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拟南芥wuschel蛋白的原核表达、亲和纯化和多克隆抗体制备

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生物工程学报 2009年第9期25卷 1409-1416页

作者：王增代茹张江巍陈尚武张文马会勤中国农业大学农学与生物技术学院北京100193 中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

本研究构建了带有His标签的拟南芥(Arabidopsis thaliana)wuschel基因原核表达载体pET-31b(+)-WUS-His(6),优化了大肠杆菌(Escherichia coli)诱导表达体系,将亲和层析纯化后的WUS融合蛋白,经尿素梯度透析复性溶解,免疫新西兰大白兔,成... 详细信息

本研究构建了带有His标签的拟南芥(Arabidopsis thaliana)wuschel基因原核表达载体pET-31b(+)-WUS-His(6),优化了大肠杆菌(Escherichia coli)诱导表达体系,将亲和层析纯化后的WUS融合蛋白,经尿素梯度透析复性溶解,免疫新西兰大白兔,成功制备了WUS蛋白多克隆抗体。通过琼脂糖免疫扩散检测确定了抗血清效价和特异性,并以斑点杂交和Western blotting检验其灵敏性。结果表明,成功构建的拟南芥WUS原核表达载体,在E.coli中以0.5mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)28°C诱导表达10h后,融合蛋白得到高水平表达,亲和纯化后目标蛋白纯度达96%以上,所制备的多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性,可用来检测纳克级蛋白抗原。

关键词：拟南芥 wuschel 蛋白质亲和纯化抗体

Stem Cell Regulation by Arabidopsis WOX Genes

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Molecular Plant 2016年第7期9卷 1028-1039页

作者： Alicja Dolzblasz Judith Nardmann Elena Clerici Barry Causier Eric van der Graaff Jinhui Chen Brendan Davies Wolfgang Werr Thomas Laux BIOSS Centre for Biological Signalling Studies Faculty of Biology Albert-Ludwigs-University Freiburg 79104 Freiburg Germany Institute of Developmental Biology Biocenter Cologne University zu KoIn Zulpicher Street 47b 50674 K61n Germany Centre for Plant Sciences University of Leeds Leeds LS2 9JT UK present address: Department of Plant Developmental Biology Institute of Experimental Biology Faculty of Biological Sciences University of Wroclaw50-328 Wroclaw Poland present address: Department of Plant and Environmental Sciences Copenhagen Plant Science Center University of Copenhagen 1871 Taastrup Denmark Present address: Key Laboratory of Forest Genetics & Biotechnology Ministry of Education Nanjing Forestry University 210037 Nanjing China

Gene amplification followed by functional diversification is a major force in evolution. A typical example of this is seen in the wuschel-RELATED HOMEOBOX （WOX） gene family, named after the Arabidopsis stem cell regulator wuschel. Here we analyze functional divergence in the WOX gene family. Members of the WUS clade, except the cambium stem cell regulator WOX4, can substitute for WUS function in shoot and floral stem cell maintenance to different degrees. Stem cell function of WUS requires a canonical WUS-box, essential for interaction with TPL/TPR co-repressors, whereas the repressive EAR domain is dispensable and the acidic domain seems only to be required for female fertility. In contrast to the WUS clade, members of the ancient WOX13 and the WOX9 clades cannot support stem cell maintenance. Although the homeodomains are interchangeable between WUS and WOX9 clade members, a WUS- compatible homeodomain together with canonical WUS-box is not sufficient for stem cell maintenance. Our results suggest that WOX function in shoot and floral meristems of Arabidopsis is restricted to the modern WUS clade, suggesting that stem cell control is a derived function. Yet undiscovered functional domains in addition to the homeodomain and the WUS-box are necessary for this function.

关键词： Arabidopsis thaliana shoot meristem stem cells WOX genes wuschel

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拟南芥离体苗再生的分子机制研究进展

植物生理学报 2020年第8期56卷 1737-1744页

作者：代学焕刘娜王丽娟向凤宁刘振华山东大学生命科学学院植物发育与环境适应生物学教育部重点实验室山东青岛266237

植物细胞具有全能性,在离体条件下,植物体细胞可通过干细胞功能的获得、干细胞中心(stem cell niche)重建和芽尖分生组织形成不断地再生植株。随着分子生物学的发展,人们对植株再生的认识逐渐从培养体系优化深入到分子水平,多个再生相... 详细信息

植物细胞具有全能性,在离体条件下,植物体细胞可通过干细胞功能的获得、干细胞中心(stem cell niche)重建和芽尖分生组织形成不断地再生植株。随着分子生物学的发展,人们对植株再生的认识逐渐从培养体系优化深入到分子水平,多个再生相关的重要功能基因已经被挖掘,逐渐形成了以植物干细胞关键基因WUS(wuschel)为核心的离体苗再生调控网络。本文主要综述了拟南芥离体苗再生的主要细胞学事件及分子调控机制的最新研究进展,并展望了未来植物再生机制研究的可能方向。

