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急性髓系白血病患者骨髓中wt1基因的表达及其对预后的影响和意义

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急性髓系白血病患者骨髓中WT1基因的表达及其对预后的影响和意义

作者：郑玉婷安徽医科大学

学位级别：硕士

目的研究急性髓系白血病(AML)患者骨髓中wt1基因的表达并探讨wt1基因的表达水平对疗效及预后的影响和意义。方法1.采用实时荧光定量PCR法检测75例初诊AML患者(非APL)治疗各阶段骨髓wt1基因、内参因子(GADPH)及其他相关基因的拷贝数,染... 详细信息

目的研究急性髓系白血病(AML)患者骨髓中wt1基因的表达并探讨wt1基因的表达水平对疗效及预后的影响和意义。方法1.采用实时荧光定量PCR法检测75例初诊AML患者(非APL)治疗各阶段骨髓wt1基因、内参因子(GADPH)及其他相关基因的拷贝数,染色体的检测采用R显带法。以NQ比值=wt1基因拷贝数/内参基因拷贝数来计算wt1表达水平,分析wt1基因的表达水平与相关的临床参数及危险因素的关系。2.将所有患者据wt1基因表达水平的不同分为wt1高表达组及低表达组,比较两组患者诱导化疗后的完全缓解(CR)率、1年内复发率及死亡率、2年总生存率(OS)及无事件生存率(EFS)的差别,并分析治疗中wt1基因表达水平的变化与2年OS的关系。结果75例初诊AML患者wt1基因表达阳性率为98.7%;初诊时wt1基因表达水平的高低与年龄、性别、FAB分型及预后分组等情况无相关性(P>0.05)。wt1基因的表达水平与AML1/ETO融合基因阳性表达水平呈正相关(Pwt1高表达人数的比例明显高于低危组(Pwt1基因的中位表达水平两两比较均无统计学意义(P>0.05),但分别与缓解组比较时差异均显著(Pwt1中位表达水平比较,差异均有统计学意义(Pwt1高表达组患者的CR率为65.4%(17/26),低表达组为93.9%(46/49),两组比较统计学差异显著(P=0.004);两组患者1年内的死亡率高表达组高于低表达组(P1个月、3个月及6个月时患者wt1基因的表达水平较初诊时下降1个数量级以上的,其患者两年总生存率相对较高(P1.wt1基因在AML患者骨髓中表达阳性率很高,且在疾病进展及治疗不同时期呈动态变化,因此有助疾病的诊断及可用于AML患者微小残留病变(MRD)的监测。2.wt1基因高表达组CR率及生存率均低于低表达组,因此wt1基因可作为评估AML患者(非APL)疗效及预后的有效指标。3.治疗中wt1表达水平变化的监测有助于评价预后及指导治疗。

关键词：急性髓系白血病 wt1基因微小残留病灶疗效及预后

乳腺导管内增生性病变及乳腺癌中APC和wt1基因甲基化状态的研究

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乳腺导管内增生性病变及乳腺癌中APC和WT1基因甲基化状态的研究

作者：郝岩昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]本实验选取结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatous polyposis coli, APC)和Wilms肿瘤基因1(Wilms'tumor gene1, wt1)两种抑癌基因作为研究对象,通过检测乳腺癌发生不同阶段中APC基因和wt1基因启动子的甲基化状态及乳腺浸润性导管癌组... 详细信息

