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西安交通大学学报（医学版） 2017年第2期38卷 199-205页

作者：刘源王海萍吕洋王浩宇霍艳丽河北北方学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000 河北北方学院人体解剖学教研室河北张家口075000

目的探讨wnt-11体外诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为心肌样细胞的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMMSCs,取第2代BMMSCs培养48h后进行定向诱导,根据wnt-11终浓度的不同分为A组(100ng/mL),B组(200ng/mL),C组(400ng/mL)... 详细信息

目的探讨wnt-11体外诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为心肌样细胞的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMMSCs,取第2代BMMSCs培养48h后进行定向诱导,根据wnt-11终浓度的不同分为A组(100ng/mL),B组(200ng/mL),C组(400ng/mL)和D组(空白对照组),诱导72h后更换为完全培养液继续培养4周,D组仅用完全培养液培养。倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态学变化。运用流式细胞仪检测技术对BMMSCs表面联合标记物进行鉴定。各组细胞培养至第4周时,运用免疫细胞化学染色技术检测结蛋白(Desmin)、间隙连接蛋白43(Connexin43)及心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达情况。运用透射电镜观察分化细胞的超微结构变化。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测各组细胞在诱导后培养第1、2、4周时心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5及α-MHC的表达。结果 1原代BMMSCs于第2周形成集落,多呈梭形、星形,少数形状不规则。传代后细胞体积变大,诱导后细胞多为长梭形,呈一致性生长。2流式细胞仪检测技术对BMMSCs表面联合标记物的鉴定结果显示CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.9%、0.4%和99.5%。3免疫细胞化学染色技术检测结果显示:诱导后常规培养至第4周,A组、B组、C组细胞胞质均呈阳性表达Desmin、Connexin43和cTnI,而D组细胞呈弱阳性或阴性表达,B组细胞的阳性表达率均最高,差异具有统计学意义(Pwnt-11可在体外诱导SD大鼠BMMSCs定向分化为心肌样细胞,其诱导分化最适浓度为200ng/mL。

关键词：骨髓间充质干细胞 wnt-11 心肌样细胞细胞分化

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wnt-11及其受体在宫颈鳞癌中的表达及意义

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中国医科大学学报 2013年第5期42卷 420-424页

作者：穆庆魏恒张瑶罗清双庞晓奡张淑兰中国医科大学附属盛京医院妇产科沈阳110004

目的探讨wnt-11及其受体在宫颈癌组织中的表达情况与宫颈癌各临床特征之间的关系。方法 2009年至2010年在我院收集43例宫颈癌组织、15例宫颈内瘤变组织、27例宫颈正常组织,用免疫组化及实时定量PCR方法分析wnt-11及Ror2在宫颈正常组织... 详细信息

目的探讨wnt-11及其受体在宫颈癌组织中的表达情况与宫颈癌各临床特征之间的关系。方法 2009年至2010年在我院收集43例宫颈癌组织、15例宫颈内瘤变组织、27例宫颈正常组织,用免疫组化及实时定量PCR方法分析wnt-11及Ror2在宫颈正常组织和宫颈病变组织中的表达情况。结果 wnt-11在宫颈癌及宫颈病组织中表达强度明显高于正常组织(P=0.030,0.006),与临床FIGO分期(P=0.020)、淋巴结转移(P=0.033)、人乳头瘤病毒(P=0.023)密切相关,差异有统计学意义。wnt-11和ROR2基因在宫颈癌变及宫颈癌前病变组织中表达强度明显高于正常宫颈组织表达(P=0.002,0.039;P=0.000,0.014),差异有统计学意义。wnt-11 mRNA与ROR2 mRNA表达与临床FIGO分期(P=0.000,0.000)、人乳头瘤病毒(P=0.008,0.011)密切相关,差异有统计学意义。wnt-11 mRNA与ROR2 mRNA在宫颈癌的表达相关(r=0.826,P=0.000),差异有统计学意义。结论 wnt-11、ROR2在宫颈癌中表达增强,其表达强度存在相关联系。wnt-11、Ror2在宫颈癌的发生、发展过程中起重要作用。

关键词：宫颈癌 wnt-11 ROR2 人乳头瘤病毒

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wnt-11联合1，25-Vitamin-D3促进大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞方向分化的研究

Wnt-11联合1，25-Vitamin-D3促进大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞...

