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wnt/β-连环蛋白信号通路负调节蛋白SOST在类风湿关节炎中的研究进展

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现代免疫学 2021年第5期41卷 436-440页

作者：王颖旎武平余泽芸罗云成都中医药大学针灸推拿学院成都610075

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)作为一种慢性全身性的自身免疫性疾病,以滑膜炎症和增生、局灶性骨侵蚀及关节软骨变薄为特征,最终导致严重的关节损伤和残疾。wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路被认为是成人骨和软骨内稳态... 详细信息

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)作为一种慢性全身性的自身免疫性疾病,以滑膜炎症和增生、局灶性骨侵蚀及关节软骨变薄为特征,最终导致严重的关节损伤和残疾。wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路被认为是成人骨和软骨内稳态的关键调节器,能够影响成骨细胞和破骨细胞的产生及功能,对骨量的调控非常关键。经典wnt信号通路受到多种细胞因子的调节,其中硬化蛋白(sclerostin, SOST)作为该通路的内源性负调节蛋白,可通过抑制该通路的转导影响新骨形成。该文对SOST结构、作用机制及其对RA的影响进行综述,旨在探讨wnt/β-连环蛋白/SOST在RA发病机制中的调控作用,为临床治疗RA提供更好的方案。

关键词： wnt/β-连环蛋白信号通路硬化蛋白类风湿关节炎

活血化瘀方剂对重型颅脑损伤大鼠wnt/β-连环蛋白信号通路表达的影响

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中华危重病急救医学 2020年第9期32卷 1101-1106页

作者：王景博韦春珠潘茂华刘鑫杰潘宇政广西医科大学第一附属医院中医科南宁530021 上林县人民医院普通外科南宁530500

目的动态观察重型颅脑损伤(sTBI)急性期大鼠神经功能缺损评分(NSS)、wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路、脑源性神经营养因子(BDNF)与神经生长因子(NGF)的表达规律,探讨活血化瘀方剂的干预作用.方法将126只雄性SD大鼠按随机数字表法... 详细信息

目的动态观察重型颅脑损伤(sTBI)急性期大鼠神经功能缺损评分(NSS)、wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路、脑源性神经营养因子(BDNF)与神经生长因子(NGF)的表达规律,探讨活血化瘀方剂的干预作用.方法将126只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组(生理盐水2 kg/L)、模型组(生理盐水2 kg/L)、脑蛋白水解物组(BP组,5.6 g/kg)、桃红四物汤组(TH组,10.2 g/kg)、血府逐瘀汤组(XF组,15.6 g/kg)、通窍活血汤组(TQ组,9.6 g/kg)、补阳还五汤组(BY组,28.7 g/kg)7组,每组18只.采用改良Feeney自由落体法建立sTBI大鼠模型;对照组不予创伤处理.各组分别于伤后6 h灌胃相应药物,伤后1、3、7 d进行NSS评分;取大鼠海马组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测wnt3a和β-catenin的mRNA表达;采用免疫组化法检测BDNF和NGF的阳性表达.结果与对照组比较,模型组大鼠伤后1 d即出现明显的颅脑损伤症状,表现为NSS评分明显升高,wnt3a和β-catenin的mRNA表达明显上调,BDNF和NGF阳性表达明显增加,说明sTBI大鼠模型制备成功,并随时间延长呈现一定自我修复能力.与模型组相比,XF组、TQ组和BY组NSS评分于伤后1 d即明显下降(分:6.6±1.5、6.1±2.0、5.7±2.4比9.4±1.5,均Pwnt3a和β-catenin的mRNA表达分别于伤后1 d、3 d明显升高,并随时间延长持续升高;4个活血化瘀方剂组wnt3a和β-catenin的mRNA表达于伤后1~3 d均有不同程度的波动,但均于伤后7 d明显高于模型组,以BY组升高更为显著〔wnt3a mRNA(2-ΔΔCt):154.7±4.1比17.4±1.0,β-catenin mRNA(2-ΔΔCt):17.05±0.45比2.74±0.13,均Pwnt3a mRNA(2-ΔΔCt):126.6±2.8比17.4±1.0,β-catenin mRNA(2-ΔΔCt):8.70±1.19比2.74±0.13,均P<0.05〕.与模型组比较,BP组BDNF和NGF的阳性表达在伤后1 d升高,但3 d达峰值后有所下降;4个活血化瘀方剂组BDNF和NGF的阳性表达于伤后1~3 d均有不同程度的波动,但均于伤后7 d明显高于模型组,其中TQ组和BY组在伤后1 d即明显高于模型组〔BDNF阳性细胞(个/MP):56.4±6.2、61.6±7.0比37.4±2.0,NGF阳性细胞(个/MP):58.4±5.0、62.4±4.4比53.4±3.6,均P<0.05〕,且伤后7 d时升高幅度较其他药物组更为显著.结论桃红四物汤、血府逐瘀汤、通窍活血汤和补阳还五汤对sTBI急性期大鼠的神经再生修复均有一定疗效,但作用强度有所不同,以补阳还五汤和通窍活血汤起效更快、效果更好.