[目的]本实验选取结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatous polyposis coli, APC)和Wilms肿瘤基因1(Wilms'tumor gene1, wt1)两种抑癌基因作为研究对象,通过检测乳腺癌发生不同阶段中APC基因和wt1基因启动子的甲基化状态及乳腺浸润性导管癌组织mRNA表达水平,了解这两种目的基因的甲基化与乳腺癌发生发展的关系,分析目的基因启动子甲基化与其mRNA表达的关系,探讨APC基因异常甲基化与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系,为乳腺癌的早期诊断、预防和治疗提供理论依据。[方法]选取解放军昆明总医院病理科2010-2011年外科手术切除乳腺标本,根据2006年WHO乳腺肿瘤病理诊断标准对上述标本进行HE读片以核定诊断,其中包括46例浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma, IDC)、20例原位导管癌(ductal carcinoma in situ, DCIS)、13例非典型导管增生(atypical ductal hyperplasia,ADH)、27例普通型导管增生(usual ductal hyperplasia, UDH)和17例正常乳腺组织(normal breast tissue, NBT)。1、使用商品试剂盒提取所有新鲜或石蜡组织标本的基因组DNA,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测APC和wt1基因启动子甲基化状态,并使用Quantity One软件定量分析每例原发病变中APC和wt1基因的甲基化水平。2、根据患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移、ER、PR、HER-2等临床病例资料将46例乳腺浸润性导管癌样本进行分组,比较不同组别之间的甲基化状态。3、使用TA克隆的方法对MSP产物进行测序分析。4、应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测26例乳腺浸润性导管癌组织中APC和wt1基因的mRNA相对表达水平,并分析基因甲基化对mRNA表达的影响。[结果]1、在NBT、 UDH、 ADH、 DCIS及IDC中,APC基因的甲基化率分别为：0%(0/17)、0%(0/27)、69.23%(9/13)、90.00%(18/20)及80.43%(37/46),其中NBT与ADH、 NBT与DCIS、 NBT与IDC、 UDH与ADH、 UDH与DCIS、UDH与IDC之间APC甲基化率差别有统计学差异,P0.05。在ADH、 DCIS及IDC中,APC基因的甲基化水平分别为：0.070±0.147、0.298±0.496、0.557±0.306。ADH和DCIS两组的甲基化水平与IDC组的甲基化水平存在显著统计学差异,P0.05。2、APC基因甲基化与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移、ER、 PR、 HER-2等临床病理资料无关。3、 APC mRNA在乳腺浸润性导管癌组织中相对表达水平的中位数0.0587750,显著低于其在癌旁正常乳腺组织的相对表达水平,P基因甲基化与APC mRNA表达呈负相关(r=-0.469,Pwt1基因的甲基化率分别为：0%(0/17)、0%(0/27)、38.46%(5/13)、45.00%(9/20)及0%(0/46),其中NBT与ADH、 NBT与DCIS、 UDH与ADH、 UDH与DCIS、 IDC与ADH、 IDC与DCIS之间wt1甲基化率差别有统计学差异,P0.05。在ADH和DCIS中,wt1基因的甲基化水平分别为：0.076±0.674、0.242±0.285,两组之间无显著统计学差异,P>0.05。5、 wtl mRNA在乳腺浸润性导管癌组织中相对表达水平的中位数3.5621700,显著高于其在癌旁正常乳腺组织的相对表达水平,P基因在NBT和UDH、 ADH和DCIS、 IDC样本中的甲基化程度逐渐升高,提示APC基因启动子异常高甲基化在乳腺癌发生发展过程中起着重要作用。2、乳腺浸润性导管癌中APC基因甲基化与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移、ER、 PR、 HER-2等各项

关键词：乳腺癌 APC基因 wt1基因甲基化

从贮存骨髓涂片提取RNA检测骨髓增生异常综合征病人的wt1基因表达

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中国实验血液学杂志 2001年第2期9卷 132-134页

作者：王嵘波西雁郁志陈志松张洹郁知非广州暨南大学医学院血液病研究所广州510632 浙江省瑞安市人民医院

从贮存骨髓涂片提取RNA ,用巢式RT PCR检测 6 1例骨髓增生异常综合征 (MDS)病人的wt1基因表达 ,结果显示各类型MDS病人均高表达wt1基因。难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)和转变中的RAEB(RAEB t)的表达率高于难治性贫血 (RA)和环形铁粒... 详细信息

从贮存骨髓涂片提取RNA ,用巢式RT PCR检测 6 1例骨髓增生异常综合征 (MDS)病人的wt1基因表达 ,结果显示各类型MDS病人均高表达wt1基因。难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)和转变中的RAEB(RAEB t)的表达率高于难治性贫血 (RA)和环形铁粒幼细胞性难治性贫血 (RAS)。wt1基因的表达与MDS病人的疾病进展呈正相关关系。wt1基因表达的RT

关键词：骨髓 RNA wt1基因骨髓增生异常综合症基因表达

wt1基因在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

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现代肿瘤医学 2018年第7期26卷 1083-1088页

作者：傅煜符爽全铋陈芳胡延平刘璇王孝会张继红中国医科大学附属盛京医院血液研究室辽宁沈阳110022

目的:探讨wt1(Wilms tumor gene 1)基因在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表达及临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR方法检测77例初诊B-ALL患儿wt1基因的相对表达水平,比较患者年龄、性别、流式亚型、染色体核型、临床危险分级等... 详细信息

