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稳定过表达xaf1基因对A2780卵巢癌细胞生物学功能的影响

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南方医科大学学报 2021年第5期41卷 760-766页

作者：刘娟刘星辰魏宝宝刘洁王悦华刘辉四川大学华西第二医院妇产科四川成都610041 四川大学出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室四川成都610041 成都市第六人民医院妇科四川成都610051 成都中医药大学附属医院妇科四川成都610075

目的构建稳定过表达xaf1基因A2780卵巢癌细胞株,并观察xaf1基因对卵巢癌细胞增殖、凋亡、细胞周期及对紫杉醇敏感性的影响。方法分别将质粒pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(+)-xaf1转染至卵巢癌细胞A2780,通过质粒抗性标记(遗传霉素G418)筛选得... 详细信息

目的构建稳定过表达xaf1基因A2780卵巢癌细胞株,并观察xaf1基因对卵巢癌细胞增殖、凋亡、细胞周期及对紫杉醇敏感性的影响。方法分别将质粒pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(+)-xaf1转染至卵巢癌细胞A2780,通过质粒抗性标记(遗传霉素G418)筛选得到阴性对照细胞株(A2780/Negative control,A2780/NC)和稳定表达xaf1的细胞株(A2780/xaf1);通过行细胞克隆形成实验和CCK8实验检测细胞增殖及对紫杉醇的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果成功构建了稳定表达xaf1的卵巢癌细胞A2780/xaf1,细胞形态无明显变化;与A2780/NC相比,A2780/xaf1克隆形成能力能力更低(P=0.0016),细胞贴壁后第1天和第3天增殖活性更低(P=0.009,0.0035),两组细胞的细胞周期分布差异存在统计学意义(P1),两两比较结果显示A2780/xaf1组G2-M期细胞百分比显著增加(P1)。在无凋亡刺激、无血清培养及紫杉醇诱导下,A2780/xaf1的凋亡率均比A2780/NC更高(P1);在不同紫杉醇浓度作用下,A2780/xaf1的增殖活性均显著低于A2780/NC(P1),且A2780/xaf1的紫杉醇半数抑制浓度显著低于A2780/NC。结论成功构建稳定表达xaf1的卵巢癌细胞A2780/xaf1;xaf1调控卵巢癌细胞A2780的增殖、凋亡及细胞周期,并增加了卵巢癌对紫杉醇的敏感性。

关键词：卵巢癌 xaf1基因细胞增殖紫杉醇细胞凋亡细胞周期

甲基转移酶抑制剂对肺腺癌细胞生长及xaf1基因表达影响的研究

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甲基转移酶抑制剂对肺腺癌细胞生长及XAF1基因表达影响的研究

作者：苏永超苏州大学

学位级别：硕士

目的:5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5– aza-2’-deoxycytidin,5-Aza-CdR）是一种甲基转移酶抑制剂,体外实验研究表明5-Aza-CdR能抑制多种肿瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡,在多种肿瘤细胞中促进不同肿瘤抑制因子高表达。xaf1是近年来研究发现的... 详细信息

目的:5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5– aza-2’-deoxycytidin,5-Aza-CdR）是一种甲基转移酶抑制剂,体外实验研究表明5-Aza-CdR能抑制多种肿瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡,在多种肿瘤细胞中促进不同肿瘤抑制因子高表达。xaf1是近年来研究发现的新型肿瘤抑制基因,因基因高甲基化在许多肿瘤细胞或组织中呈低表达。本研究旨在探明甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对于肺腺癌A549细胞增殖、凋亡等生物学行为及细胞中抑癌基因xaf1表达水平的影响,初步探讨甲基转移酶抑制剂对肺腺癌细胞生长增殖的影响及可能机制。方法:本实验通过培养肺腺癌A549细胞,分别以1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L的5-氮杂-2’-脱氧胞苷药物干预细胞,以此分为低浓度、中浓度、高浓度三组,并以相同体积的PBS、药物溶解介质干预细胞,分别作为空白组和对照组。分别于干预后24、36、48小时后采用MTT比色法检测细胞增殖情况变化,并于干预48h后用Annexin V/PI双染色法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。并于干预后48h采用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测细胞中xaf1mRNA的表达水平变化,采用蛋白免疫印记（Western Blot）检测细胞中xaf1蛋白表达水平变化;结果:MTT检测结果显示干预48h后1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L浓度组细胞增殖抑制率分别为0.35±0.03、0.53±0.04、0.64±0.02,较空白组及对照组明显增高（P＜0.01）,空白组与对照组之间无统计学意义（P＞0.05）,且同浓度组细胞增殖抑制率随药物作用时间延长而增高（P＜0.05）,FCM检测结果显示三种不同浓度组细胞凋亡率分别为7.85%±1.39%、15.06%±2.07%、22.43%±2.45%,较空白组（5.06%±1.03%）及对照组（4.99%±1.08%）增高（P＜0.05）,空白组与对照组之间无统计学意义（P＞0.05）。RT-PCR检测结果显示1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L组xaf1mRNA表达水平分别为3.19±0.71、2.11±0.86、1.41±0.24较空白组（3.96±0.78）及对照组（3.99±0.41）增强（P＜0.05）,高浓度组较低浓度组xaf1mRNA表达增强（P＜0.05）,中浓度组与其他两组之间、空白组及对照组之间无统计学意义（P＞0.05）;Western Blot结果显示三种不同浓度组的蛋白表达量分别为0.32±0.04、0.37±0.01、0.47±0.06较空白组（0.08±0.01）及对照组（0.09±0.03）增强（P＜0.05）,高浓度组较低浓度组中xaf1蛋白表达增强（P＜0.05）,中浓度组与其他两组之间无统计学意义（P＞0.05）,空白组及对照组之间无统计学意义（P＞0.05）。结论:甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷对肺腺癌A549细胞有增殖抑制和促进细胞凋亡的作用,同时上调A549细胞中抑癌基因xaf1的表达水平, 5-氮杂-2’-脱氧胞苷对A549细胞恶性生物学行为的这种逆转作用可能与其上调抑癌基因xaf1表达有关。

