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枸杞多糖干预膝骨关节炎模型兔关节软骨组织CD151和基质金属蛋白酶3的表达

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中国组织工程研究 2020年第17期24卷 2648-2653页

作者：赵飞丁冬巩凡黄永禄姚占川李晓亮罗小军岳建明宁夏医科大学附属自治区人民医院手足与重建显微外科

背景:有研究表明枸杞多糖具有抗老化、保护神经、抗疲劳、控制血糖、抗氧化及抗肿瘤等作用,其对于膝关节的骨性关节炎可能具有一定的保护作用,但目前还鲜有学者报道,CD151和基质金属蛋白酶3是评价膝关节骨性关节炎常用的因子。目的:观... 详细信息

背景:有研究表明枸杞多糖具有抗老化、保护神经、抗疲劳、控制血糖、抗氧化及抗肿瘤等作用,其对于膝关节的骨性关节炎可能具有一定的保护作用,但目前还鲜有学者报道,CD151和基质金属蛋白酶3是评价膝关节骨性关节炎常用的因子。目的:观察枸杞多糖对CD151和基质金属蛋白酶3在兔骨性关节炎中表达的影响。方法:健康6月龄大耳白兔64只随机分等为4组:空白组、模型组、枸杞多糖组及生理盐水组。除了空白组外,其他3组均采用Hulth法复制膝骨关节炎模型兔,枸杞多糖组及生理盐水组以常规剂量枸杞多糖及生理盐水灌胃饲养4周。造模后12周取各组患侧关节软骨组织,应用苏木精-伊红染色观察各组关节软骨形态学变化,应用免疫组织化学染色及western blot法观察CD151和基质金属蛋白酶3在各组关节软骨中的表达水平及空间分布。实验于2014年1月经宁夏人民医院动物伦理委员会批准(批准号:2014-30817)。结果与结论:①免疫组织化学染色和western blot检测显示,枸杞多糖组关节软骨组织中CD151和基质金属蛋白酶3吸光度值及蛋白表达均低于生理盐水组与模型组(P<0.05);②上述结果证实,在骨性关节炎关节软骨组织中CD151和基质金属蛋白酶3表达增高,枸杞多糖可抑制骨性关节炎中CD151和基质金属蛋白酶3的高表达,从而减缓骨性关节炎的发生。

关键词：枸杞多糖 CD151 基质金属蛋白酶3 骨性关节炎兔膝关节免疫荧光染色 western-blot法苏木精-伊红染色动物模型

pSG5-Cbfa1转染兔皮肤成纤维细胞及其瞬时表达

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上海医学 2004年第7期27卷 502-505页

作者：肖德常杨庆铭邓廉夫张伟上海市伤骨科研究所

目的　探讨外源性小鼠Cbfa1基因在兔皮肤成纤维细胞中获得瞬时表达的可行性。方法　在阳离子脂质体介导下 ,将含外源性小鼠Cbfa1基因的 pSG5 Cbfa1真核表达质粒导入原代培养的第 2代兔皮肤成纤维细胞内。采用RT PCR及western blot法检... 详细信息

目的　探讨外源性小鼠Cbfa1基因在兔皮肤成纤维细胞中获得瞬时表达的可行性。方法　在阳离子脂质体介导下 ,将含外源性小鼠Cbfa1基因的 pSG5 Cbfa1真核表达质粒导入原代培养的第 2代兔皮肤成纤维细胞内。采用RT PCR及western blot法检测Cbfa1基因在兔皮肤成纤维细胞内的瞬时表达。同时采用RT PCR法检测细胞内骨钙素及碱性磷酸酶基因的表达情况。结果　转染pSG5 Cbfa1真核表达质粒的兔皮肤成纤维细胞内有大量小鼠Cbfa1mRNA转录及蛋白瞬时表达 ,同时诱导骨钙素mRNA及碱性磷酸酶mRNA大量表达。结论　在阳离子脂质体介导下 ,小鼠Cbfa1基因能够导入兔皮肤成纤维细胞内并获得瞬时表达。

关键词： pSG5-Cbfal转染皮肤成纤维细胞瞬时表达 western-blot法 RT-PC

分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗菌株的筛选

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中华结核和呼吸杂志 2005年第4期28卷 254-257页