目的:探讨wt1(Wilms tumor gene 1)基因在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表达及临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR方法检测77例初诊B-ALL患儿wt1基因的相对表达水平,比较患者年龄、性别、流式亚型、染色体核型、临床危险分级等因素的基因表达差异,并随访分析初诊wt1基因表达水平对患儿预后的影响。结果:77例初诊B-ALL患者中,wt1基因阳性率96.10%(74/77),0~2岁患儿初诊wt1水平高于3~13岁组(P=0.02),wt1基因表达在性别上无统计学差异(P=0.229)。在对B-ALL流式亚型间wt1的分析中显示,Pro-B-ALL患者表达量最高,Pre-B-ALL次之,Com-B-ALL最低(两两比较差异,P值分别为0.002,0.008,0.040)。临床高危(P=0.041)、t(4;11)(P=0.034)、初诊白细胞大于50×109/L(P=0.009)的患者有更高的wt1表达。首次诱导化疗后细胞形态学缓解与否,其初诊时wt1表达无明显差异(P=0.84),但长期随访得到持续缓解的患者初诊wt1表达低于复发或不缓解的患者。结论:wt1基因在儿童B-ALL中表达的高低可能提示患者白血病细胞的分化水平,并与长期预后相关。

关键词： wt1基因儿童急性B淋巴细胞白血病基因表达

NB4细胞系诱导分化过程中wt1基因表达的变化

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中国实验血液学杂志 2001年第2期9卷 128-131页

作者：王玲陈子兴傅建新岑建农王玮苏州医学院附属第一医院

为了研究wt1基因的表达与NB4细胞诱导分化的关系 ,应用基因重组技术建立了竞争性RT PCR定量检测wt1基因表达的方法 ,并用间接免疫荧光标记法检测NB4细胞表面抗原CD11b的变化。结果发现 ,随着NB4细胞向粒系终末分化wt1基因表达迅速下降 ... 详细信息

为了研究wt1基因的表达与NB4细胞诱导分化的关系 ,应用基因重组技术建立了竞争性RT PCR定量检测wt1基因表达的方法 ,并用间接免疫荧光标记法检测NB4细胞表面抗原CD11b的变化。结果发现 ,随着NB4细胞向粒系终末分化wt1基因表达迅速下降 ,全反式维甲酸(ATRA)作用 0 ,12 ,2 4小时后每 μg总RNA中wt1基因的分子数分别为 4× 10 6,1.5 6× 10 6和0 .4× 10 6,与CD11b的变化情况相一致。结论提示 ,wt1基因高表达与NB4白血病细胞分化阻滞有关。

关键词： NB4细胞系 wt1基因诱导分化白血病竞争性逆转录-聚合酶链反应

荧光定量RT-PCR法检测wt1基因在急性白血病中的表达及临床意义

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荧光定量RT-PCR法检测WT1基因在急性白血病中的表达及临床意义

作者：王松梅青岛大学

学位级别：硕士

目的建立客观的定量检测wt1基因表达的方法，探讨wt1基因表达水平与急性白血病（AL）预后的关系及在微小残留病（MRD）检测中的意义。方法用荧光定量RT-PCR法（FQ-RT-PCR）测定40例不同类型及处于不同疾病阶段的AL病人wt1基因的表达... 详细信息

目的建立客观的定量检测wt1基因表达的方法，探讨wt1基因表达水平与急性白血病（AL）预后的关系及在微小残留病（MRD）检测中的意义。方法用荧光定量RT-PCR法（FQ-RT-PCR）测定40例不同类型及处于不同疾病阶段的AL病人wt1基因的表达。结果对照组wt1基因均为阴性。40例AL病人中26例wt1基因表达阳性，阳性组与阴性组CR率分别为34.6%和78.5%（P＜0.05）。其中初治组、复发组与CR＞3年组wt1基因表达阳性率分别为69.2%，100%，33.3%，三组病人wt1阳性基因拷贝数的平均值分别为4.14×103拷贝/ml，8.58×103拷贝/ml和7.87×101拷贝/ml。CR后wt1基因表达水平明显下降，复发后又显著升高。结论 FQ-RT-PCR实验方法客观准确，wt1基因的表达水平与AL患者的化疗效果及预后密切相关，可以作为检测MRD的标志。