关键词： 5-氮杂-2’-脱氧胞苷肺癌A549细胞株细胞增殖细胞凋亡甲基化 xaf1基因

xaf1基因诱导胰腺癌细胞株BxPC3凋亡的实验研究

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中华胰腺病杂志 2009年第5期9卷 337-339页

作者：黄佳诸琦曹海霞姚玮艳章永平袁耀宗上海交通大学医学院附属瑞金医院消化内科上海200025

目的探讨Ad5／F35腺病毒介导的xaf1基因诱导胰腺癌细胞BxPC3凋亡及其可能的作用机制。方法将前期构建的重组腺病毒Ad5／F35-xaf1感染胰腺癌细胞BxPC3。采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹检测法检测感染前后BxPC3细胞xaflmRNA和蛋白表达的变... 详细信息

目的探讨Ad5／F35腺病毒介导的xaf1基因诱导胰腺癌细胞BxPC3凋亡及其可能的作用机制。方法将前期构建的重组腺病毒Ad5／F35-xaf1感染胰腺癌细胞BxPC3。采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹检测法检测感染前后BxPC3细胞xaflmRNA和蛋白表达的变化；运用Annexin—V／PI和TUNEL法检测细胞的凋亡率；免疫蛋白印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Caspase-8和Bcl-2蛋白的表达。结果Ad5／F35-xaf1感染后，BxPC3细胞的xaflmRNA和蛋白表达明显增高，与空白组和Ad5／F35-Null对照组比较，差异显著（P〈0．05）；两种方法检测的细胞凋亡率分别为（19．90±3．09）％、（9．29±2．13）％，较A（15／F35-Null组的（6，72±0．76）％、（2．73±0．51）％和空白组的（7．22±1．53）％、（1．56±0．47）％均有显著差异（P〈0．01）；Caspase-3、PARP、Caspase-8蛋白表达显著增强，Bcl-2表达降低。结论Ad5F35-xaf1重组腺病毒感染胰腺癌细胞BxPC-3能明显诱导细胞的凋亡，其机制可能是激活死亡受体途径和线粒体途径。

关键词：胰腺肿瘤腺病毒 xaf1基因细胞凋亡

慢病毒介导的xaf1基因过表达对放射抗拒人鼻咽癌细胞系CNE-2R放射敏感性的影响

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慢病毒介导的XAF1基因过表达对放射抗拒人鼻咽癌细胞系CNE-2R放射...

