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解剖学报 2015年第6期46卷 772-779页

作者：王婕胡江江赵辅昆张世馥浙江理工大学生命科学学院杭州310018

目的探讨Wnt-10a在氯高铁血红素(hemin)诱导K562细胞分化过程中的变化及功能。方法通过联苯胺染色检测K562细胞被hemin诱导的阳性率,利用Western blotting和免疫细胞化学分析K562细胞诱导分化过程中Wnt-10a表达水平和细胞定位的变化情况... 详细信息

目的探讨Wnt-10a在氯高铁血红素(hemin)诱导K562细胞分化过程中的变化及功能。方法通过联苯胺染色检测K562细胞被hemin诱导的阳性率,利用Western blotting和免疫细胞化学分析K562细胞诱导分化过程中Wnt-10a表达水平和细胞定位的变化情况,通过半定量PCR与Real-time PCR检测K562细胞诱导分化过程中wnt信号途径关键因子的表达水平及其变化,通过wnt信号途径激活剂与构建Wnt-10a高表达K562细胞株的方法探讨wnt途径改变后对K562细胞诱导分化的影响。结果在hemin诱导K562细胞分化过程中,细胞中的Wnt-10a蛋白表达量和mRNA量都出现了短暂下降后回复的趋势,同时Wnt-10a向胞膜迁移,wnt蛋白所参与的3条信号途径中关键因子的表达水平均有着不同程度的变化。使用wnt信号通路抑制剂后,诱导分化过程中的细胞增殖活力加强,Wnt-10a高表达的K562细胞被hemin诱导分化的能力开始提高,并且wnt经典信号途径的关键因子表达水平也有上升。结论 Wnt-10a与hemin诱导K562细胞红系分化的过程密切相关。

关键词： Wnt-10a K562 氯高铁血红素红系分化免疫印迹法人

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Wnt-10a在红系分化中的功能研究

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作者：王婕浙江理工大学

学位级别：硕士

红系分化是生物体内复杂又精细的重要调控过程之一,涉及机体的发育,干细胞分化与体细胞起源,细胞癌变的调控失序等。红系分化的过程由众多的转录因子,小分子物质如piRNA和microRNA,各种信号通路的综合调控协同进行。当其中的某种调控方... 详细信息

红系分化是生物体内复杂又精细的重要调控过程之一,涉及机体的发育,干细胞分化与体细胞起源,细胞癌变的调控失序等。红系分化的过程由众多的转录因子,小分子物质如piRNA和microRNA,各种信号通路的综合调控协同进行。当其中的某种调控方式出现异常,则可能会使得造血干细胞的正常分化机制失调,细胞过度增殖导致疾病甚至癌症的发生。一系列关于白血病的相关研究中已发现,在某些小分子物质如亚铁血红素、二甲基亚砜、丁酸钠等的诱导下白血病细胞能够发生逆转,表明细胞的分化状态可以被人为地调控。至今为止,主要是通过发现和研究与分化相关的蛋白质(如细胞分化因子)的功能来解析红系分化调控机制。蛋白质组学的思路与技术以及基因芯片等技术为此研究提供了关键的支撑作用,也为研发能使白血病细胞自癌变状态脱离,进入可控正常分化凋亡途径并且适用于临床的的诱导剂提供了实验依据。各种白血病细胞如MEL细胞与K562是研究细胞分化的重要模型细胞系,在某些诱导剂存在的体外培养条件下,这些细胞能够进入红系分化途径,重新表达分化后特有的红系标志蛋白如血红蛋白和血型糖蛋白A等。本文前期利用双向凝胶电泳/质谱蛋白质组学技术,通过比较亚铁血红素(Hemin)诱导人白血病细胞K562分化前后的差异蛋白质组,得到了数百种差异表达的蛋白质。wnt是一大类与胚胎发育,干细胞维持与分化,细胞增殖、迁移、极性决定、死亡及癌症发生有关的分泌型糖蛋白家族。由于wnt信号转导途径也参与了干细胞的分化调控,而Wnt-10a又是在K562细胞诱导前后呈现明显差异表达的蛋白质。为了进一步研究Wnt-10a在红系分化中的功能及其与红系分化的关系,本文通过Western Blot,半定量PCR,Real-Time PCR对Wnt-10a在K562细胞诱导分化过程中表达量的变化进行分析,又通过免疫细胞化学研究了Wnt-10a蛋白在细胞中的定位情况,同时利用MTT实验对诱导分化的K562细胞活性变化进行了检测。此外,通过构建Wnt-10a重组过表达载体来提高K562细胞中Wnt-10a的表达量后进行细胞诱导分化能力和wnt信号途径中关键因子蛋白水平的检测,加入wnt信号传导途径的激活剂来进一步研究wnt信号途径对红白血病细胞诱导分化所产生的影响。结果表明:在Hemin诱导K562细胞分化过程中,Western Blot和半定量PCR分析均发现细胞中的Wnt-10a蛋白表达量和mRNA量都出现了短暂下降后回复的趋势,于此同时,也在K562诱导分化的过程中Wnt-10a向胞膜迁移。而Western Blot、半定量PCR与Real-Time PCR都证实了在Hemin诱导K562细胞红系分化的过程中,wnt蛋白所参与的三条信号途径中的关键因子表达水平均有着不同程度的变化,说明wnt信号通路在红系分化中起着重要的作用。使用wnt信号通路抑制剂后,诱导分化过程中的细胞增殖活力提高情况,Wnt-10a过表达后,K562被Hemin诱导分化的能力也有了提高,并且wnt经典信号途径的关键因子表达水平也有上升,上述两点同样从另一个侧面证实wnt信号通路对于白血病的发生有着显著影响。上述的研究结果表明Wnt-10a乃至wnt信号通路对哺乳动物细胞红系分化的作用具有值得继续深入探讨的价值。也为进一步揭示细胞红系分化机制的研究打下了基础。

关键词： Wnt-10a wnt信号通路红系分化 Hemin K562

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果蝇心脏基因一个新人同源基因Wnt-10a的研究初报

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生命科学研究 2000年第4期4卷 283-289页

作者：曾伟奇朱传炳李永青罗开梅汪神俅吴秀山湖南师范大学生命科学学院中国湖南长沙410081

Wg基因是控制果蝇心脏前体细胞形成的一个关键基因 ,根据物种间同源异型基因结构上的保守性与功能上的相似性 ,我们运用计算机克隆的方法获得了一个新的人同源基因 ,命名为 wnt- 1 0 A.该基因有一富集 GC碱基的启动子 ,m RNA全长约 2 .4... 详细信息

Wg基因是控制果蝇心脏前体细胞形成的一个关键基因 ,根据物种间同源异型基因结构上的保守性与功能上的相似性 ,我们运用计算机克隆的方法获得了一个新的人同源基因 ,命名为 wnt- 1 0 A.该基因有一富集 GC碱基的启动子 ,m RNA全长约 2 .4kb,3′末端包含 ATAAA的加尾信号 ,编码一段长 41 7个氨基酸的蛋白质 ,与小鼠 wnt- 1 0 a的编码蛋白高度相似 .其心脏 EST数目占正常组织 EST总数的 45% ,表明该基因在心脏组织高度表达 ,提示其可能与心脏发育有关 .该基因与其基因家族成员具有相似的同源框序列 ,在肿瘤细胞中大量表达 (占总 EST的 31 % ) ,表明该基因相似于其家族成员 ,可能与肿瘤的发生有关 .

关键词：果蝇心脏基因 Wnt-10a 人同源基因

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