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wnt通路中亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5/6在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

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中国医学科学院学报 2021年第4期43卷 595-602页

作者：李宣王文鹏周敏徐晓蕊高吉照徐州医科大学附属医院儿科江苏徐州221002

目的研究富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体(LGR)5/6在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及意义。方法选取39例经诱导化疗后第33天骨髓达完全缓解的ALL患儿,诱导化疗前作为初发组,经诱导化疗第33天骨髓达完全缓解时作为缓解组,根据危... 详细信息

目的研究富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体(LGR)5/6在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及意义。方法选取39例经诱导化疗后第33天骨髓达完全缓解的ALL患儿,诱导化疗前作为初发组,经诱导化疗第33天骨髓达完全缓解时作为缓解组,根据危险度分层再分为低危(n=16)、中危(n=9)和高危组(n=14)。30例免疫性血小板减少症的患儿为对照组。留取初发组、缓解组及对照组骨髓血3 ml,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测骨髓细胞中LGR5和LGR6 mRNA的相对表达,采用Western blot法检测骨髓细胞中LGR5和LGR6蛋白的相对表达。结果初发组LGR5 mRNA(0.850±0.279)及蛋白(0.083±0.027)的相对表达均低于缓解组(mRNA:1.418±0.324,蛋白:0.130±0.033)与对照组(mRNA:1.541±0.409,蛋白:0.138±0.041)(P_(mRNA)=0.000,P_(蛋白)=0.000),初发组LGR6 mRNA(2.444±1.160)及蛋白(0.298±0.088)的相对表达均高于缓解组(mRNA:0.886±0.390,蛋白:0.111±0.039)与对照组(mRNA:0.928±0.373,蛋白:0.094±0.037)(P_(mRNA)=0.000,P_(蛋白)=0.000)。在初发组中,低危患儿LGR5 mRNA(1.004±0.284)及蛋白(0.097±0.030)的相对表达均高于中危(mRNA:0.728±0.239,蛋白:0.071±0.022)和高危患儿(mRNA:0.752±0.222,蛋白:0.074±0.020)(P_(mRNA)=0.012,P_(蛋白)=0.016),低危患儿LGR6 mRNA(1.822±0.979)及蛋白(0.245±0.077)的相对表达均低于中危(mRNA:2.954±1.039,蛋白:0.338±0.081)和高危患儿(mRNA:2.827±1.165,蛋白:0.333±0.075)(P_(mRNA)=0.016,P_(蛋白)=0.004)。在缓解组中,低危患儿LGR5 mRNA(1.597±0.329)及蛋白(0.150±0.035)的相对表达均高于中危(mRNA:1.277±0.288,蛋白:0.117±0.029)和高危患儿(mRNA:1.305±0.253,蛋白:0.116±0.023)(P_(mRNA)=0.012,P_(蛋白)=0.006),低危患儿LGR6 mRNA(0.662±0.334)及蛋白(0.089±0.034)的相对表达均低于中危(mRNA:1.066±0.273,蛋白:0.130±0.033)和高危患儿(mRNA:1.027±0.405,蛋白:0.126±0.038)(P_(mRNA)=0.007,P_(蛋白)=0.007)。结论LGR5和LGR6的表达与儿童ALL的发生和危险度有关,其具体作用机制有待进一步研究。

关键词：急性淋巴细胞白血病 wnt通路亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体

杨梅黄酮通过wnt通路改善细胞因子诱导的胰岛β细胞功能障碍的实验研究(英文)

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生物化学与生物物理进展 2013年第1期40卷 50-56页

作者：丁叶戴小倩张召锋李勇北京大学医学部公共卫生学院营养与食品卫生学系北京100191

本文探讨杨梅黄酮对细胞因子诱导的胰岛β细胞功能障碍的影响及wnt通路在其中的作用.MTT法检测细胞的存活率;放射免疫法检测RIN-m5fβ细胞在基础状态和高糖状态下胰岛素的分泌水平;Western blot法检测wnt通路相关蛋白的表达情况.肿瘤坏... 详细信息

