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拟南芥wri1基因的克隆及其植物反义载体的构建

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江苏农业科学 2010年第3期38卷 68-69,79页

作者：吴晓梅吴雄熊陈明训丽水学院生物系浙江丽水323000 嘉兴职业技术学院浙江嘉兴314036

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了拟南芥wri1基因,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了该基因全序列。结果表明,该基因全长为1 287 bp。将拟南芥wri1基因反向克隆到植物表达载体pCambia1... 详细信息

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了拟南芥wri1基因,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了该基因全序列。结果表明,该基因全长为1 287 bp。将拟南芥wri1基因反向克隆到植物表达载体pCambia1300的35S启动子下游,构建了该基因的植物反义表达载体。

关键词：拟南芥 PCR wri1基因反义表达载体

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沙棘wri1转录因子基因的生物信息学分析

湖北农业科学 2016年第22期55卷 5972-5975,5981页

作者：马倩李景滨阮成江李荣荣大连民族大学环境与资源学院/资源植物研究所辽宁大连116600

以构建的沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.)不同组织转录组数据库为基础,分离得到1个沙棘wri1转录因子编码基因,命名为Hr wri1,利用生物信息学方法对其基因结构、理化性质、保守域、信号肽、亚细胞定位、磷酸化位点和高级结构等进行了... 详细信息

以构建的沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.)不同组织转录组数据库为基础,分离得到1个沙棘wri1转录因子编码基因,命名为Hr wri1,利用生物信息学方法对其基因结构、理化性质、保守域、信号肽、亚细胞定位、磷酸化位点和高级结构等进行了预测和较为全面的分析。结果表明,该成员含有1 206 bp的完整开放阅读框,编码401个氨基酸组成的不稳定亲水蛋白,无信号肽和跨膜结构域,存在多个磷酸化位点,定位于细胞核中,高级结构以无规则卷曲为主。与不同植物中已报道的同源wri1转录因子进行多重序列比对后,发现它们在核酸与氨基酸水平均高度同源,并且具有相同的结构域。

关键词：沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.) wri1基因生物信息学

续随子转录因子Elwri1的鉴定及功能分析

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植物科学学报 2023年第4期41卷 458-466页

作者：牛听风葛丽萍苏云婷王壮琳李润植山西农业大学林学院山西太谷030801 山西农业大学分子农业与生物能源研究所山西太谷030801

续随子(Euphorbia lathyris L.)种子可积累大量油脂且富含油酸,wriNKLED1(wri1)为AP2/EREBP类转录因子,参与调控脂肪酸的合成及种子发育等生命过程。本研究通过对续随子的全基因组鉴定,获得了11个续随子Elwri1转录因子基因,命名为Elwri1... 详细信息

续随子(Euphorbia lathyris L.)种子可积累大量油脂且富含油酸,wriNKLED1(wri1)为AP2/EREBP类转录因子,参与调控脂肪酸的合成及种子发育等生命过程。本研究通过对续随子的全基因组鉴定,获得了11个续随子Elwri1转录因子基因,命名为Elwri1-1~Elwri1-11。结果显示,它们均具有两个AP2结构域;其编码蛋白均属于不稳定亲水蛋白,无跨膜结构;亚细胞定位预测显示所有wri1蛋白均位于细胞核。表达分析结果表明,Elwri1-6与Elwri1-8在种子发育时期的表达量较高,且后者的表达模式与种子油脂积累模式一致。在本氏烟草(Nicotiana benthamiana L.)叶片中异源过表达Elwri1-8,叶片中总油脂含量增加,且油酸含量显著上升。研究结果表明Elwri1-8可能是调控续随子种子油脂和油酸生物合成的一个重要转录因子。

关键词：续随子转录因子 wri1基因油脂合成叶片瞬时表达

油菜基因Bnwri1的克隆及RNAi对种子含油量的影响

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中国农业科学 2009年第5期42卷 1512-1518页

作者：柴国华白泽涛蔡丽郭学兰张学江石磊董彩华刘胜毅中国农业科学院油料作物研究所/农业部油料作物遗传改良重点实验室

【目的】阐明油菜基因Bnwri1对其种子含油量的影响。【方法】采用RT-PCR技术从油菜中克隆到Bnwri1基因编码区内384bp的片段,将该片段正反向插入干扰载体pGΩ4ARi中,构建成RNAi表达载体pGΩ4ARi-wri1,通过花粉管通道法将其转入油菜受体... 详细信息

【目的】阐明油菜基因Bnwri1对其种子含油量的影响。【方法】采用RT-PCR技术从油菜中克隆到Bnwri1基因编码区内384bp的片段,将该片段正反向插入干扰载体pGΩ4ARi中,构建成RNAi表达载体pGΩ4ARi-wri1,通过花粉管通道法将其转入油菜受体品种中双9号中,【结果】获得3棵转基因植株,PCR扩增和基因组Southern杂交证实外源片段已整合在受体油菜基因组中。利用半定量RT-PCR和改进的索氏提取法分别检测转基因T1代植株的Bnwri1基因表达量和种子含油量,结果表明:与非转基因对照相比,转基因植株的Bnwri1基因均受抑制,种子含油量有所降低。【结论】采用RNAi技术可使油菜内源基因Bnwri1沉默,表明油菜基因Bnwri1能有效调控种子含油量。