作者：师长宏徐志凯朱德生李元柏银兰薛莹第四军医大学基础部微生物学教研室西安710033

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(***.... 详细信息

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(***.)BCG穿梭载体pOLYG中,构建分枝杆菌分泌表达载体pDE22,按相应的酶切位点将ag85b和esat6按照不同的连接方式联合克隆入pDE22载体,分别命名为pDE22Ag85B ESAT6和pDE22ESAT6Ag85B,将纯化的重组质粒电穿入BCG,经潮霉素抗性筛选和PCR的方法鉴定出含目的基因的重组BCG阳性克隆。收集重组BCG的培养上清液,经浓缩和透析后,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和固相化蛋白质免疫学测定(western blot法)分析。结果两株重组BCG菌株的培养上清液分泌表达相对分子质量约37000的蛋白,且分别可与抗Ag85B和抗ESAT6蛋白免疫小鼠的血清有相应的结合条带。结论分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组BCG菌株构建成功,有望为结核病的预防提供有效的疫苗。

关键词： Ag85B 融合蛋白十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳重组卡介苗 western-blot法菌株聚合酶链反应(PCR) 卡介苗(BCG) 重组BCG ESAT6蛋白培养上清液结核分枝杆菌分泌表达载体相对分子质量信号肽序列热休克蛋白 H37Rv

蓝桉油对单核细胞THP-1核因子-κB核转位活化的影响

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浙江大学学报（医学版） 2003年第4期32卷 315-318,326页

作者：周建娅唐法娣毛国根邵杰王砚卞如濂浙江大学医学院国家食品药品监督管理局浙江呼吸药物研究实验室浙江杭州310031

目的 :探讨蓝桉油对人单核细胞 THP- 1细胞株核因子 - κB(NF- κB)核转位活化的影响。方法 :蓝桉油 (1、10、10 0 mg/L,30 min)预处理 THP- 1细胞 ,经脂多糖 (L PS,1mg/L,30 min)刺激后 ,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚... 详细信息

目的 :探讨蓝桉油对人单核细胞 THP- 1细胞株核因子 - κB(NF- κB)核转位活化的影响。方法 :蓝桉油 (1、10、10 0 mg/L,30 min)预处理 THP- 1细胞 ,经脂多糖 (L PS,1mg/L,30 min)刺激后 ,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜 ,测定 THP- 1细胞 NF- κB p6 5亚基 (NF- κB/p6 5 )定位 ;western- blot法分析细胞核内NF- κB/p6 5水平。结果 :免疫荧光分析显示 ,正常细胞 NF- κB/p6 5荧光标记主要分布于胞浆区 ,核区很少 ,L PS刺激后 NF- κB/p6 5荧光标记浓集于核区 ,胞浆区少见 ;但经蓝桉油 (10 0 mg/L)预处理后 ,LPS刺激的 THP- 1细胞NF- κB/p6 5荧光标记则主要位于胞浆区 ;western- blot分析显示 ,在正常 THP- 1细胞核蛋白中有低水平的 NF- κB/p6 5表达 ,经 L PS刺激 ,核内 NF- κB/p6 5表达明显增高 ;蓝桉油预处理后 ,可以抑制 LPS诱导的核内 NF- κB/p6 5高水平表达 ,且呈剂量依赖关系。结论 :蓝桉油预处理阻止了 LPS诱导的 NF- κB/p6 5核转位 ,从而抑制了其活性功能的发挥。蓝桉油可抑制 LPS刺激引起的 NF- κB核转位活化。

关键词：脂多糖类核因子-κB 单核细胞蓝桉油显微镜检查共焦 THP一1细胞株 western-blot法

乐果对U87细胞HSP70表达及AChE活性的影响

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环境与职业医学 2005年第2期22卷 105-108页

作者：谢芳周志俊吴强恩吴同俊复旦大学公共卫生学院劳动卫生教研室上海200032

[目的]研究乐果对神经胶质瘤细胞U87热应激蛋白70 (HSP70 )表达的影响规律,比较HSP70与乙酰胆碱酯酶(AChE)对乐果的敏感性。[方法]以不同浓度乐果(10 0、10、1、0 .1、0 .0 1、0 μmol/L)对体外培养的U87细胞分别进行2、4、8、16和2 4h... 详细信息

[目的]研究乐果对神经胶质瘤细胞U87热应激蛋白70 (HSP70 )表达的影响规律,比较HSP70与乙酰胆碱酯酶(AChE)对乐果的敏感性。[方法]以不同浓度乐果(10 0、10、1、0 .1、0 .0 1、0 μmol/L)对体外培养的U87细胞分别进行2、4、8、16和2 4h染毒,再分别用western blot法和DTNB法检测各组细胞HSP70表达和AChE活性的变化,比较这两个指标变化的幅度以及引起此变化所需乐果浓度和染毒时间的差异。[结果]乐果染毒2h即可引起HSP70表达的显著增高(P <0 .0 1) ,这一变化在染毒4h时出现于各剂量组,并可持续至染毒16h。在染毒2h和4h ,HSP70表达的变化与乐果剂量之间存在相关关系(Pearson相关系数分别为0 .916和0 .989,P <0 .0 1)。AChE活性的显著降低出现在染毒4h ,且仅出现在剂量较高的3个组,变化幅度也较小。[结论]乐果可以在相对较短时间内以较低剂量引起U87细胞HSP70表达的显著变化,并存在一定的剂量反应关系。HSP70比AChE对乐果更为敏感。

