)采用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹检法测转染了miR-218 mimics质粒后的上述3株肺癌细胞中miR-218靶基因PTEN、BCL-2、BMI-1和YY-1的mRNA和蛋白的表达水平;(3)用MTT增殖法和细胞划痕实验分别检测转染了miR-218 mimics后3株肺癌细胞各自的增殖及迁移能力;(4)用透射电子显微镜和流式细胞法(FCM法)分别对3株肺癌细胞转染后的凋亡情况进行定性及定量分析的方法探索。结果显示在NSCLC中miR-218的表达与正常的肺上皮细胞中的miR-218表达相比较低;通过转染miR-218的mimics质粒后,肺癌的这3株细胞其转染组的miR-218水平都升高,相关抑癌分子PTEN和YY-1表达水平均升高,相关癌基因BCL-2和BMI-1表达水平均降低。与空白对照比,过表达组各株的功能在增长、转移等方面均显著降低,同时凋亡明显增加。结果表明miRNA-218 mimics的转入显著抑制了NCI-H157、YTMLC-90和xwlc-05的增长能力,诱导细胞坏死及凋亡;转染miR-218可显著抑制BCL-2和BMI1的表达并显著上调PTEN和YY1的表达。推测miRNA-218抑制肺癌的机制可能通过下调BCL-2、BMI-1基因及上调PTEN、YY1基因来介导。此外,通过普通肺癌与这三种肺癌分子机制的的分析比较,从分子遗传学的角度并不支持个旧肺鳞癌(YTMLC-90)和宣威肺腺癌(xwlc-05)是特殊种类的肺癌的判断。

关键词： miR-218 YTMLC-90 xwlc-05 过表达质粒

亚硒酸钠通过Keap1/Nrf2/GSH途径诱导宣威肺癌顺铂耐药细胞凋亡的研究

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亚硒酸钠通过Keap1/Nrf2/GSH途径诱导宣威肺癌顺铂耐药细胞凋亡的...

作者：李雨珊昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]1.构建人肺腺癌A549和云南宣威肺腺癌xwlc-05稳定顺铂耐药细胞株,分析其生物学特性。2.阐明亚硒酸钠诱导的宣威肺癌顺铂耐药细胞凋亡是否依赖于ROS的产生。3.研究亚硒酸钠是否通过调控Keap1/Nrf2/GSH途径诱导肺癌顺铂耐药细胞凋亡... 详细信息