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作者：刘洋河北北方学院

学位级别：硕士

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)等心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的发生严重威胁着中老年人的身体健康,近些年逐渐呈现出年轻化的趋势,而且,与AMI相关的并发症极大地降低了人们的生活质量。尽管已有研究显示,... 详细信息

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)等心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的发生严重威胁着中老年人的身体健康,近些年逐渐呈现出年轻化的趋势,而且,与AMI相关的并发症极大地降低了人们的生活质量。尽管已有研究显示,人体的心肌细胞在某种程度上存在着一定的分裂增殖能力,但AMI发生后每年仅1%的更新比率很难弥补已受损心肌细胞的数目,更不能有效改善心功能。目前临床上治疗心肌梗死的主要方法,如药物治疗、溶栓治疗、介入治疗及外科手术治疗等,皆旨在挽救非梗死区域的心肌细胞,而缺乏针对梗死心肌再造和再生的根本性治疗办法。基于此种现状,有学者提出可以通过移植外源性细胞到损伤的心肌中,用足量的、具有收缩功能的细胞恢复和改善病变区域心肌的功能。当前,干细胞的研究已成为自然科学中最为引人注目的领域,有多种细胞,如胚胎癌细胞系(P19)、胚胎干细胞、脂肪干细胞、骨髓基质干细胞、骨髓间充质干细胞等陆续被用于进行诱导分化进而移植治疗心肌梗死的研究。来源于自体的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)能够在适宜的体外培养环境中大量增殖,显示出较强的分化可塑性,并产生相应细胞标志物,已成为组织工程领域理想的种子细胞。当前研究证实,细胞因子wnt-11和化学药物1,25-Vitamin-D对于心脏发育和心肌细胞的分化均具有重要作用,且二者都是通过抑制经典wnt信号通路而发挥作用,1,25-Vitamin-D还能促进wnt-11的表达。基于此,本实验应用二者联合及单独诱导BMSCs定向分化为心肌细胞,从形态学和分子生物学两个层面探讨wnt-11及1,25-Vitamin-D对其增殖与诱导分化能力的影响,筛选出诱导分化的最佳方案,提高心肌细胞分化率,以期为缺血性心脏病的细胞移植治疗提供理论基础。本实验采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用wnt-11联合1,25-Vitamin-D及二者单独对第2代BMSCs进行定向诱导,倒置相差显微镜下动态观察细胞生长状况。镜下观察,原代细胞培养72h后,大部分细胞呈短梭形;培养1w后,细胞呈现出多样化的形态;诱导4w的BMSCs,相邻细胞间联系紧密,排列具有明显的方向性。运用流式细胞仪对BMSCs进行鉴定。流式细胞仪对BMSCs表面抗原鉴定的结果显示,CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.4%、3.3%和91.4%。应用免疫细胞化学、免疫荧光细胞化学及蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测诱导后4w的BMSCs中原肌球蛋白(tropomyosin,TPM)、间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表达情况。实验结果显示,各组BMSCs均可见TPM、Cx43及cTnT的阳性表达,其中联合诱导组的表达均最高,而未诱导组细胞呈弱阳性或阴性表达,差异具有统计学意义(Pwnt-11、1,25-Vitamin-D单独及联合诱导后可定向分化为心肌细胞。3.诱导大鼠BMSCs向心肌细胞分化过程中,使用wnt-11与1,25-Vitamin-D联合诱导的效果明显优于二者单独诱导。

关键词：骨髓间充质干细胞 wnt-11 1,25-Vitamin-D3 心肌细胞诱导分化

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FGF-2联合wnt-11诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞定向分化的实验研究

FGF-2联合Wnt-11诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞定向分化...

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作者：刘源河北北方学院

学位级别：硕士

随着人们生活水平的日益提高,饮食结构的逐渐改变,心血管疾病的发病率呈逐年攀升的趋势,尤其是心肌梗死近期及远期并发症不但威胁人类生命,而且严重影响人们的生活质量。尽管人体的心肌细胞存在分裂增殖的现象已见诸报端,但是每年仅1%... 详细信息

