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中国水产科学 2017年第3期24卷 615-622页

作者：王筱珊胡智博费荣梅南京农业大学动物医学院

本研究对白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)与传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious Hypodermal and Haematopoietic Necrosis Virus,IHHNV)能否竞争虾鳃细胞膜上的NM23蛋白受体进行探索。先用蔗糖梯度离心法提纯WSSV的全蛋白,利用病毒覆盖蛋白印迹技术(VOPBA)与对虾鳃细胞膜NM23蛋白作用,将疑似蛋白条带进行LC-MS/MS分析,初步筛选出3种WSSV蛋白,分别为WSSV013、wsv497和wsv035,再构建这3种蛋白的原核表达载体,通过VOPBA和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)验证了wsv497、wsv035能与NM23蛋白相互作用,WSSV013不能与NM23蛋白相互作用。初步推测WSSV与IHHNV可能竞争对虾鳃细胞膜上的NM23蛋白受体,该结果为今后研究两种病毒竞争细胞膜受体和虾病毒蛋白作用机制提供理论基础。

关键词： WSSV013 wsv497 wsv035 VOPBA 免疫共沉淀 NM23蛋白

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对虾病毒性疾病的流行病学调查及与NM23相互作用的WSSV结构蛋白的筛选

对虾病毒性疾病的流行病学调查及与NM23相互作用的WSSV结构蛋白的...

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作者：王筱珊南京农业大学

学位级别：硕士

随着经济的不断发展和人们意识的提高,高蛋白的水产品受到了人们的广泛喜爱,水产养殖业有了很大的发展。其中,对虾养殖也逐渐转变为集约化养殖模式。由于对虾养殖密度大,防治措施不完善,使得对虾的病毒性疾病层出不穷。至今,病毒性疾病... 详细信息

随着经济的不断发展和人们意识的提高,高蛋白的水产品受到了人们的广泛喜爱,水产养殖业有了很大的发展。其中,对虾养殖也逐渐转变为集约化养殖模式。由于对虾养殖密度大,防治措施不完善,使得对虾的病毒性疾病层出不穷。至今,病毒性疾病仍是威胁虾类养殖的主要因素,其中危害较大的病毒有对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)桃拉综合征病毒(Taura syndrome virus,TSV)、黄头病毒(Yellow Head Virus,YHV),这几种对虾病毒性疾病均传播速度快、发病率高,使得对虾养殖遭受严重的经济损失。目前,仍然没有针对对虾病毒性疾病的特效药,因此检测和防疫是对虾健康养殖的主要手段。本实验以2015年5月～2016年12月采集的1436尾对虾为研究对象,对江苏地区对虾白斑综合征(White Spot Disease,WSD)、对虾传染性皮下及造血组织坏死病(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis,IHHN)和对虾桃拉综合征(Taura Syndrome,TS)发病情况进行调查,根据世界动物卫生组织(The World Organisation for Animal Health,OIE)推荐的水生动物疾病诊断手册的PCR检测方法,分别用套式PCR、一步PCR和反转录PCR对WSSV、IHHNV和TSV进行检测。结果显示WSSV阳性率为17.2%,IHHNV阳性率为39.4%,TSV阳性率为0%。以从江苏南京、大丰、射阳、启东、东台这5个地区分离的IHHNV阳性虾样为研究对象,应用PCR、T/A克隆、序列测序、序列拼接等方法得到江苏5个地区IHHNV的编码区序列,对这5株IHHNV毒株进行基因序列分析,数据显示这5个地区的毒株均属于IHHNV I型感染株,与韩国株JN377975的进化关系最为接近。本实验先纯化出实验室构建好的NM23蛋白,再用蔗糖梯度离心法提纯WSSV的全蛋白,利用病毒覆盖蛋白印迹技术(VOPBA)与对虾鳃细胞膜NM23蛋白作用,将疑似蛋白条带进行LC-MS/MS分析,初步筛选出3种WSSV蛋白,分别为WSSV013、wsv497和wsv035,再构建这3种蛋白的原核表达载体,通过VOPBA和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)验证了 wsv497、wsv035能与NM23蛋白相互作用,WSSV013不能与NM23蛋白相互作用。实验室之前的研究证明,NM23蛋白可与IHHNV的衣壳蛋白结合,而且有国外学者发现感染IHHNV的虾感染WSSV后死亡率显著降低,因此初步推测WSSV与IHHNV可能竞争对虾鳃细胞膜上的NM23蛋白受体,该结果为今后研究两种病毒竞争细胞膜受体和虾病毒蛋白作用机制提供理论基础。

关键词： IHHNV WSSV TSV 流行病学调查编码区序列阳性率 Ⅰ型感染株 NM23蛋白 WSSV013 wsv497 wsv035

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