作者：武江波广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨肿瘤抑制基因xaf1对放射抗拒人鼻咽癌细胞系CNE-2R的生长、增殖、凋亡情况及对其放射敏感性的影响,为治疗鼻咽癌提供新的思路。方法:本研究利用慢病毒转染CNE-2R细胞,继而运用qRT-PCR实验和Western Blot实验,检测xaf1转染前后... 详细信息

目的:探讨肿瘤抑制基因xaf1对放射抗拒人鼻咽癌细胞系CNE-2R的生长、增殖、凋亡情况及对其放射敏感性的影响,为治疗鼻咽癌提供新的思路。方法:本研究利用慢病毒转染CNE-2R细胞,继而运用qRT-PCR实验和Western Blot实验,检测xaf1转染前后在CNE-2R细胞的mRNA和蛋白的表达,判定转染是否成功。并分别运用CCK-8实验、流式细胞术(FCM)检测xaf1转染前后细胞的增殖、凋亡及周期变化。另外,本研究还将对转染前后的细胞进行X线照射处理,运用克隆形成实验观察过表达xaf1后,CNE-2R细胞放射敏感性的变化。结果:(1)用慢病毒转染CNE-2R细胞,成功构建了表达xaf1的xaf1-CNE-2R细胞株。本实验以xaf1-CNE-2R组作为实验组,以NC-CNE-2R组作为阴性对照组,以CNE-2R组为空白对照组。(2)实时定量荧光PCR和蛋白质印迹法分别发现xaf1 mRNA和蛋白在实验组细胞处于高水平表达。而在阴性对照组和空白对照组中,xaf1则处以较低的表达水平。(3)三组细胞分别接受不同剂量射线照射后,通过CCK-8试验,xaf1-CNE-2R实验组细胞增殖活性与NC-CNE-2R阴性对照组及CNE-2R空白对照组细胞相比降低,而两对照组间无明显差异。(4)通过克隆形成试验,实验组细胞的放射敏感性较阴性及空白对照组高,而两对照组间未见明显差异。(5)通过流式细胞术检测细胞周期,发现xaf1过表达后,CNE-2R细胞G2/M期所占比例增加。与两对照组相比,差异有统计学意义。(6)运用流式细胞术对细胞的凋亡进行检测发现,xaf1过表达后,无论照射前后,实验组细胞凋亡率均较对照组偏高;且照射后凋亡率大于照射前,差异有统计学意义。结论:(1)慢病毒可以稳定地转染人鼻咽癌放射抗拒细胞CNE-2R;用慢病毒载体构建的转染细胞株稳定的过表达xaf1。(2)xaf1在人鼻咽癌放射抗拒细胞CNE-2R高水平表达后,增强了CNE-2R细胞的放射敏感性;xaf1有可能是鼻咽癌治疗潜在的放疗增敏剂。

关键词：鼻咽癌 xaf1基因慢病毒载体转染放射敏感性

xaf1基因对肺腺癌细胞A549的作用及机制

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中国肺癌杂志 2014年第12期17卷 829-833页

作者：陈东来张福全桑永华朱蓉英张洪涛陈勇兵苏州大学独墅湖校区2012级临床医学3班苏州215123 苏州大学附属第二医院苏州215004 苏州大学癌症分子遗传学实验室苏州215123

背景与目的 xaf1是重要的肿瘤细胞生长抑制因子,其低表达与多种肿瘤细胞有关。研究肿瘤抑制基因xaf1对人肺腺癌细胞株A549的作用及机制。方法利用重组腺病毒Ad5/F35-xaf1和对照腺病毒Ad5/F35-NULL瞬时转染A549细胞,用逆转录聚合酶链式反... 详细信息

背景与目的 xaf1是重要的肿瘤细胞生长抑制因子,其低表达与多种肿瘤细胞有关。研究肿瘤抑制基因xaf1对人肺腺癌细胞株A549的作用及机制。方法利用重组腺病毒Ad5/F35-xaf1和对照腺病毒Ad5/F35-NULL瞬时转染A549细胞,用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot方法检测A549细胞株中xaf1 m RNA和蛋白质的表达;MTT检测细胞增殖率、流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果腺病毒介导的xaf1瞬时转染肺腺癌A549细胞后,xaf1 m RNA及蛋白表达水平明显提高,并能明显抑制该细胞增殖和促进细胞凋亡,蛋白质印记法显示凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8的裂解条带。结论恢复xaf1基因在人肺腺癌A549细胞中表达后,能明显抑制该肿瘤细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与xaf1激活肺癌细胞相关凋亡途径有关。

关键词： xaf1基因肺肿瘤增殖凋亡

HSF1与xaf1基因在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

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中国民康医学 2020年第4期32卷 1-3页

作者：李文超佳木斯市中心医院妇产科黑龙江佳木斯154002

目的:探讨热休克转录因子1(HSF1)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(xaf1)基因在子宫内膜组织中的表达及临床意义。方法:选取2018年6月至2019年6月行手术治疗的38例子宫内膜癌患者,收集其新鲜组织标本,作为研究组。选取同期38例子宫... 详细信息