随着人们生活水平的日益提高,饮食结构的逐渐改变,心血管疾病的发病率呈逐年攀升的趋势,尤其是心肌梗死近期及远期并发症不但威胁人类生命,而且严重影响人们的生活质量。尽管人体的心肌细胞存在分裂增殖的现象已见诸报端,但是每年仅1%的更新比率较难弥补心肌梗死后受损的心肌细胞数量,因此在改善心功能方面成效甚微。目前临床上治疗心肌梗死旨在挽救非梗死区心肌细胞,改善心功能;然而无论是药物治疗或者介入治疗,抑或外科手术都不能使梗死区的心脏功能得以恢复,瘢痕组织取代受损的心肌细胞,导致心脏收缩功能下降,疾病的最终转归结局为心力衰竭(heart failure,HF)。针对心肌梗死最为完善的治疗措施应当保证心脏在形态学及功能上得以修复。心脏移植不失为一种行之有效的现代治疗手段,然而因为供体来源不足、免疫排斥反应无法规避及手术费用高昂等缘故,难以在临床广泛推广。近年来,多位学者研究指出:将心肌样细胞移植至心梗后的心脏后,梗死区心肌细胞得以修复,心脏功能随之而改善。这无疑为缺血性心脏病的治疗迎来新的曙光。骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMMSCs)是一种多能干细胞,因具有取材简便、易于体外分离培养与扩增、多向分化潜能以及自体移植无免疫排斥等优点而成为集中研究的对象;目前已成为组织工程领域理想的种子细胞。毫无疑问,移植治疗成功的关键在于供体细胞状态良好,选用适宜的诱导剂因而显得至关重要。当前已有较多研究涉及药物诱导、物理及生物因素干预等诱导方式。其中诱导药物包含化学药品、多种细胞因子及中药有效单体,物理干预包括仿生电刺激、外加磁场与流体切应力作用,生物因素干预包含体外模拟心肌微环境、细胞裂解液共培养和相关的基因转染。已有研究之中存在着联合两种诱导方式作用于bmmscs培养过程的实例。碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bfgf,fgf-2)属于成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor,fgf)家族,广泛地分布于体内几乎所有的器官与组织,其中多数存在于下丘脑与垂体中。fgf-2是一种强效的促细胞分裂剂,可以刺激各类干细胞的迁移、增殖和分化。研究指出经fgf-2转染的mscs在低氧条件下生存能力与抗细胞凋亡特性均增强。wnt-11属于wnt蛋白家族,在胚胎心室和心房中表达。wnt-11控制早期心肌发育并且对心脏功能的正常发育至关重要。已有研究指出wnt-11在心脏发育期间控制心肌细胞的空间组织,有学者认为,在细胞培养模型中,wnt-11信号转导决定心肌细胞的命运并促进心肌细胞的定向分化。基于上述研究,本课题将fgf-2与wnt-11作为诱导剂,诱导bmmscs向心肌样细胞分化;探究它们在bmmscs向心肌样细胞分化过程中的作用,在这一阶段观察细胞形态的改变,分析相关特异性基因的表达;并且就细胞的分化而言探索两者联合运用是否优于各自单独诱导。期待借此提升细胞的分化效率,为bmmscs诱导分化成心肌样细胞通过细胞移植临床治疗心肌梗死提供理论依据。本研究所需的bmmscs均取自3周龄清洁级sd大鼠的长骨骨髓,运用全骨髓贴壁法进行培养。倒置相差显微镜下可见:原代bmmscs体积及胞核较小,部分细胞培养约12h后贴壁生长;24h后细胞形态初步发生改变,已有部分胞体向外舒展,附着在培养瓶的生长面;约72h后大小及长短不一的突起自部分胞体朝外周伸出,细胞主要为短梭形,椭圆形与不规则形也可见,外形上与成纤维细胞大致相像。培养过程中呈悬浮生长的造血干细胞经多次换液及传代后被弃除,细胞形态及排列随时间延续逐步趋向一致。既有研究表明:bmmscs可表达cd29、cd50、cd90等间充质细胞系及内皮细胞系的表面抗原,而不表达cd14、cd45等造血细胞系表面抗原。本研究运用流式细胞仪对bmmscs联合表面抗原进行鉴定,结果显示经全骨髓贴壁法分离培养的bmmscs表面抗原cd29、cd90的阳性表达率分别为97.9%,99.5%。cd45的阳性表达率为0.4%。表明体外培养的bmmscs符合间充质干细胞的特点。取长势良好的第2代bmmscs,培养48h后分为4组,a、b、c组分别加入含fgf-2、wnt-11、fgf-2+wnt-11的诱导培养基,d组为空白对照组。诱导72h后更换为完全培养基,在此期间空白对照组仅使用完全培养基,此后继续常规培养4w。检测各组bmmscs在形态学与分子水平发生的变化。在倒置相差显微镜下观察得见:经诱导培养约48h后,圆钝而平滑的突起由胞体向外周伸出,细胞主要为梭形,椭圆形及不规则形也可见;1w时细胞形态及排列逐渐变为均一、规则的长梭形;4w时相邻细胞间联系紧密,排列规则,生长方向趋于一致,部分细胞形成漩涡样结构。常规培养至第