本文探讨杨梅黄酮对细胞因子诱导的胰岛β细胞功能障碍的影响及wnt通路在其中的作用.MTT法检测细胞的存活率;放射免疫法检测RIN-m5fβ细胞在基础状态和高糖状态下胰岛素的分泌水平;Western blot法检测wnt通路相关蛋白的表达情况.肿瘤坏死因子α、白介素1β和γ干扰素联合作用细胞48 h后,与空白对照组相比,细胞的存活率显著下降;基础状态下胰岛素的分泌量增加至空白对照组的2.45倍,而高糖刺激状态下胰岛素的分泌量减少至空白对照组的39.6%.Western blot结果显示,细胞因子处理后使wnt通路相关蛋白的表达量下降.而杨梅黄酮作用后,与细胞因子组相比,可使细胞存活率上升.另外,20μmol/L杨梅黄酮可逆转细胞因子对胰岛素分泌的影响,使基础状态下胰岛素的分泌减少,高糖刺激状态下胰岛素分泌量显著增加.Western blot结果显示,杨梅黄酮提高了wnt通路相关蛋白的表达水平.上述结果表明,细胞因子联合作用48 h能诱导RIN-m5f细胞功能障碍,杨梅黄酮干预后能减少这种细胞损伤,保护机制可能与其激活wnt通路有关.

关键词：杨梅黄酮细胞因子 wnt通路胰岛β细胞

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wnt通路关键信号分子与肝癌靶向治疗

中华肝脏病杂志 2018年第5期26卷 397-400页

作者：郑文杰姚登福南通大学附属医院临床医学研究中心 226001

肝细胞性肝癌（HCC）是常见的消化系统肿瘤，其发生和发展是多因素、多步骤共同作用的结果。近年来多项研究结果表明wnt通路在HCC进展中发挥重要作用，与肝细胞恶性转化、HCC转移与耐药、肝癌干细胞相关。该文分析了wnt通路关键信号分子... 详细信息

肝细胞性肝癌（HCC）是常见的消化系统肿瘤，其发生和发展是多因素、多步骤共同作用的结果。近年来多项研究结果表明wnt通路在HCC进展中发挥重要作用，与肝细胞恶性转化、HCC转移与耐药、肝癌干细胞相关。该文分析了wnt通路关键信号分子在HCC中的表达情况及其在诊断、预后和靶向治疗中的价值，并概述了wnt通路靶向药物治疗HCC的研究进展，以期为HCC靶向治疗研究提供参考。

关键词：癌,肝细胞诊断预后 wnt通路靶向治疗

wnt通路中部分基因在绒山羊胚胎皮肤毛囊中的表达

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第1期32卷 99-105页

作者：王乐乐张燕军杨坤韩文静郑亚光李晓燕王宏浩赵濛苏蕊王瑞军李金泉内蒙古农业大学动物科学学院呼和浩特010018 内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室呼和浩特010018

已知绒山羊毛囊的发育受wnt等信号通路控制,但wnt通路相关基因在绒山羊胚胎毛囊启动和生长发育过程中的表达及作用机制尚不清楚。本文采用RNA-Seq技术对45 d,55 d和65 d的绒山羊胚胎体侧皮肤进行了转录组测序,鉴定wnt通路相关基因的表达... 详细信息

已知绒山羊毛囊的发育受wnt等信号通路控制,但wnt通路相关基因在绒山羊胚胎毛囊启动和生长发育过程中的表达及作用机制尚不清楚。本文采用RNA-Seq技术对45 d,55 d和65 d的绒山羊胚胎体侧皮肤进行了转录组测序,鉴定wnt通路相关基因的表达。RNA-Seq技术结合blast搜索,将转录组有效测序数据与云南黑山羊参考基因组序列(http://***/GGD/***)比对,获得了已知的wnt通路(pathway hsa04310)中的123个相关基因(86.0%)。进而采用实时荧光定量PCR技术检测,验证了差异表达的Sfrp4、wnt3、wnt10a(上调)和Apc2(下调)基因在绒山羊胚胎不同时期皮肤中的表达量,初步探索了绒山羊毛囊在胚胎期启动、发育过程中,wnt通路部分基因的表达模式,为进一步研究wnt通路部分基因在绒山羊胚胎毛囊启动、发育过程中的作用机制提供了有意义的线索。