关键词：细胞全能性干细胞中心重建离体苗再生 wuschel

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普通油茶WOX基因家族的鉴定及表达分析

南方林业科学 2022年第3期50卷 1-4,9页

作者：赵松子幸伟年江西省林业科学院·江西省油茶种质资源保护与利用实验室江西南昌330013

WOX基因家族是植物特有的转录因子,参与调节植物的生长与发育,wuschel(WUS)是该家族中与作物产量相关的基因。研究通过对普通油茶(Camellia oleifera)基因组、转录组数据的挖掘,鉴别出18个WOX基因,其中,CoWUS来自油茶基因组三代测序数据... 详细信息

WOX基因家族是植物特有的转录因子,参与调节植物的生长与发育,wuschel(WUS)是该家族中与作物产量相关的基因。研究通过对普通油茶(Camellia oleifera)基因组、转录组数据的挖掘,鉴别出18个WOX基因,其中,CoWUS来自油茶基因组三代测序数据。CoWOX11A与CoWOX11B在种仁中高水平表达,可能对种仁发育具有重要作用;CoWUS在柱头中高水平表达,经与WOX基因家族的蛋白质序列进行比对分析并构建进化树,结果表明,CoWUS是WUS的同源基因,表明CoWUS可能参与油茶果实心皮数的调控,影响油茶的产量。

关键词：普通油茶 WOX 产量 wuschel 同源基因

DWARF TILLER1,a wuschel-related homeobox transcription factor,is required for tiller growth in rice

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DWARF TILLER1,a WUSCHEL-related homeobox transcription facto...

从量变到质变,wuschel蛋白对CLV3基因转录的剂量调控机理

2013全国植物生物学大会

作者： WANG Wenfei LI Gang ZHAO Jun CHU Huangwei ZHANG Dabing WANG Zhiyong LIANG Wanqi Key Laboratory of Plant Molecular Physiology Institute of BotanyChinese Academy of Sciences China State Key Laboratory of Hybrid Rice School of Life Sciences and BiotechnologyShanghai Jiao Tong University China Department of Plant Biology Carnegie Institution for Science

Unlike many wild grasses,domesticated rice cultivars have uniform culm height and panicle size among tillers and the main shoot,which is an important trait for grain yield.However,the genetic basis of

关键词： main shoot dominance wuschel related homeobox gene rice

来源： cnki会议评论

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植物学研究 2021年第3期10卷 265-268页

作者：孔鑫鑫张汉马重庆师范大学生命科学学院植物环境适应分子生物学重庆市重点实验室重庆

wuschel和CLAVATA3是拟南芥茎尖分生组织调控网络中的两个关键基因,它们在茎尖分生组织中的相邻区域表达,在转录水平上存在相互调控关系。现有观点认为WUS蛋白对CLV3的表达主要具激活的功能,Perales等人的近期研究结果发现WUS蛋白可根... 详细信息

wuschel和CLAVATA3是拟南芥茎尖分生组织调控网络中的两个关键基因,它们在茎尖分生组织中的相邻区域表达,在转录水平上存在相互调控关系。现有观点认为WUS蛋白对CLV3的表达主要具激活的功能,Perales等人的近期研究结果发现WUS蛋白可根据其浓度对CLV3转录有激活或抑制的作用。该发现不仅提供了一个WUS与CLV3相互调控的新模式,同时也可解释为什么CLV3在WUS的表达区内没有表达。

关键词： wuschel CLV3 剂量调控转录调控

龙眼体细胞胚胎发生过程中DlWUS的克隆与表达分析

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西北植物学报 2015年第5期35卷 890-897页

作者：张冬敏田奇琳杨曼曼林玉玲赖钟雄福建农林大学园艺植物生物工程研究所福州350002

以龙眼‘红核子’LC2悬浮细胞系诱导的胚性愈伤组织为基本材料,按照龙眼体细胞胚胎同步化方法诱导获得龙眼体胚不同阶段材料,并以龙眼体细胞胚胎发生不同阶段混合材料作为试验材料,采用RT-PCR结合RACE技术分离并克隆龙眼中编码同源异型... 详细信息

以龙眼‘红核子’LC2悬浮细胞系诱导的胚性愈伤组织为基本材料,按照龙眼体细胞胚胎同步化方法诱导获得龙眼体胚不同阶段材料,并以龙眼体细胞胚胎发生不同阶段混合材料作为试验材料,采用RT-PCR结合RACE技术分离并克隆龙眼中编码同源异型结构域蛋白的转录因子wuschel(简称DlWUS)的cDNA全长及DNA序列,并进行序列分析与表达分析。结果表明:DlWUS的cDNA全长1 110bp,开放阅读框(ORF)858bp,共编码285个氨基酸(GenBank登录号为KM017506),DlWUS的DNA包含2个内含子。序列分析表明,DlWUS是一个不稳定的亲水蛋白,不含信号肽,亚细胞定位于细胞核,具跨膜结构和Homeodomain超级家族的保守结构域以及WUS转录因子家族特有的WUS box和EAR-like结构域,推测该目的基因确实为WUS转录因子。系统进化分析显示,龙眼DlWUS与脐橙WUS归为一个分支,亲缘关系较近。实时荧光定量PCR分析结果表明,在龙眼体细胞胚胎发生整个过程中,DlWUS均有表达,但仅在球形胚时期表达量较高,说明DlWUS可能主要在球形胚阶段发挥作用,并且在一定浓度范围内,外源施加IAA和GA3能够促进DlWUS基因的表达,而外源施加SA则抑制DlWUS基因的表达。

