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滨州医学院学报 2024年第3期47卷 201-205页

作者：李黛周伯阳郝鹏杰滨州医学院附属烟台口腔医院山东烟台264000 北京市中关村医院北京100190

目的建立体外炎性环境,对比研究wnt4重组蛋白在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,初步探讨wnt重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用。方法通过酶消法从小鼠颅顶骨中提取成骨细胞,CCK8法检测不同浓度LPS、wnt4重组蛋白... 详细信息

目的建立体外炎性环境,对比研究wnt4重组蛋白在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,初步探讨wnt重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用。方法通过酶消法从小鼠颅顶骨中提取成骨细胞,CCK8法检测不同浓度LPS、wnt4重组蛋白对小鼠成骨细胞增殖分化的影响,设计浓度梯度,根据检测结果确定所需的最适浓度。体外成骨诱导培养,按是否添加LPS、wnt4重组蛋白分为对照组、LPS组、wnt4组、LPS+wnt4组4个组。培养7 d后比较碱性磷酸酶(ALP)活性。培养21 d后应用茜素红染色法比较细胞矿化能力。结果经过分组培养7 d后,与LPS组比较,LPS+wnt4组ALP活性明显升高,Pwnt4组矿化能力高于LPS组,Pwnt4重组蛋白(0.05μg/mL)对炎症状态下的成骨细胞的分化具有正向调节的作用。

关键词： wnt4重组蛋白成骨细胞脂多糖

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wnt4重组蛋白对炎性炎症状态下小鼠RAW264.7细胞破骨分化的影响

Wnt4重组蛋白对炎性炎症状态下小鼠RAW264.7细胞破骨分化的影响

引用

作者：魏晨大连医科大学

学位级别：硕士

目的在小鼠RAW264.7细胞破骨诱导过程中,利用LPS创造炎症环境,并加入wnt4重组蛋白,检测wnt4重组蛋白在炎症环境下对破骨细胞分化以及骨吸收功能的影响,为临床上预防和治疗种植体周围炎提供新的治疗思路以及实验数据。方法1、将小鼠RAW26... 详细信息

目的在小鼠RAW264.7细胞破骨诱导过程中,利用LPS创造炎症环境,并加入wnt4重组蛋白,检测wnt4重组蛋白在炎症环境下对破骨细胞分化以及骨吸收功能的影响,为临床上预防和治疗种植体周围炎提供新的治疗思路以及实验数据。方法1、将小鼠RAW264.7细胞与不同浓度的LPS(0、50、100、200、500、1000ng/ml)、wnt4(0、50、100、200、500、1000、2000ng/ml)分别培养后用CCK-8法检测不同浓度LPS、wnt4对于RAW264.7细胞活性的影响。2、建立破骨细胞模型,通过诱导小鼠RAW264.7细胞,获得成熟的破骨细胞,并通过形态学观察、TRAP染色对其进行鉴定。3、将小鼠RAW264.7细胞分为四组:对照组(完全培养基),LPS组(完全培养基+100ng/ml LPS),破骨诱导组(完全培养基+100ng/mlLPS+100ug/L RANKL、50ug/L M-CSF+100ng/ml LPS)和wnt4组(完全培养基+100ng/mlLPS+100ug/L RANKL、50ug/L M-CSF+100ng/ml LPS+200ng/mlwnt4)。随后进行破骨分化检测及噬骨检测:培养5天后,进行TRAP染色计数破骨细胞数目以及骨吸收陷窝面积。培养5、7、9天后提取mRNA行RT-PCR检测Trap、Mmp9及Ctsk基因表达。评估wnt4重组蛋白在炎性状态下对小鼠RAW264.7细胞破骨分化的影响。结果1.不同浓度LPS、wnt4对小鼠RAW264.7细胞活性的影响LPS:24h,48h各浓度组对于RAW264.7细胞增殖均有促进作用,100ng/ml浓度组细胞增殖效果最为明显。在24小时和48小时实验组与对照组对比均有统计学意义(p48小时,1000ng/ml浓度组与其他实验组对比有统计学差异,其他组间对比无统计学意义(p>0.05)。wnt4:加入wnt4重组蛋白培养24h后,50ng/ml、l00ng/ml、200ng/ml、500ng/ml浓度组对于细胞增殖都有促进作用,200ng/ml浓度组效果最明显,1000ng/ml对于细胞增殖几乎没有影响,2000ng/ml浓度组对细胞增殖有负面影响;48小时后,50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml浓度组依然具有促进作用,1000ng/ml对于细胞增殖几乎没有影响,2000ng/ml浓度组对细胞增殖有负面影响。在24,48小时中除了 1000ng/ml浓度组与对照组对比无统计学意义(p>0.05),其余实验组与对照组对比均有统计学意义(p4小时实验组中50ng/ml浓度组与各组组间对比有统计学意义(p48小时实验组中50ng/ml浓度组与1000 ng/ml浓度组无统计学意义(p>0.05);24小时100、500ng/ml浓度组与50ng/ml浓度组无统计学意义(p>0.05),200ng/ml浓度组与于50ng/ml,1000ng/ml浓度组对比有统计学意义(p48小时中100、500ng/ml度组与50ng/ml浓度组对比无统计学差异(p>0.05),200ng/ml浓度组与100ng/ml浓度组对比无统计学差异(p>0.05),1000ng/ml浓度组与各组均有统计学差异(p4.7细胞经过破骨诱导后,形态学观察法和TRAP染色法染色后都能发现有大量破骨细胞形成,且形成的破骨细胞数量(47.33±2.70个/mm2)是明显高于对照组破骨细胞数量的,两组比较差异显著,具有统计学意义(p4在炎性炎症环境中对于小鼠RAW2 64.7细胞破骨分化的影响TRAP染色分析:破骨培养5天后,破骨诱导组形成的破骨细胞最多(47.33±2.70/mm2),其次是LPS组(30.00±8.78个/mm2),然后是wnt4组(21.3±3.26个/mm2),最后是对照组,四组两两对照差异显著,均有统计学意义(p4%),其次是LPS组(5.69%±1.57%),然后是wnt4组(2.93%±1.12%),最后是对照组,四组两两对照均有显著差异,具有统计学意义(p<0.05)。RT-PCR检测分析:分组培养5、7、9天后测定破骨相关基因(TRAP、MMP-9和Cts-K)mRNA表达量。结果显示对照组与实验组,对比具有统计学差异(p<0.05);实验组两两比较,差异显著,具有统计学意义(p<0.0

关键词：破骨细胞小鼠RAW264.7细胞种植体周围炎 wnt4重组蛋白

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