关键词：荧光定量RT-PCR wt1基因急性白血病预后微小残留病。

RNAi沉默wt1基因逆转恶性黑素瘤细胞耐药性的研究

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RNAi沉默WT1基因逆转恶性黑素瘤细胞耐药性的研究

作者：翟瑞峰大连医科大学

学位级别：硕士

目的:恶性黑素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,其对常规化疗药物的耐药性严重影响其预后,因而逆转肿瘤细胞的耐药性,以提高化疗疗效,是治疗恶性黑素瘤的重要课题。目前认为恶性黑素瘤耐药的主要机制是凋亡抑制,越来越多研究证实特异性下调... 详细信息

目的:恶性黑素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,其对常规化疗药物的耐药性严重影响其预后,因而逆转肿瘤细胞的耐药性,以提高化疗疗效,是治疗恶性黑素瘤的重要课题。目前认为恶性黑素瘤耐药的主要机制是凋亡抑制,越来越多研究证实特异性下调某些凋亡抑制基因以促进肿瘤细胞凋亡,可以增加恶性黑素瘤对化疗药物的敏感性。wt1基因最早发现作为一种抑癌基因参与Wilm’s瘤的发生,近年来研究证实wt1基因在多种实体瘤细胞中高表达,具有抑制肿瘤细胞凋亡作用,发挥癌基因的作用。国外研究发现wt1基因在80%以上恶性黑素瘤中表达,而在良性色素痣和正常皮肤中未见表达,下调wt1基因可以抑制恶性黑素瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。但抑制wt1基因表达能否逆转恶性黑素瘤细胞的耐药性尚未见报道。RNA干扰技术是近年来发展起来的基因沉默新技术,能高效,特异地抑制目的基因的表达,因此很快成为研究基因功能的重要工具。本研究旨在探讨利用RNA干扰沉默wt1基因对人转移性恶性黑素瘤WM451细胞生长,凋亡及其对顺铂敏感性的影响,为恶性黑素瘤的基因治疗提供理论依据。方法:1.构建针对wt1基因的siRNA真核表达载体;2.利用脂质体将siRNA真核表达载体转入恶性黑素瘤WM451细胞中,并检测转染效率;3.利用RT-PCR、Western-Blot及免疫细胞化学染色方法检测WM451细胞中wt1基因mRNA及蛋白水平的表达,测定基因沉默效果;4.用MTT法测定WM451细胞生长曲线;5.电镜下观察细胞凋亡形态;6.用MTT法检测WM451细胞对化疗药物的敏感性。结果:1.成功构建靶向wt1基因的siRNA真核表达载体;2.RT-PCR检测显示wt1基因在恶性黑素瘤WM451细胞中高表达;3.利用脂质体为载体将siRNA真核表达载体转染WM451细胞,转染率为73%,转染后细胞中wt1mRNA表达水平下降67%,蛋白表达水平下降67%;4.RNA干扰沉默wt1基因可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡;5.电镜下可以看到凋亡细胞微绒毛减少,细胞核固缩,染色体边集;6.siRNA实验组细胞IC50从9.37ug/ml降至4.13ug/ml,逆转倍数2.29, siRNA实验组WM451细胞对顺铂的敏感性增加。结论:1.靶向wt1的序列特异性siRNA可显著抑制wt1基因的表达;2.下调WM451细胞wt1基因表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡;3.RNA干扰靶向沉默wt1可增加WM451细胞对顺铂的敏感性,RNA干扰技术为恶性黑素瘤的治疗提供了新途径。

关键词： wt1基因 RNAi 耐药性恶性黑素瘤

组蛋白去乙酰基酶及wt1基因对猪睾丸细胞和肾脏细胞凋亡及发育相关基因表达影响的研究

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组蛋白去乙酰基酶及WT1基因对猪睾丸细胞和肾脏细胞凋亡及发育相...