关键词： wnt通路 RNA-seq 毛囊绒山羊胚胎

wnt通路抑制因子Dickkopf-1的表达作用

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中国医院药学杂志 2007年第5期27卷 629-632页

作者：腊蕾班武饶进军吴曙光南方医科大学南方医院药学部广东广州510515 广州军区广州总医院广东广州510010 南方医科大学药学院广东广州510515

目的:研究wnt通路抑制因子Dickkopf-1(DKK-1)的表达作用。方法:将携带p53基因的复制缺陷型腺病毒载体(Adp53)导入到p53完全缺失的人肝癌细胞株Hep3B中,并以wnt通路的关键因子β-链接蛋白(-βcatenin)的改变为功能指标评价wnt通路的变化... 详细信息

目的:研究wnt通路抑制因子Dickkopf-1(DKK-1)的表达作用。方法:将携带p53基因的复制缺陷型腺病毒载体(Adp53)导入到p53完全缺失的人肝癌细胞株Hep3B中,并以wnt通路的关键因子β-链接蛋白(-βcatenin)的改变为功能指标评价wnt通路的变化。以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测wnt通路抑制因子DKK-1表达的调节作用,以流式细胞术检测Adp53的转基因情况和-βcatenin的表达。结果:DKK-1mRNA水平在转染Adp53 20h后即有明显升高32h达最高水平,随后逐渐降低。量效关系研究表明在转染Adp53剂量为0.5,5,50pfu/cell时DKK1mRNA表达均有显著增高,尤以50pfu/cell时表达水平最高。-βcatenin表达水平随着转染时间和转染剂量的增加,阳性细胞百分比强度和平均荧光量强度表达水平逐渐下降。结论:外源性p53能够诱导wnt通路抑制剂DKK-1的表达,进而产生抑制wnt通路的作用。

关键词： Adp53 Dickkopf-1 wnt通路 β-链接蛋白

wnt通路中相关基因表达在肾母细胞瘤发生中的作用

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中华小儿外科杂志 2008年第3期29卷 129-132页

作者：李凯高解春吕志葆董岿然王莹复旦大学附属儿科医院外科上海200032

目的研究β-catenin、wnt-4和sFRP-1基因在肾母细胞瘤、瘤旁肾组织、胚胎肾和正常肾组织中的表达。方法实验对象分组，肾母细胞瘤组20例，瘤旁肾组织20例，胚胎肾组10例，正常肾组织8例。采用实时定量PCR的方法，分别检测上述各组标本中... 详细信息

目的研究β-catenin、wnt-4和sFRP-1基因在肾母细胞瘤、瘤旁肾组织、胚胎肾和正常肾组织中的表达。方法实验对象分组，肾母细胞瘤组20例，瘤旁肾组织20例，胚胎肾组10例，正常肾组织8例。采用实时定量PCR的方法，分别检测上述各组标本中β-catenin、wnt-4和sFRP-1基因的表达。结果肾母细胞瘤组织、瘤旁肾组织和胚胎肾组织中β-catenin的表达量分别为4．6800±0．3086、4．5020±0．2385和4．4960±0．3846，三组间差别无统计学意义。但均高于正常肾组织中pcatenin的表达量2．9220±0．3013，差别具有统计学意义。肾母细胞瘤组织wnt-4的表达量3．7150±0．060明显高于瘤旁肾组织和胚胎肾组织中wnt-4的表达（分别为3．1260±0．090和3．1250±0．073），前三者又均明显高于正常肾组织中wnt-4的表达量2．6680±0．080。肾母细胞瘤组织和瘤旁肾组织中sFRP-1的表达量分别为4．6465±0．2890和4．8020±0．2943，两组间差别无统计学意义。胚胎肾组织和正常肾组织中sFRP-1的表达量分别为2．7980±0．2003和2．9420±0．3867，两组间差别无统计学意义。但是肾母细胞瘤和瘤旁肾组织中sFRP-1的表达均明显高于胚胎肾组织和正常肾组织，差别具有高度的统计学意义。结论wnt信号通路中相关分子的表达异常可能是肾母细胞瘤发生的重要原因之一。