关键词：桃红四物汤血府逐瘀汤通窍活血汤补阳还五汤重型颅脑损伤 wnt/β-连环蛋白信号通路神经营养因子

wnt/β-连环蛋白信号通路在部分器官缺血再灌注损伤中的研究进展

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中国现代医生 2024年第10期62卷 106-109页

作者：徐敏张希洲谢芬高三峡大学第一临床医学院/宜昌市中心人民医院西陵院区急诊医学科湖北宜昌443003

缺血再灌注损伤是发生在许多器官和疾病中的病理过程,主要包括两个阶段,一是缺血期缺氧诱导的细胞损伤,二是血流恢复后所引起的一系列级联反应。缺血再灌注损伤可加重细胞和组织损伤。wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路在细胞增殖、... 详细信息

缺血再灌注损伤是发生在许多器官和疾病中的病理过程,主要包括两个阶段,一是缺血期缺氧诱导的细胞损伤,二是血流恢复后所引起的一系列级联反应。缺血再灌注损伤可加重细胞和组织损伤。wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路在细胞增殖、分化、凋亡过程中起重要作用,是一个高度保守的信号级联通路。越来越多的研究发现,激活wnt/β-catenin信号通路可减轻缺血再灌注损伤。本文就wnt/β-catenin信号通路在部分器官缺血再灌注损伤中的研究进展进行综述。

关键词： wnt/β-连环蛋白信号通路器官缺血再灌注损伤

wnt/β-连环蛋白信号通路与炎症性肠病关系的研究进展

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山东医药 2022年第28期62卷 101-104页

作者：陈苗董雪张静王华乔成栋兰州大学第一临床医学院兰州730000 兰州大学第一医院老年病科

炎症性肠病是肠道的慢性非特异性炎症性疾病,其根本病因及发病机制尚不明确,目前认为遗传、环境、免疫因素间复杂的相互作用可能是炎症性肠病发病的主要原因。wnt/β-连环蛋白信号通路能调节肠道干细胞的增殖和分化进程,维持肠上皮细胞... 详细信息

炎症性肠病是肠道的慢性非特异性炎症性疾病,其根本病因及发病机制尚不明确,目前认为遗传、环境、免疫因素间复杂的相互作用可能是炎症性肠病发病的主要原因。wnt/β-连环蛋白信号通路能调节肠道干细胞的增殖和分化进程,维持肠上皮细胞的有序结构和肠道内稳态,其功能紊乱与炎症性肠病密切相关。

关键词：炎症性肠病 wnt/β-连环蛋白信号通路克罗恩病溃疡性结肠炎

沉默CDC20基因通过抑制wnt/β-连环蛋白信号通路对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的影响

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吉林大学学报（医学版） 2024年第5期50卷 1305-1312页

作者：刘春静杨钰杰赵薇刘丽晶王娜齐齐哈尔医学院附属第三医院妇一科黑龙江齐齐哈尔161000

目的:探讨细胞分裂周期蛋白20 (CDC20)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和细胞周期的影响,并阐明其作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞(KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞)... 详细信息

目的:探讨细胞分裂周期蛋白20 (CDC20)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和细胞周期的影响,并阐明其作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞(KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞)中CDC20 mRNA及蛋白表达水平,选择RL95-2细胞用于后续实验。将CDC20 shRNA干扰慢病毒转染至RL95-2细胞中,分为对照组、sh-NC组(感染阴性对照慢病毒)、sh-CDC20组(感染CDC20 shRNA干扰慢病毒)、sh-NC+SM04690组(感染阴性对照慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂SM04690干预48h)和sh-CDC20+SM04690组(感染CDC20shRNA干扰慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) SM04690干预48 h)。RT-qPCR法和Western blotting法检测不同细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,BrdU法检测各组细胞中BrdU阳性细胞百分率,流式细胞术检测各组G2/M期细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平。结果:与T-HESC细胞比较,KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P蛋白表达水平最高。与sh-NC组比较,sh-CDC20组和sh-NC+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(Pwnt/β-连环蛋白信号转导诱导RL95-2细胞G2/M期阻滞,抑制细胞增殖。

