检索结果-南通市图书馆

作者：于爱平天津医科大学

学位级别：硕士

目的检测慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中HBVⅩ基因启动子甲基化程度,并对其甲基化水平与临床关系进行初步探讨。方法收集2009年7月——2010年3月在天津市传染病医院住院的慢性乙型肝炎患者肝组织标本和血清标本各45例,其中... 详细信息

目的检测慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中HBVⅩ基因启动子甲基化程度,并对其甲基化水平与临床关系进行初步探讨。方法收集2009年7月——2010年3月在天津市传染病医院住院的慢性乙型肝炎患者肝组织标本和血清标本各45例,其中HBeAg（+）30例,HBeAg（-）15例,年龄16-65岁。所有病例均符合2005年中华医学会肝病学分会、感染病学分会联合制订的《慢性乙型肝炎防治指南》中的慢性乙型肝炎诊断标准。检测所有患者血清丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase, ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）及总胆红素（total bilirubin,TBiL）水平。应用电化学发光免疫分析法定量检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原（Hepatitis B s antigen, HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（Hepatitis B e antigen, HBeAg）水平。应用免疫组化方法检测肝组织内HBsAg、乙型肝炎病毒核心抗原（Hepatitis B core antigen, HBcAg）的表达。应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法检测血清HBV DNA水平。利用MethPrimer软件分析预测HBV DNA CpG岛,同时采用高分辨率熔解技术（High Resolution Melting, HRM）检测HBVⅩ基因启动子CpG岛甲基化水平。结果 1.45例肝穿标本免疫组化结果：HBsAg（+）:35例,HBsAg（-）:10例;HBcAg（+）:23例,HBcAg（-）:22例。 2.45例肝组织标本中,共检测到HBV发生甲基化21例（21/45,46.7%）,其中血清HBeAg（+）:10例（10/21,47.6%）,免疫组化HBsAg（+）:11例（11/21,52.4%）,HBcAg（+）:7例（7/21,33.3%）;HBV未发生甲基化24例（24/45,53.3%）,其中血清HBeAg（+）:20例（20/24,83.3%）,免疫组化HBsAg（+）:24例（24/24,100%）,HBcAg（+）:16例（16/24,66.7%）。分别比较甲基化组和未甲基化组患者血清中HBeAg、肝组织中HBsAg、HBcAg的阳性表达率,差异有统计学意义（P＜0.05）。 3.甲基化组与未甲基化组慢性乙型肝炎患者,在性别构成、年龄、血清生化学指标ALT、AST、TBiL以及病毒学指标HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平等方面差异没有统计学意义（P＞0.05）。 4.21例发生甲基化的肝组织标本中,血清HBeAg（-）组甲基化水平（61.45±18.27）与HBeAg（+）组（34.10±16.03）比较,差异有统计学意义（t=-3.631,P＜0.01）;HBeAg（-）组血清HBV DNA水平（4.32±1.57）与HBeAg（+）组（7.03±1.57）比较,差异有统计学意义（t’=5.100,P＜0.01）。 5.21例发生甲基化的患者中,血清HBV DNA水平与HBV DNA甲基化水平呈负相关（r=-0.832, P＜0.01）, HBeAg水平与HBV DNA甲基化水平呈负相关（rs=-0.657, P＜0.05）;HBV DNA甲基化水平与患者年龄呈负相关（rs=-0.706,P＜0.05）,而与血清HBsAg、ALT、AST、TBiL水平均无相关性（rs值分别为0.165、0.432、0.24、0.291,P＞0.05）。结论 1. HBV DNA CpG岛2存在于HBV C基因型（AB540585）第1228-1665位碱基序列中,存在于HBV B基因型（AB540582）第1246-1672位碱基序列中,岛2与HBV增强子I、x基因启动子区域重叠,紧邻增强子II和C基因启动子。 2.甲基化组慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、肝组织HBsAg和HBcAg的阳性表达率显著低于未甲基化组。发生甲基化的慢性乙型肝炎患者中,HBeAg阳性组血清甲基化水平低于HBeAg阴性组,HBV DNA水平高于HBeAg阴性组。血清HBV DNA、HBeAg水平与肝组织内HBV x基因启动子CpG岛甲基化水平呈负相关。提示HBV x基因启动子CpG岛甲基化可能抑制了血清中HBeAg的表达和肝组织内HBsAg和HBcAg的表达以及HBV DNA的复制。 3.甲基化组与未甲基化组慢性乙型肝炎患者在性别、年龄、血清生化学指标ALT、AST、TBiL、血清病毒学指标HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平方面比较,差异无统计学意义。但是,发生甲基化的患者中,甲基化水平与