[目的]1.构建人肺腺癌A549和云南宣威肺腺癌xwlc-05稳定顺铂耐药细胞株,分析其生物学特性。2.阐明亚硒酸钠诱导的宣威肺癌顺铂耐药细胞凋亡是否依赖于ROS的产生。3.研究亚硒酸钠是否通过调控Keap1/Nrf2/GSH途径诱导肺癌顺铂耐药细胞凋亡。[方法]1.通过体外低剂量维持及剂量递增法诱导人肺腺癌A549和云南宣威肺腺癌xwlc-05细胞顺铂耐药,构建A549/CDDP和xwlc-05/CDDP耐药细胞株;通过显微镜观察其形态学变化;通过MTT计算IC50和耐药指数,Western blot检测耐药标志蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),验证细胞的稳定耐药性;通过细胞功能学实验(增殖、划痕、克隆和侵袭实验),分析耐药细胞的恶性生物学特性。2.亚硒酸钠与顺铂单剂量和剂量梯度组合作用于xwlc-05/CDDP耐药细胞及xwlc-05亲本细胞,通过CompuSyn软件分析两药联合效应,寻找最佳组合浓度;亚硒酸钠单独或联合顺铂作用于xwlc-05/CDDP耐药细胞及xwlc-05亲本细胞后,通过流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况;采用RT-qPCR检测Bcl-2、Bax、caspase-3的mRNA表达情况,验证亚硒酸钠是否诱导线粒体途径的细胞凋亡;借助DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平,阐明亚硒酸钠诱导的细胞凋亡是否与ROS有关;在亚硒酸钠组加用ROS清除剂(NAC),通过流式细胞术检测细胞凋亡情况,进一步阐明亚硒酸钠诱导耐药细胞凋亡是否依赖于ROS产生。3.亚硒酸钠单独或联合顺铂作用于顺铂耐药细胞及亲本细胞,通过DTNB酶解法检测细胞中GSH的活性,验证亚硒酸钠介导ROS的产生是否与胞内GSH水平相关;通过RT-qPCR检测Keap1、Nrf2、GCLC的mRNA表达水平。亚硒酸钠处理组在Nrf2激动剂(NK-252)和Nrf2抑制剂(ML385)分别干预后,采用Western blot检测细胞中Nrf2、GCLC和caspase-3的蛋白表达水平,初步阐明亚硒酸钠是否通过Keapl/Nrf2/GSH途径诱导顺铂耐药细胞凋亡。[结果]1.成功构建xwlc-05/CDDP和A549/CDDP耐药细胞,其顺铂IC50分别为5.90μg/ml和15μg/ml,耐药指数分别为1.865和2.470,P-gp表达均显著上调。与亲本细胞相比,耐药细胞形态不规则,细胞体积明显增大,细胞质及胞内颗粒增多,多核及分叶核常见。细胞功能学实验显示xwlc-05/CDDP和A549/CDDP耐药细胞较其亲本细胞具有更强的增殖、迁移和侵袭能力(P05)。2.亚硒酸钠与顺铂的最佳联合效应浓度为亚硒酸钠0.5μg/ml+顺铂4μg/ml。亚硒酸钠对xwlc-05亲本细胞的增殖抑制与S期阻滞相关(P05),而在xwlc-05/CDDP耐药细胞中还能显著增加G2/M期阻滞(P05)。亚硒酸钠可显著提高xwlc-05/CDDP耐药细胞和xwlc-05亲本细胞中Bax/Bcl-2 mRNA的比值(P05),并诱导caspase-3 mRNA高表达(P05),表明亚硒酸钠通过内源性线粒体途径介导细胞凋亡。未经处理的xwlc-05/CDDP耐药细胞,其ROS水平明显高于xwlc-05亲本细胞(P05)。亚硒酸钠作用下,xwlc-05/CDDP耐药细胞及其亲本细胞中ROS的产生呈时间依赖性递增,且耐药细胞内ROS水平明显高于亲本细胞(P05)。NAC干预可显著逆转亚硒酸钠诱导的凋亡(P05),表明亚硒酸钠诱导肺癌顺铂耐药细胞的凋亡依赖于ROS产生。3.未经处理的xwlc-05/CDDP耐药细胞中GSH含量明显高于xwlc-05亲本细胞(P05),说明细胞内GSH水平与顺铂耐药相关。亚硒酸钠可显著降低xwlc-05/CDDP和xwlc-05细胞中的GSH水平(P05),表明亚硒酸钠诱导的ROS升高与GSH活性下调有关。亚硒酸钠作用下,xwlc-05/CDDP耐药细胞和xwlc-05亲本细胞中Keap1、Nrf2、GCLC mRNA表达水平下调(P05),表明亚硒酸钠可能通过抑制GSH活性介导ROS的产生。亚硒酸钠下调Nrf2、GCLC蛋白及上调caspase-3蛋白的作用可被Nrf2激动剂(NK252)所逆转(P05),初步阐明了亚硒酸钠通过Keap1/Nrf2/GSH途径诱导顺铂耐药细胞凋亡。[结论]1.采用体外低剂量维持及剂量递增法成功构建云南宣威肺癌xwlc-05/CDDP顺铂耐药细胞株。2.亚硒酸钠通过Keap1/Nrf2途径调节GSH水平,诱导肺癌顺铂耐药细胞发生ROS依赖的细胞凋亡。

关键词：亚硒酸钠顺铂耐药 xwlc-05 活性氧 Keap1/Nrf2/GSH