关键词：子宫内膜癌细胞分裂周期蛋白20 细胞周期细胞增殖 wnt/β-连环蛋白信号通路

XAV939对胃癌细胞株MKN-45的增殖及wnt/β-连环蛋白信号通路的抑制作用

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中华实验外科杂志 2014年第12期31卷 2745-2747页

作者：何庆良周俊峰黄发昆张琳王家兴福建医科大学附属第一医院胃肠外科一区福州350005

目的观察XAV939对胃癌细胞株MKN-45增殖及wnt/β-连环蛋白（wnt/β-catenin）信号通路的作用.方法检测XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞的增殖抑制作用,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测β-catenin和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1） mRN... 详细信息

目的观察XAV939对胃癌细胞株MKN-45增殖及wnt/β-连环蛋白（wnt/β-catenin）信号通路的作用.方法检测XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞的增殖抑制作用,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测β-catenin和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1） mRNA表达,Western blot法检测Axin 1、β-catenin、磷酸化β-catenin（p-β-catenin）和Cyclin D1的表达.结果不同浓度的XAV939对胃癌细胞株MKN-45细胞增殖的抑制率分别是22.5％、39.1％、52.5％、62.1％（P＜0.05）;不同浓度的XAV-939处理组的β-catenin、Cyclin D1 mRNA表达下降（分别为0.727±0.031、0.467±0.051、0.353±0.035、0.293±0.031,P ＜0.05;0.690 ±0.161、0.487±0.231、0.360±0.257、0.216±0.197,P ＜0.05）,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达下降而Axin 1和p-β-catenin蛋白表达上升.结论 XAV-939可抑制以胃癌细胞株MKN-45的增殖,机制可能是通过抑制wnt/β-catenin通路.

关键词：胃癌 wnt/β-连环蛋白信号通路细胞周期蛋白D1

透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第46期15卷 8574-8578页

作者：刘伯龄邹吉林梁珪清刘献祥李西海吴广文福州市第二医院骨科福建省福州市350007 苏州市中医院骨伤科江苏省苏州市215000 福建中医药大学中西医结合研究院福建省福州市350108

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变。目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白的影响。方法:将SD大鼠关节... 详细信息

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变。目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白的影响。方法:将SD大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素1β诱导软骨细胞退变,取第2代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8d后,采用RT-PCR检测2组wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA表达,采用蛋白印迹法检测wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达。结果与结论:采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象。说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成β-连环蛋白和wnt4蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达。

关键词：透骨消痛颗粒软骨细胞 wnt/β-连环蛋白信号通路白细胞介素1β 中医药组织构建

人脐带间充质干细胞通过wnt/β-连环蛋白信号通路防治大鼠激素性骨质疏松

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中华实验外科杂志 2022年第7期39卷 1247-1251页