目的:探讨热休克转录因子1(HSF1)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(xaf1)基因在子宫内膜组织中的表达及临床意义。方法:选取2018年6月至2019年6月行手术治疗的38例子宫内膜癌患者,收集其新鲜组织标本,作为研究组。选取同期38例子宫内膜良性病变患者,行刮诊治疗,收集子宫内膜组织,作为对照组。免疫组织化学-链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结染色法(SP法)检测子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中HSF1与xaf1基因表达,分析临床意义。结果:研究组HSF1阳性表达率为73.68%,高于对照组的36.84%,差异有统计学意义(Pxaf1阳性表达率为28.95%,低于对照组的73.68%,差异有统计学意义(Pxaf1表达阳性者手术病理分期、组织学分级、淋巴结转移与表达阴性者比较,差异有统计学意义(Pxaf1表达呈负相关(Pxaf1在子宫内膜癌患者中异常表达,且两者呈负相关,可能在子宫内膜癌发生、发展中发挥重要作用。

关键词：子宫内膜癌子宫内膜组织 HSF1基因 xaf1基因

肿瘤抑制基因xaf1在非小细胞肺癌中表达的初步研究

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肿瘤抑制基因XAF1在非小细胞肺癌中表达的初步研究

作者：陈建广苏州大学

学位级别：硕士

目的:研究肿瘤抑制基因xaf1在非小细胞肺癌中的表达,探讨xaf1在非小细胞肺癌发生、发展中的作用,为寻找肺癌靶向基因治疗的新靶点提供理论依据。方法:本研究通过收集临床手术切除的新鲜非小细胞肺癌(NSCLC)组织(病理学检查明确为鳞癌... 详细信息

目的:研究肿瘤抑制基因xaf1在非小细胞肺癌中的表达,探讨xaf1在非小细胞肺癌发生、发展中的作用,为寻找肺癌靶向基因治疗的新靶点提供理论依据。方法:本研究通过收集临床手术切除的新鲜非小细胞肺癌(NSCLC)组织(病理学检查明确为鳞癌和腺癌)51例,按癌组织、癌旁组织(距癌组织2cm内的非癌组织)和正常肺组织(距癌组织5cm以上)三个不同部位无菌取材,采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT- PCR)检测15例NSCLC肺癌组织、癌旁组织及正常肺组织中xaf1、XIAP mRNA表达情况;应用S-P免疫组化检测51例肺癌患者癌组织、癌旁组织及正常肺组织中xaf1蛋白表达,分析其表达和临床病理特征相关性;利用重组腺病毒Ad5/F35-xaf1介导转染人肺腺癌细胞株A549和肺鳞癌细胞株SK-MES-1,采用RT-PCR定性检测肺癌细胞转染前、后xaf1 mRNA及蛋白表达变化,MTT及流式细胞计量法分别检测转染前、后肺癌细胞增殖和凋亡变化。结果:(1)RT-PCR检测的15例新鲜肺癌组织中,3例xaf1、XIAP mRNA无表达,在表达的12例患者中:肺癌癌组织较癌邻近正常肺组织xaf1 mRNA表达水平下调(P0.05);XIAP mRNA的表达癌组织明显高于癌邻近正常肺组织(Pxaf1蛋白阳性表达28例(28/51,54.9%),癌旁组织40例(40/51,78.4%),正常组织中44例(44/51,86.7%),癌组织中xaf1表达强度均弱于癌旁组织及正常肺组织(p0.05)。(3)xaf1在A549和SK-MES-1细胞中表达较弱或缺如,经重组腺病毒Ad5/F35-xaf1转染后RT-PCR检测显示,xaf1 mRNA及蛋白表达显著增强,且随剂量依赖性增强,在SK-MES-1细胞中表达更显著;(4)MTT法检测转染腺病毒xaf1 肺癌细胞生长增殖受抑制,且呈有效滴度依赖性抑制增强;流式细胞计量法检测不同滴度Ad5/F35-xaf1转染后,在致死滴度范围内肺癌细胞凋亡随滴度增加而逐渐增强。结论: (1)本研究结果表明,非小细胞肺癌中肿瘤抑制基因xaf1表达降低或缺如,XIAP基因在肺癌组织中表达明显增强,XIAP作为凋亡抑制基因现已被肯定[1],而xaf1在肺癌发生、发展中具有促凋亡作用。 (2)肿瘤抑制基因xaf1在NSCLC组织中的表达下调与肿瘤恶性程度、病理类型、分期、淋巴结转移有关,xaf1有望成为预测肺癌预后的一个新的肿瘤标志物。 (3)重组腺病毒Ad5/F35-xaf1及对照腺病毒Ad5/F35-EGFP,可成功对肺癌细胞株进行瞬时转染,检测肺癌细胞中xaf1 mRNA及蛋白表达较转染前明显增强,可见重组腺病毒是适用于NSCLC基因治疗一良好载体。 (4)本研究结果显示,采用稳定表达xaf1的腺病毒载体转染非小细胞肺癌,可抑制肺癌细胞增殖和诱导肺癌细胞凋亡,其机制可能与xaf1恢复表达后重新激活了其参与的凋亡通路途径有关,xaf1有望成为有效治疗肺癌的理想基因靶标。