关键词：骨髓间充质干细胞心肌样细胞细胞分化碱性成纤维细胞生长因子 wnt-11

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wnt-11及Ror2基因在宫颈癌中的表达及意义

Wnt-11及Ror2基因在宫颈癌中的表达及意义

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中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科肿瘤会场（妇科肿瘤学组、妇科病理学组）

作者：魏恒张淑兰中国医科大学附属盛京医院妇产科

目的探讨wnt-11 mRNA及Ror2 mRNA在宫颈癌组织中的表达情况与宫颈癌各临床特征之间的关系。方法2009年至2010年在中国医科大学附属盛京医院提取43例宫颈癌组织、14例宫颈内瘤变组织、24例宫颈正常组织的总RNA,用实时定量PCR的方法分析Wn... 详细信息

目的探讨wnt-11 mRNA及Ror2 mRNA在宫颈癌组织中的表达情况与宫颈癌各临床特征之间的关系。方法2009年至2010年在中国医科大学附属盛京医院提取43例宫颈癌组织、14例宫颈内瘤变组织、24例宫颈正常组织的总RNA,用实时定量PCR的方法分析wnt-11 mRNA及Ror2mRNA在宫颈正

关键词：宫颈癌 wnt-11 宫颈非典型增生宫颈正常组织

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wnt-5a、wnt-11、CaMKⅡ在良性转归葡萄胎和恶性变葡萄胎中的表达及意义

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分子诊断与治疗杂志 2021年第2期13卷 247-250页

作者：韦婵妍黄琼华汕头潮南民生医院妇产科广东汕头515100

目的探讨无翅型MMTV整合位点家族成员5a(wnt-5a)、无翅型MMTV整合位点家族成员(wnt-11)及Ca~(2+)/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在良性转归及恶性变葡萄胎组织中的表达其临床意义。方法收集2009年3月至2020年3月本院72例葡萄胎患者首... 详细信息

目的探讨无翅型MMTV整合位点家族成员5a(wnt-5a)、无翅型MMTV整合位点家族成员(wnt-11)及Ca~(2+)/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在良性转归及恶性变葡萄胎组织中的表达其临床意义。方法收集2009年3月至2020年3月本院72例葡萄胎患者首次清宫石蜡标本,其中28例为随访发生恶变的葡萄胎(恶变葡萄胎组),44例为随访未发生恶变的葡萄胎(良性转归葡萄胎组),采用免疫组织化学法(IHC)检测上述组织标本中wnt-5a、wnt-11及CaMKⅡ蛋白表达情况;采用ROC曲线分析wnt-5a、wnt-11及CaMKⅡ蛋白表达对葡萄胎恶变的预测效能。结果恶变葡萄胎组和良性转归葡萄胎组的wnt-5a(75.00%vs 29.55%)、wnt-11(82.14%vs 22.13%)及CaMKⅡ(89.29%vs 63.64%)蛋白阳性表达率比较,恶变葡萄胎组均显著高于良性转归葡萄胎组,差异有统计学意义(Pwnt-5a阳性(OR=3.347,95%CI:1.586~7.062)、wnt-11阳性(OR=3.873,95%CI:1.664~9.014)及CaMKⅡ阳性(OR=1.355,95%CI:1.057~1.738)是葡萄胎恶变的独立危险因素(Pwnt-11预测葡萄胎恶变的的AUC分别大于宫腔病变径线、CaMKⅡ预测的AUC(Pwnt-5a预测的AUC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论恶变葡萄胎首次清宫组织中wnt-5a、wnt-11及CaMKⅡ蛋白表达较良性转归葡萄胎异常升高,三者对葡萄胎恶变具有较好的预测价值。

关键词：葡萄胎 wnt信号通路 wnt-5a wnt-11 Ca~(2+)/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ

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