作者：王学中邓爽张宇标刘子林黄俊彭昊武汉大学人民医院骨科 430060

目的探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)在防治大鼠激素性骨质疏松(GIOP)方面的疗效及其潜在的分子生物学机制。方法采用光学显微镜、流式细胞技术对HUC-MSCs进行表征和鉴定。成骨细胞MC3T3-E1分为对照组、地塞米松(DEX)组、DEX+不同比例... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)在防治大鼠激素性骨质疏松(GIOP)方面的疗效及其潜在的分子生物学机制。方法采用光学显微镜、流式细胞技术对HUC-MSCs进行表征和鉴定。成骨细胞MC3T3-E1分为对照组、地塞米松(DEX)组、DEX+不同比例HUC-MSCs组。对照组加入正常培养基,DEX组加入10μmol/L DEX处理,DEX+不同比例HUC-MSCs组加入10μmol/L DEX处理细胞,然后将HUC-MSCs按照1∶1、10∶1、100∶1的比例在共培养小室中与MC3T3-E1非接触式共培养48 h。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力。24只SD大鼠随机分成3组(n=8):对照组、模型组、治疗组(HUC-MSCs组)。模型组使用DEX构建GIOP模型,对照组给予等量磷酸盐缓冲液(PBS),治疗组在构建GIOP模型的同时通过尾静脉注射约106个HUC-MSCs进行治疗。8周后取股骨组织样本,采用苏木精-伊红(HE)染色观察空骨陷窝率,脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色评价细胞凋亡。进行Micro CT扫描,测量骨密度(BMD)、单位组织体积的骨量(Bv/Tv)、骨小梁厚度(***)、骨小梁间距(***)、骨小梁数量(Tb.N)等骨质疏松相关指标。提取组织蛋白后,用蛋白印迹法(Western blot)检测通路蛋白表达。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果流式细胞鉴定结果显示,HUC-MSCs高表达CD44(99.9%)、CD73(98.0%)、CD90(100.0%)、CD105(99.6%)、CD166(99.9%),低表达CD14(0.43%)、CD19(1.11%)、CD34(0.89%)、CD45(1.06%)、HLA-DR(0.38%),符合HUC-MSCs表面特异性抗原表达规律。CCK-8显示,模型组较对照组细胞活力明显下降,与HUC-MSCs共培养后可部分恢复MC3T3-E1活力。HE染色对照组、模型组、HUC-MSCs组空骨陷窝率分别为(2.546±1.049)%、(28.720±1.546)%、(13.600±1.012)%。TUNEL染色结果对照组、模型组、HUC-MSCs组TUNEL阳性细胞的比例分别为(2.334±0.789)%、(24.140±4.646)%、(11.610±2.974)%。Micro CT显示模型组BMD、BV/TV、***、Tb.N均降低,***增加,HUC-MSCs治疗可以一定程度上逆转上述改变。Western blot结果表明,与对照组比较,模型组β-连环蛋白(β-catenin)、Runt相关基因2(Runx2)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)蛋白表达均明显下降,硬化素(SOST)蛋白表达增加,HUC-MSCs治疗组β-catenin、Runx2、BMP-2表达较模型组增加,SOST表达相应减少。结论HUC-MSCs能够通过wnt/β-catenin信号通路改善地塞米松所致的骨丢失。

关键词：人脐带间充质干细胞 wnt/β-连环蛋白信号通路骨质疏松 β-连环蛋白骨形态发生蛋白-2

长链非编码RNA Crnde通过调节wnt/β-连环蛋白信号通路影响小鼠成骨细胞增殖的研究

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中华实验外科杂志 2021年第4期38卷 708-711页

作者：孙新志廖鹰郭俊杰姬延辉刘宏建郑州大学第一附属医院骨科 450052 郑州铁道警察学院刑事科学技术系 450053

目的观察长链非编码RNA Crnde通过调节wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对小鼠成骨细胞增殖的影响。方法培养MC3T3-E1成骨细胞,随后诱导分化3周,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Crnde表达,应用CRISPR-Cas9方法构建Crnde基... 详细信息

目的观察长链非编码RNA Crnde通过调节wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对小鼠成骨细胞增殖的影响。方法培养MC3T3-E1成骨细胞,随后诱导分化3周,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Crnde表达,应用CRISPR-Cas9方法构建Crnde基因敲除小鼠模型,同时以野生型小鼠作为对照,分为Crnde基因敲除小鼠组(n=25)和野生型小鼠组(n=25),小鼠处死前12 h腹腔注射BrdU进行染色观察成骨细胞增殖,检测血清1型前胶原N末端(P1NP)和Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-Ⅰ)表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测骨组织wnt和β-catenin蛋白表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况,分别运用Osteomeasure系统和MicroCT分析进行骨组织形态计量分析,双荧光素酶报告基因验证Crnde与wnt蛋白的靶向调节关系。组间比较采用t检验。结果成骨细胞分化过程Crnde表达情况为在诱导的3周时间内,随着时间延长,Crnde表达明显增加,在第3周表达最高(P>0.05);wnt和β-catenin在Crnde^(-/-)小鼠和正常小鼠中表达情况中,蛋白质印迹法(Western blot)结果显示,Crnde^(-/-)组中wnt和β-catenin蛋白表达低于WT小鼠组(P0.05);μCT和Osteomeasure系统结果显示,椎骨的组织形态分析BV/TV,WT组[(19.43±1.53)%],Crnde^(-/-)组[(20.14±1.56)%],Crnde^(-/-)鼠的小梁和皮质骨均显示出低骨量表型,Crnde^(-/-)小鼠的骨形成参数均与野生型小鼠差异有统计学意义(P0.05)。结论Crnde通过wnt/β-catenin信号传导调节骨形成。

关键词：长链非编码RNA wnt/β-连环蛋白信号通路成骨细胞增殖