关键词：肾母细胞瘤 wnt通路基因表达发病机理

益气活血方基于miR-124调控wnt通路促进神经再生

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南方医科大学学报 2017年第8期37卷 1047-1053页

作者：谭辉王键尹婷婷何玲邓勇李凤王玉凤安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038

目的探讨益气活血方(脑络欣通)对MCAO-R气虚血瘀证大鼠神经再生的影响及可能的作用机制。方法随机数字表法将大鼠分成4组:正常组、模型组、脑络欣通组、通心络组,其中脑络欣通组和通心络组分别用脑络欣通溶液、通心络溶液灌胃。观察各... 详细信息

目的探讨益气活血方(脑络欣通)对MCAO-R气虚血瘀证大鼠神经再生的影响及可能的作用机制。方法随机数字表法将大鼠分成4组:正常组、模型组、脑络欣通组、通心络组,其中脑络欣通组和通心络组分别用脑络欣通溶液、通心络溶液灌胃。观察各组大鼠生命状态并进行神经功能缺损、气虚证和血瘀证评分,运用激光多普勒仪动态监测局部脑血流量(r CBF),TTC染色检测脑梗死体积,免疫组化结合免疫荧光染色检测脑组织Nestin和Brd U表达,荧光定量PCR检测mi RNA-124水平,Western blotting检测wnt3a、GSK3β和β-catenin蛋白表达水平。结果脑络欣通和通心络都能改善模型大鼠神经功能,降低气虚证和血瘀证评分,减少脑梗死体积,r CBF提高(Pwnt3a应激性的高表达,同时提高β-catenin的表达水平(P0.05)。结论脑络欣通可能通过影响脑组织mi RNA-124的表达而激活wnt通路,从而发挥对气虚血瘀型脑缺血的神经保护以及神经再生的作用。

关键词：气虚血瘀证脑缺血脑络欣通神经再生 miRNA-124 wnt通路

lncRNA LINC02859介导wnt通路在甲基硝基亚硝基胍诱发胃癌中的机制研究

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环境与职业医学 2024年第10期41卷 1136-1143页

作者：张雪玲曾勇王婷王建丁肖登王俊玲李成云兰州大学公共卫生学院卫生毒理学研究所甘肃兰州730000 兰州大学第二医院院感科甘肃兰州730030

[背景]胃癌发生是多因素共同作用的复杂过程,长链非编码RNA(lncRNA)在胃癌进程中可作为致癌或抑癌基因发挥重要作用。研究发现,lncRNA LINC02859在胃癌组织中表达下调且与肿瘤的分化程度及病理分期相关,同时在环境致癌物甲基硝基亚硝基... 详细信息

[背景]胃癌发生是多因素共同作用的复杂过程,长链非编码RNA(lncRNA)在胃癌进程中可作为致癌或抑癌基因发挥重要作用。研究发现,lncRNA LINC02859在胃癌组织中表达下调且与肿瘤的分化程度及病理分期相关,同时在环境致癌物甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱发细胞恶性转化的发生发展中发挥重要作用,但其作用机制尚不明确。[目的]探索胃癌相关lncRNA LINC02859基因在MNNG诱导人正常胃黏膜细胞(GES-1)恶性转化中的作用和潜在机制。[方法]选取甘肃省胃癌高发区110例胃癌患者作为生物标本来源,由医院专业病理医师采集患者癌组织及距肿瘤边缘5 cm以上癌旁正常胃黏膜组织,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测癌及癌旁组织中LINC02859的表达水平。通过高通量测序及生物信息学分析发现与LINC02859共表达关系的基因潜在调控的信号通路。取细胞代数较低且形态正常的GES-1,待细胞融合达到70%~80%时,分别加入0、0.25和0.5μmol·L^(–1)的MNNG染毒液培养48 h后检测LINC02859基因表达水平,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测细胞增殖活性,平板细胞克隆形成试验检测细胞克隆形成,划痕实验检测细胞迁移能力,评估MNNG染毒对细胞形态及功能的影响;采用RT-qPCR及免疫印记实验(Western blotting)检测wnt信号通路关键蛋白的表达水平。[结果]RT-qPCR结果显示,与癌旁组织比较,LINC02859在胃癌组织中呈低表达,差异有统计学意义(Pwnt通路。体外恶性转化实验提示,MNNG暴露后,恶性转化第五代细胞(MC-5)与对照组细胞相比,其形态发生改变、集落形成数量增加、增殖和迁移能力高于GES-1细胞;与正常GES-1细胞比较,0.25和0.5μmol·L^(–1)MNNG暴露的GES-1细胞,LINC02859基因表达量均降低,0.5μmol·L^(–1)MNNG暴露后,wnt通路关键蛋白转录因子7(TCF7)、Axis抑制剂(Axin1)、磷酸化糖原合成酶激酶-3-Beta(p-GSK-3β)、酪蛋白激酶-1(CK1)和β-连环蛋白(β-catenin)表达水升高,差异有统计学意义􀀁(Pwnt通路的激活作用。[结论]LINC02859基因在胃癌患者癌组织中呈低表达。MNNG暴露可引起GES-1细胞形态及功能改变,LINC02859基因表达异常下调,同时激活wnt信号通路;过表达LINC02859可抑制MNNG暴露诱导胃癌进程中的wnt信号通路激活。