关键词：乙型肝炎病毒 CpG岛甲基化肝组织 x基因启动子

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设计特异性结合HBVx基因启动子的人工锌指蛋白以抑制HepG2.2.15细胞中HBV的转录

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重庆医科大学学报 2014年第7期39卷 929-932页

作者：祝艺耘付愚李中堂刘锐魏续福吴忠均重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆400016

目的：设计人工锌指蛋白（zinc finger protein，ZFP）特异性结合于乙型肝炎病毒x蛋白（hepatitis B virus x protein，HBx）基因启动子，观察zFP在体外对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）转录的抑制。方法：将pcDNA3．1-ZFP转染... 详细信息

目的：设计人工锌指蛋白（zinc finger protein，ZFP）特异性结合于乙型肝炎病毒x蛋白（hepatitis B virus x protein，HBx）基因启动子，观察zFP在体外对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）转录的抑制。方法：将pcDNA3．1-ZFP转染入HepG2．2．15细胞24h后，用Western blot检测HBx蛋白的含量：用ELISA和real—time PCR检测上清液中乙型肝炎核心相关抗原（hepatitis B eantigen，HBeAg）和HBV DNA含量，用RT—PCR检测胞内HBV mRNA水平。结果：ZFP可抑制HepG2．2．15细胞中HBx的表达；相比空质粒组，ZFP组细胞培养上清液中HBV DNA拷贝量和HBeAg含量分别下降了51．7％（t=23．079，P=0．000，95％CI=44．98％-58．52％）、33．8％（t=3．887，P=-0．003，95％CI=12．12％～55．48％）；细胞内HBVmRNA也明显减少（t=3．616，P=0．022）。结论：人工设计的可特异性结合于HBx的ZFP可于HepG2．2．15细胞中有效抑制HBV转录。

关键词：乙型肝炎病毒 x基因启动子锌指蛋白 HepG2 2 15细胞

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构建特异性结合HBVx基因启动子的人工锌指蛋白以抑制HepG2.2.15细胞中HBV的转录

构建特异性结合HBVX基因启动子的人工锌指蛋白以抑制HepG2.2.15细...

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作者：祝艺耘重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：构建人工锌指蛋白(zinc finger protein, ZFP)特异性结合于乙肝病毒x蛋白(hepatitis B virus x protein, HBx)基因启动子，观察人工锌指蛋白在体外对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)复制和转录的抑制作用。方法：用脂质体Li... 详细信息

目的：构建人工锌指蛋白(zinc finger protein, ZFP)特异性结合于乙肝病毒x蛋白(hepatitis B virus x protein, HBx)基因启动子，观察人工锌指蛋白在体外对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)复制和转录的抑制作用。方法：用脂质体LipofectamineTM2000将重组质粒pcDNA3.1-ZFP或pcDNA3.1-NC分别转染HepG2.2.15细胞分别作为实验组（ZFP组）和对照组（NC组）。1.用免疫印迹法（Western blot）检测实验组和对照组细胞中HBx蛋白的含量。2.用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测两组上清液中乙型肝炎核心相关抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)水平。3.用实时荧光定量PCR（qPCR）检测两组上清液中HBV DNA含量。4.用RT-PCR检测实验组和对照组细胞内HBV mRNA水平。结果：重组质粒转染入HepG2.2.15细胞后;*** blot检测所得的HepG2.2.15细胞中HBx蛋白表达水平，相比对照组，实验组中HBx蛋白表达水平明显下降，差异具有统计学意义。2.相比对照组，ZFP组细胞培养上清液中HBeAg含量下降了33.8%（t=3.887,P=0.003）。***组细胞培养上清液中HBV DNA拷贝量相对NC组下降了51.7%（t=23.079,P=0.000）。4.测得实验组细胞内HBV mRNA水平，与对照组相比，明显减少。结论：经过上述研究证明我团队前期人工设计的可特异性结合于HBx的ZFP可于HepG2.2.15细胞中有效抑制HBV转录及HepG2.2.15细胞中HBx的表达。

关键词：乙肝病毒 x基因启动子锌指蛋白 HepG2.2.15细胞

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