关键词：人肺癌细胞株 xaf1基因 XIAP基因细胞增殖细胞凋亡重组腺病毒Ad5/F35-xaf1

抑癌基因xaf1和BNIP3表达及其异常甲基化与宫颈病变相关性研究

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实用妇科内分泌电子杂志 2023年第18期10卷 9-14页

作者：王远菊王祥珍杨建芳杨静庄秋婵深圳市宝安区中心医院广东医科大学附属宝安中心医院妇科广东深圳518101 深圳市南山区妇幼保健院妇科广东深圳518000

目的探讨抑癌基因xaf1和BNIP3表达及其异常甲基化与宫颈病变的关系。方法选择140例手术切除并经病理证实的标本,其中宫颈癌组48例,宫颈上皮内瘤样病变2~3级组织(CIN2-3组)32例,宫颈皮内瘤样病变1级组织(CIN1组)30例,正常宫颈组织(对照组... 详细信息

目的探讨抑癌基因xaf1和BNIP3表达及其异常甲基化与宫颈病变的关系。方法选择140例手术切除并经病理证实的标本,其中宫颈癌组48例,宫颈上皮内瘤样病变2~3级组织(CIN2-3组)32例,宫颈皮内瘤样病变1级组织(CIN1组)30例,正常宫颈组织(对照组)30例,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)法及免疫组化(SP)法,检测上述各组中xaf1和BNIP3启动子区甲基化状态及蛋白表达水平。结果正常宫颈组、CIN1组、CIN2-3组、宫颈癌组xaf1基因启动子甲基化阳性率分别为3.3%、6.6%、37.5%、60.4%,正常宫颈组与CIN1组甲基化阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN1组与CIN2-3及宫颈癌组甲基化阳性率比较,差异均有统计学意义(P基因甲基化阳性率分别为16.7%、20.0%、43.8%、68.8%,正常宫颈组与CIN1组甲基化阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN1组与CIN2-3及宫颈癌组甲基化阳性率比较,差异有统计学意义(Pxaf1蛋白的阳性表达率分别为73.3%、76.7%、40.6%、10.4%,宫颈组与CIN1组xaf1蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN2-3组及宫颈癌组xaf1蛋白表达率比较,差异均有统计学意义(P0.05);CIN1组与CIN2-3组、宫颈癌组比较,BNIP3蛋白表达率逐渐下降,差异均有统计学意义(Pxaf1蛋白与BNIP3蛋白表达呈正相关(Pxaf1及BNIP3基因启动子甲基化所致的xaf1及BNIP3表达失活,可能在宫颈病变的发生及发展过程中起着重要作用。

关键词：宫颈肿瘤宫颈上皮内瘤样病变甲基化启动子区域 BNIP3基因 xaf1基因

xaf1和XIAP在肺鳞癌中的表达及临床意义

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江苏医药 2014年第1期40卷 39-41页

作者：舒健陈勇兵李森苏州大学附属太仓市人民医院胸心外科江苏省215400 苏州大学附属第二医院胸心外科

目的探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(xaf1)在肺鳞癌发生、发展中的作用。方法 51例肺鳞癌患者术后切除的肺组织标本分为三组:A组为肺癌组织,B组为肺癌旁2cm组织,C组为肺癌旁5cm组织。应用免疫组化检测三组xaf1蛋白表达;半... 详细信息

目的探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(xaf1)在肺鳞癌发生、发展中的作用。方法 51例肺鳞癌患者术后切除的肺组织标本分为三组:A组为肺癌组织,B组为肺癌旁2cm组织,C组为肺癌旁5cm组织。应用免疫组化检测三组xaf1蛋白表达;半定量逆转录-PCR检测51例肺癌组织中xaf1和XIAP mRNA表达,分析其表达与临床病理特征的相关性。结果 A组xaf1的表达强度显著低于B、C组(54.9%vs.78.4%、86.7%)(Pxaf1表达低于高分化和低TNM分期(Pxaf1mRNA的表达水平低于C组(Pxaf1在肺癌发生、发展中具有促凋亡作用。

关键词：肺鳞癌 XIAP基因 xaf1基因