关键词：龙眼体细胞胚胎发生 wuschel 实时荧光定量PCR

C2H2锌指蛋白ZFP11调控拟南芥胚珠发育的初步研究

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C2H2锌指蛋白ZFP11调控拟南芥胚珠发育的初步研究

作者：蔡杰南京大学

学位级别：硕士

拟南芥的花由四轮花器官组成,分别为萼片、花瓣、雄蕊和雌蕊。而雌蕊做为最晚发育的花器官,由柱头、花柱和子房三部分构成。在雌蕊发育过程中,会产生胚珠,胚珠最终会发育成种子,所以胚珠的正常发育对于雌蕊相当重要。胚珠由三个部分发... 详细信息

拟南芥的花由四轮花器官组成,分别为萼片、花瓣、雄蕊和雌蕊。而雌蕊做为最晚发育的花器官,由柱头、花柱和子房三部分构成。在雌蕊发育过程中,会产生胚珠,胚珠最终会发育成种子,所以胚珠的正常发育对于雌蕊相当重要。胚珠由三个部分发育形成:珠心区、合点区与珠柄形成区。前人研究表明,众多基因参与到胚珠发育调控过程中。转录因子在植物生长发育中起着至关重要的作用。转录因子可以通过与DNA结合,来调控下游基因的表达。在拟南芥体内,共有五类转录因子:WRKY、NAC（NAM、ATAF1,2 和 CUC2）、AP2/ERF（Apetala 2/ethylene response factor）、bZIP和锌指蛋白转录因子家族。而锌指结构蛋白转录因子作为植物体中相对较大的转录调节家族,广泛参与到植物发育的各个阶段中。在本研究中,我们分析了单锌指结构蛋白ZFP11的表达情况,发现ZFP11蛋白是一个核定位蛋白,且表达于植物雌蕊的胚珠中。突变体zfp11-1植物,表现出植物矮小,分支较多,胚珠发育异常等现象。同时T-DNA插入突变体zfp11-L2,也出现胚珠发育异常的现象。在zfp11-1突变体胚珠中,wuschel（WUS）基因表达量上调。过表达ZFP11蛋白出现主茎花序被抑制,侧枝花序的雌蕊发育异常等表型。我们研究发现,ZFP11蛋白能够结合到WUS基因的启动子区域,此外,ZFP11蛋白能够与WUS蛋白互作。另外,ZFP11蛋白还能够与一系列参与胚珠发育的相关蛋白因子互作,参与到胚珠发育的过程中。

关键词：拟南芥胚珠发育蛋白互作 wuschel

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SlWUS在番茄花柄脱落中的功能研究

SlWUS在番茄花柄脱落中的功能研究

作者：贺婧沈阳农业大学

学位级别：硕士

番茄（Solanum lycopersicum）是我国重要的设施蔬菜作物之一,在农业生产中由于多种因素的影响,会出现异常的落花和落果,直接影响作物的产量,损害种植者的经济收益,只有弄清楚影响番茄花器官脱落的机理,才能有效的防治落花落果。植物干... 详细信息

番茄（Solanum lycopersicum）是我国重要的设施蔬菜作物之一,在农业生产中由于多种因素的影响,会出现异常的落花和落果,直接影响作物的产量,损害种植者的经济收益,只有弄清楚影响番茄花器官脱落的机理,才能有效的防治落花落果。植物干细胞决定基因wuschel（WUS）在其整个生长和发育的过程中起到关键作用,相关报道中已显示番茄SlWUS基因在花柄离区中特异表达,但其作用不清楚。本研究通过研究SlWUS基因在番茄花柄脱落过程中的作用以及其影响的下游基因,初步明确SlWUS参与了番茄花柄脱落进程,试验结果如下:1.表达分析显示SlWUS基因只在离区表达,在远轴端和近轴端几乎不表达。2.去花诱导番茄花柄脱落后,SlWUS基因表达迅速下降,并在处理后4小时检测不到表达量。而利用生长素和1-MCP延缓脱落可以维持SlWUS的表达量。3.SlWUS过表达转基因植株延缓花柄脱落,通过瞬时沉默技术下调SlWUS表达加速花柄脱落,表明SlWUS是番茄花柄脱落的负调节因子。4.为了进一步探索SlWUS基因的下游基因,通过转录组分析,筛选出显著下调基因Solyc09g020190.2.1和显著上调基因Solyc04g072520.2为候选基因。通过VIGS,发现以上两个基因显著影响脱落发生,凝胶阻滞迁移实验（EMSA）结果表明SlWUS可以直接与候选基因的启动子结合,调控候选基因的表达。从而调控番茄花柄脱落。综合以上得出结论,SlWUS可以通过影响下游关键基因的表达调控番茄花柄脱落。

关键词：番茄脱落 wuschel 转录因子转基因