关键词：油菜含油量 wri1基因花粉管通道法 RNAi

棉花中一个新型转录因子Ghwri1的表达特征与功能分析

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生物技术通报 2013年第6期29卷 80-86页

作者：李鑫王正明薛伟初明光清华大学分子生物学实验室北京100084

AP2(APETALA2)/EREBP(ethylene-responsive element binding protein)是一类特异性存在于植物中的转录因子,在植物中的许多代谢过程都起着十分重要的作用。从棉花中分离并获得了一个新的AP2基因Ghwri1,该基因长1 314 bp,所编码的蛋白含... 详细信息

AP2(APETALA2)/EREBP(ethylene-responsive element binding protein)是一类特异性存在于植物中的转录因子,在植物中的许多代谢过程都起着十分重要的作用。从棉花中分离并获得了一个新的AP2基因Ghwri1,该基因长1 314 bp,所编码的蛋白含有437个氨基酸,分子量约为48 kD,pI为5.77。序列分析结果显示,Ghwri1蛋白含有2个AP2结构域,该蛋白属于AP2家族;与GFP蛋白的融合表达试验结果显示,在洋葱表皮细胞中,Ghwri1是特异性在细胞核中表达的。Real-time RT-PCR数据显示Ghwri1主要在真叶、根、纤维以及种子中表达,而且其在纤维和种子中的表达量是随着发育时间的推移而不断升高的。同时构建了Ghwri1与LUC共表达的载体,通过检测LUC的活性来反映Ghwri1的表达量,试验数据显示,当Ghwri1与LUC共表达后,LUC的活性提高了约20倍。试验结果都显示Ghwri1是一个很强的转录激活子。

关键词： wri1基因转录因子 AP2结构域转录激活试验棉花

甘蓝型油菜油脂形成转录因子wri1的克隆与分析

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甘蓝型油菜油脂形成转录因子WRI1的克隆与分析

作者：彭烨湖南农业大学

学位级别：硕士

油菜是世界性主要油料作物,也是我国主要食用油的来源和能源油脂的潜在原料。现植物油脂合成途径已初步阐明,其中相关的关键基因的克隆、鉴定及转基因育种的研究已开展甚多,目前转录因子因存在多样靶基因成为研究热点,其中wri1主要在油... 详细信息

油菜是世界性主要油料作物,也是我国主要食用油的来源和能源油脂的潜在原料。现植物油脂合成途径已初步阐明,其中相关的关键基因的克隆、鉴定及转基因育种的研究已开展甚多,目前转录因子因存在多样靶基因成为研究热点,其中wri1主要在油脂合成中对甘油三酯(TAG)积累、种子的碳代谢等方面产生重要作用,高油脂积累与高油酸油菜育种并不冲突,但有关wri1基因表达调控同油菜油酸含量高低是否存在联系鲜少研究,本文通过核甘蓝型油菜(胞质为野油)湘油15中较高油酸含量小区群体进行研究,试图说明wri1在油酸含量方面的积极作用,主要结果如下:1.通过RT-PCR方法克隆到3个与NCBI中甘蓝型油菜Bnawri1基因同源的基因序列,分别命名为Bnawri1-1A(登录号NM01315608.1,CDS大小1242bp),Bnawri1-N3(登录号XM13848500.1,CDS大小1230bp),Bnawri1-N7(登录号HM370542,CDS大小1248bp),以核甘蓝型油菜开花后35天角果的cDNA为模板,获得了三种拷贝的7种基因,其中6类突变基因型,分别命名为Bnawri1-1、Bnawri1-2、Bnawri1-3、Bnawri1-4、Bnawri1-5、Bnawri1-6;1类完全同源的基因型,命名为Bnawri1-7。通过MEGA5.1软件构建系统进化树发现wri1基因编码蛋白在不同的物种间的保守性较高,在某些植物中,如拟南芥,存在多拷贝且基因多态性的现象。2.选取4种存在明显突变基因类型的cDNA序列Bnawri1-2、Bnawri1-3、Bnawri1-4、Bnawri1-6构建植物表达载体,利用农杆菌介导法转野生型拟南芥,获得转基因拟南芥T1代植株。3.取4个明显突变基因型cDNA序列Bnawri1-1、Bnawri1-4、Bnawri1-5、构建酵母真核表达载体,并在酿酒酵母INVSC 1中表达,对克隆的碱基变异的wri1基因进行蛋白活性分析。4个基因在酵母表达中不存在明显的蛋白水平差异。4.通过RT-qPCR研究甘蓝型油菜wri1基因与上游关键基因LEC1、LEC2,油脂合成中的关键基因PDAT-A02、DGAT1、GPAT6在种子发育过程中的时间表达变化,分别取DAF 15、DAF 20、DAF 25、DAF 30、DAF35、DAF 40、DAF 45角果,发现LEC2基因表达量的峰值比LEC1基因出现早,LEC1、LEC2同wri1基因表达变化的模式基本相同,PDAT-A02在角果发育前期有较高的基因表达,DGAT1、GPAT6较高水平的基因表达发生在角果发育后期。

关键词：甘蓝型油菜 wri1基因酵母表达荧光定量