作者：褚美然吉林大学

学位级别：硕士

组蛋白乙酰化是最早发现的一种表观遗传修饰，乙酰化水平与基因的表达有着密切关联，乙酰化酶可以促进基因转录的激活，去乙酰化可以对组蛋白去乙酰基酶产生催化作用，这对基因沉默或者维持基因的抑制状态十分重要。哺乳动物的去乙酰基... 详细信息

组蛋白乙酰化是最早发现的一种表观遗传修饰，乙酰化水平与基因的表达有着密切关联，乙酰化酶可以促进基因转录的激活，去乙酰化可以对组蛋白去乙酰基酶产生催化作用，这对基因沉默或者维持基因的抑制状态十分重要。哺乳动物的去乙酰基酶按照同源性的酵母HDACs可分为三类。I类和II类HDACs对于抑制剂曲古抑菌素A（TSA）十分敏感。III类HDACs需要NAD+作为辅助因子。有报道称组蛋白乙酰化抑制剂曲古菌素A(TSA)、SAHA和丙戊酸盐等均能提高组蛋白乙酰化水平。而Scriptaid是一种新型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，可诱导组蛋白超乙酰化，最重要的是与TSA相比其对细胞的毒性较小，因此在细胞功能研究上得到广泛的应用。目前对于组蛋白去乙酰基酶的研究大部分集中在肿瘤中的作用，而对于组蛋白去乙酰基酶在泌尿、生殖系统中的功能研究依旧较少，特别是HDACs对于哺乳动物睾丸发育的影响至今尚未见报道。有研究发现在小鼠发育的肾脏中I类HDAC被抑制可引起肾脏发育阻滞，细胞发生凋亡。猪在解剖、生理和代谢等方面与人类十分接近，药物代谢、器官大小和功能也基本相似，常被用来研究异种动物器官移植试验等。本实验通过体外培养猪肾脏细胞（PorcineKidney Cells，PK）及猪睾丸细胞（Swine Testis Cells, ST），用不同浓度的Sriptaid处理这两种细胞，检测I类HDACs中的HDAC1和HDAC2基因的表达水平;观察其对泌尿生殖细胞的增殖、凋亡的影响，以及研究HDAC1和HDAC2基因表达的变化对肾脏、生殖系统的发育相关基因表达的影响。威尔姆氏瘤基因1（wilms’tumor1, wt1）是在对遗传性肾胚胎肿瘤的分子生物学研究中发现的，主要表达于人类的胚胎泌尿生殖系统中，而成熟的肾脏细胞中wt1基因的表达量较低。本实验室在早前的研究中发现，下调wt1基因对泌尿生殖细胞的凋亡及发育基因均有抑制作用，而本实验目前的研究发现，组蛋白去乙酰基酶抑制剂Scriptaid同样对肾脏及睾丸的凋亡有促进作用及对发育基因有抑制作用，因此我们推测组蛋白去乙酰基酶与wt1基因对猪睾丸细胞可能有协同作用，并通过实验对这一假设进行了验证。本实验主要结果如下： 1、Scriptaid处理猪睾丸细胞（ST）后，I类HDACs中的HDAC1和HDAC2基因的表达随着Scriptaid浓度的增多而呈下调趋势;且Scriptaid浓度的升高使ST细胞的形态发生改变，并通过MTT法验证了其对细胞增殖有抑制作用;使用流式细胞术检测细胞的凋亡情况，结果表明ST细胞会随着Scriptaid浓度的增加而发生凋亡，而且用荧光定量PCR方法检测ST细胞的凋亡相关基因的表达变化，发现可导致抗细胞凋亡基因Bcl-2表达下调，而促细胞凋亡基因Bax表达上调，说明了组蛋白去乙酰基酶维持凋亡基因表达的平衡作用，从而维持ST细胞的活性;2、在猪肾脏细胞（PK）中，不同浓度的Scriptaid处理，同样对HDAC1和HDAC2基因的表达有下调作用;通过BrdU细胞免疫荧光染色检测，发现处理组的细胞增殖受到明显的抑制，并且发育相关基因SF1、GDNF、SRY的表达受到抑制;凋亡相关基因的表达也受到了明显的影响，其中抗细胞凋亡基因Bcl-2的表达呈下调趋势，而促细胞凋亡基因Bax的表达则呈上调趋势;3、本实验通过荧光定量PCR方法检测了不同浓度Scriptaid处理ST细胞24h，wt1基因的表达水平降低，乙酰化的组蛋白H4的表达量却随之上升。说明组蛋白去乙酰基酶抑制剂能够提高ST细胞中组蛋白的乙酰化并抑制wt1基因的表达。wt1基因的下调会引起泌尿生殖系统发育相关的基因表达也显著下调，说明组蛋白去乙酰酶抑制剂可能通过抑制wt1基因的表达，下调ST细胞的发育相关基因的表达。