关键词： AChE活性乐果热应激蛋白70(HSP70) western-blot法 HSP70表达表达及神经胶质瘤细胞剂量一反应关系乙酰胆碱酯酶 DTNB法不同浓度体外培养染毒时间指标变化相关系数相关关系敏感性 24h 组细胞出现低剂量幅度

抑癌基因TSC1在胃癌组织中的初步检测及其意义

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抑癌基因TSC1在胃癌组织中的初步检测及其意义

作者：翁韵琦青岛大学

学位级别：硕士

目的检测TSC1基因表达产物在胃癌组织中的表达水平并探讨其表达水平与胃癌临床病理特征的关系。方法收集胃癌组织标本40例，癌旁正常组织标本40例，用western-blot法检测样本中TSC1蛋白和β-actin蛋白含量，分别测定TSC1带与β-actin带... 详细信息

目的检测TSC1基因表达产物在胃癌组织中的表达水平并探讨其表达水平与胃癌临床病理特征的关系。方法收集胃癌组织标本40例，癌旁正常组织标本40例，用western-blot法检测样本中TSC1蛋白和β-actin蛋白含量，分别测定TSC1带与β-actin带的黑度值，以黑度值的比值A值表示TSC1蛋白表达水平。结果胃癌组织中TSC1带与β-actin带的比值(A值)为0.121±0.115，正常组织A值为0.172±0.104。t检验分析结果显示肿瘤组低于正常组(t=2.08，P=0.041)。，二者间差异有统计学意义。胃癌组织中TSC1带与β-actin带的比值(A值)与患者的性别、年龄无关(P＞0.05)，与肿瘤的大小、临床分期、分化程度和淋巴结转移无关(P＞0.05)。结论TSC1蛋白表达在胃癌组织较正常组织的有明显减少，有统计学意义。在本实验条件下，TSC1蛋白表达与患者的年龄性别无关，与肿瘤的恶性程度、临床分期、肿瘤大小无关。

关键词：胃肿瘤 TSC1蛋白 western-blot法

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胃癌中酪氨酸激酶受体RON的表达和意义

胃癌中酪氨酸激酶受体RON的表达和意义

作者：郑晶晶浙江大学

学位级别：硕士

【目的】探讨RON蛋白在胃癌组织中的表达及其与预后的关系。【方法】采用免疫组化Envision法检测98例胃癌组织、29例癌旁组织和10例正常胃粘膜的RON表达及用western-blot方法检测19例新鲜胃癌组织、癌旁组织、转移的淋巴结和10例正常... 详细信息

【目的】探讨RON蛋白在胃癌组织中的表达及其与预后的关系。【方法】采用免疫组化Envision法检测98例胃癌组织、29例癌旁组织和10例正常胃粘膜的RON表达及用western-blot方法检测19例新鲜胃癌组织、癌旁组织、转移的淋巴结和10例正常胃粘膜中RON的表达情况,检测正常胃粘膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞株HGC-27、SGC-7901、BGC-803和BGC-823的RON蛋白表达。对所有胃癌术后患者进行随访,随访期为3～89个月(中位时间22个月),生存率的比较用Kaplan-Meier法估计生存曲线。【结果】(1)98例胃癌组织RON阳性表达率为56.1%(55/98),29例癌旁组织RON阳性表达率为25.6%(8/29),统计学差异有意义(P=0.007);正常胃粘膜不表达RON;(2)RON表达与胃癌细胞浸润深度、有否伴淋巴结转移和临床病理分期有明显关系(P=0.019;P=0.019和P=0.001),而与Borrmann分型、组织学类型及是否伴远处转移无明显关系(P=0.209;P=0.196;P=0.400);(3)RON阳性表达组与阴性组术后生存率无明显差异(P=0.195);(4)胃癌新鲜组织,相应癌旁组织和伴有胃癌转移的淋巴结中RON变异体(RON△165)均呈强表达,而正常胃粘膜和正常淋巴结未见RON变异体表达;(5)正常人胎儿胃粘膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞株SGC-7901、BGC-803、BGC-823均有不同程度的RON蛋白表达,而未分化胃癌细胞株HGC-27未发现有RON蛋白表达。【结论】RON主要表达于胃癌组织而不表达于正常胃粘膜,并且与胃癌的浸润深度、是否伴有淋巴结转移和胃癌临床病理分期呈正相关,提示RON在胃癌的发生、发展和浸润转移方面发挥重要作用,这对评估胃癌生物学行为及寻找胃癌新的治疗靶点有一定指导作用。