关键词：组蛋白去乙酰基酶猪睾丸细胞猪肾脏细胞 wt1基因细胞凋亡发育相关基因

中国南方汉族激素耐药型肾病综合征儿童wt1基因突变分析

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中国南方汉族激素耐药型肾病综合征儿童WT1基因突变分析

作者：杨勇辉福建医科大学

学位级别：硕士

第一部分激素耐药型肾病综合征单卵孪生姐妹wt1基因突变分析目的分析1个南方汉族激素耐药型肾病综合征（SRNS）家系wt1基因突变及其特点。方法研究对象为1个南方汉族SRNS家系先证者及其单卵孪生姐姐、父母和大姐，对照人群为50例尿... 详细信息

第一部分激素耐药型肾病综合征单卵孪生姐妹wt1基因突变分析目的分析1个南方汉族激素耐药型肾病综合征（SRNS）家系wt1基因突变及其特点。方法研究对象为1个南方汉族SRNS家系先证者及其单卵孪生姐姐、父母和大姐，对照人群为50例尿检正常的汉族成年人。取所有研究对象外周静脉血3mL，提取基因组DNA，PCR扩增wt1基因全部10个外显子及其周围的部分内含子序列，对PCR产物直接进行DNA序列测定。结果先证者临床表型为不完全型Denys-Drash综合征，其孪生姐姐临床表型为孤立性SRNS。在该对单卵孪生姐妹均检测出wt1基因1180C＞T（R394W）杂合突变，在先证者父母及其大姐和50例对照人群未检测出1180C＞T（R394W）杂合突变;此外，还在该对孪生姐妹检测出3个相同的wt1基因多态性—126C＞T、903A＞G和IVS7–32C＞A。结论本研究在1个汉族SRNS家系临床表型不同的单卵孪生姐妹患儿发现了相同的wt1基因R394W杂合突变。第二部分中国汉族散发性孤立性激素耐药型肾病综合征女性患儿wt1基因突变分析目的分析14例汉族散发性孤立性激素耐药型肾病综合征（ISRNS）女性患儿wt1基因突变及其特点。方法研究对象为14例汉族散发性ISRNS女性患儿（已除外NPHS2基因突变），对照人群为38例汉族散发性ISRNS男孩和50例尿检正常的汉族成年人。取所有研究对象外周静脉血3mL，提取基因组DNA，PCR扩增wt1基因外显子8和9及其周围的部分内含子序列，对PCR产物直接进行DNA序列测定。结果对14例汉族散发性ISRNS女性患儿进行wt1基因突变检测，结果在1例散发性ISRNS女孩患儿检测出wt1基因IVS9+5G＞A杂合变异，该变异在50例正常对照人群中未检测出。汉族散发性ISRNS女性患儿wt1基因突变检出率7.1%。结论中国汉族散发性ISRNS女性患儿存在wt1基因突变，提示对汉族散发性ISRNS女性患儿需进行wt1基因突变分析。第三部分1例汉族孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿wt1基因突变分析目的分析1例汉族孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿wt1基因突变及其特点。方法研究对象为1例汉族孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿，6.3岁发病，对照人群为110例尿检正常的汉族成年人。取所有研究对象外周静脉血3mL，提取基因组DNA，PCR扩增wt1基因全部10个外显子及其周围的部分内含子序列，对PCR产物直接进行DNA序列测定。结果在该患儿wt1基因外显子8检测出1051A＞G杂合变异，但在110例正常对照人群中未检测出1051A＞G变异，表明该变异为wt1基因突变。该突变导致wt1基因的编码蛋白wt1的第351位赖氨酸被谷氨酸取代，即K351E。经检索PUBMED文献数据库、单核苷酸多态性数据库和人类基因突变数据库已公布的wt1基因变异，证实1051A＞G（K351E）为新发现的wt1基因突变。结论在1例6.3岁孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿检测出wt1基因突变，提示对孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿需进行wt1基因突变分析。

关键词：激素耐药型肾病综合征单卵双胞胎 wt1 基因 Denys-Drash 综合征汉族人孤立性激素耐药型肾病综合征 wt1基因孤立性肾病综合征肾衰竭