关键词：胃癌 RON 胃癌细胞株预后免疫组化法 western-blot法

eIF4E、VEGF及bFGF在喉鳞癌中的表达及相关性研究

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eIF4E、VEGF及bFGF在喉鳞癌中的表达及相关性研究

作者：张海利山西医科大学

学位级别：硕士

目的：通过检测eIF4E、VEGF及bFGF在喉鳞癌(LSCC)中的表达，探讨三者与喉鳞癌的关系及其相互之间的内在关系。方法：采用免疫组织化学法检测52例喉鳞癌(LSCC)组织、20例喉粘膜不典型增生组织、30例喉良性增生组织及10例正常喉粘膜组织... 详细信息

目的：通过检测eIF4E、VEGF及bFGF在喉鳞癌(LSCC)中的表达，探讨三者与喉鳞癌的关系及其相互之间的内在关系。方法：采用免疫组织化学法检测52例喉鳞癌(LSCC)组织、20例喉粘膜不典型增生组织、30例喉良性增生组织及10例正常喉粘膜组织中eIF4E、VEGF及bFGF基因蛋白的表达情况;用western-blot法检测20例新鲜喉鳞癌标本的癌中心区(TC，tumor core)、过渡区(TR，transition core)及病理证实的无癌区(TF，“tumor-free”core)中eIF4E、VEGF及bFGF的表达情况。结果：免疫组织化学法结果示：eIF4E、VEGF及bFGF在喉鳞癌中表达的阳性率分别为100.0％、75.0％及82.7％，均显著高于对照组。VEGF及bFGF的高表达与颈淋巴结转移相关。western-blot法结果显示：eIF4E及bFGF在喉鳞癌的无癌区(TF)、过渡区(TR)及中心区(TC)的表达水平呈进行性增高;VEGF在喉鳞癌的癌中心区的表达水平显著高于过渡区及无癌区;eIF4E、VEGF及bFGF三者之间密切相关。结论：过度表达的eIF4E是喉鳞癌恶性改变及判断其恶性程度的一个分子标志;VEGF的高表达与喉鳞癌的生长及转移密切相关，其或许可以作为判断预后的指标之一;bFGF的过度表达与喉癌的生长、转移及恶性程度相关;三者在喉癌中的表达具有相关性，可为喉鳞癌的基因治疗提供一定的理论基础。

关键词： eIF4E VEGF bFGF 免疫组织化学法 western-blot法 LSCC

TGF-β1、Endoglin与妊娠期高血压疾病相关性的研究

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TGF-β1、Endoglin与妊娠期高血压疾病相关性的研究

作者：程兰天津医科大学

学位级别：硕士

目的：检测孕晚期妊娠期高血压疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy, HDCP)患者及正常孕妇血清中转化生长因子-p1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、可溶性CD105淋巴细胞抗原(soluble Endoglin, sEng)的浓度及TGF-β1、转化生长因子p受体Ⅱ(TGF-βRⅡ、Endoglin在胎盘及子宫浅肌层中的表达水平,探究其间的相关关系,阐明TGF-β1、Endoglin在妊娠期高血压疾病发病机制中的作用。对象和方法：收集2009年4月-2010年4月期间在天津医科大学第二医院产科住院分娩的妊娠期高血压疾病患者,其中妊娠期高血压组30例,轻度子痫前期组30例,重度子痫前期组30例。选择同期住院的正常晚期妊娠妇女20例为对照组。各组孕妇均为单胎、初产,排除内科合并症及其他产科并发症,各组均以剖宫产结束分娩。应用双抗体夹心酶标免疫分析法检测血清TGF-β1及sEng浓度,以westernblot法检测胎盘及子宫浅肌层TGF-β1、TGF-βRⅡ及Eng表达水平。结果： 1.各组的收缩压差异均有统计学意义(P0.05);体质量指数仅重度子痫前期组与对照组、妊娠期高血压组差异有统计学意义(Pwestern-blot方法结果可靠,可以作为TGF-β1、Endoglin及sEng在血清及组织中表达水平的研究方法。 2.与对照组相比,病例组血清中TGF-β1及sEng浓度

关键词：妊娠期高血压疾病转化生长因子-β CD105淋巴细胞抗原可溶性Endoglin 胎盘子宫肌层酶联免疫吸附法 western-blot法