关键词：胃癌 lncRNA LINC02859 甲基硝基亚硝基胍恶性转化 wnt通路

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wnt通路在卵巢癌发生发展中的作用研究

Wnt通路在卵巢癌发生发展中的作用研究

作者：裴越吉林大学

学位级别：硕士

上皮性卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤首位,早期临床症状隐匿,发现时多为中晚期,预后较差,晚期病例5年生存率不足30%。卵巢癌的一线治疗为肿瘤细胞减灭术和以铂类为基础的联合化疗。但对于晚期患者,这些治疗手段效果都不是十分理想,卵巢癌... 详细信息

上皮性卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤首位,早期临床症状隐匿,发现时多为中晚期,预后较差,晚期病例5年生存率不足30%。卵巢癌的一线治疗为肿瘤细胞减灭术和以铂类为基础的联合化疗。但对于晚期患者,这些治疗手段效果都不是十分理想,卵巢癌肿瘤复发、淋巴结转移是影响预后的主要因素。近年来关于卵巢癌的研究着重于靶向治疗和发病机制两个方面。随着wnt通路逐渐被人们所熟悉,已经有研究证明,其异常传导会导致靶基因转录异常,与癌症的发生密切相关。在不同的肿瘤组织中wnt通路蛋白高表达,且其高表达与肿瘤的生长浸润、淋巴结受累、临床分期以及不良预后均有密切联系。wnt1蛋白是该通路的蛋白之一,启动并调控经典的wnt/β-catenin通路和PCP通路,DKK1蛋白是wnt通路抑制因子,本文运用免疫组化方法,检测wnt1、DKK1两种蛋白在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中表达情况。旨在探讨wnt通路在卵巢癌中发生发展的作用,为今后卵巢癌诊断、治疗及预后分析提供新思路。目的阐明wnt1、DKK1两种蛋白在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中的表达情况,并探讨这两者分别与患者的年龄、病理类型、淋巴结受累和临床分期的关系。方法1.应用免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHC）检测41例上皮性卵巢癌,22例正常卵巢组织,10例卵巢交界性肿瘤,7例卵巢浆液性或粘液性肿瘤中wnt1、DKK1两种蛋白表达情况。2.统计学处理:所有数据采用SPSS22.0进行统计分析,计数资料采用x2检验,以P＜0.05表示差异具有统计学意义。结果1.各组中wnt1蛋白表达情况在上皮性卵巢癌组中wnt1蛋白表达呈现强阳性反应（3+）,细胞浆和细胞核均见棕褐色颗粒,不仅肿瘤细胞表达,细胞外间质也可见微弱阳性表达,蛋白表达阳性率为63.4%（26/41）;在交界性卵巢肿瘤组中可见局部细胞核和细胞浆呈现阳性（+）表达,蛋白表达阳性率为10.0%（1/10）;在良性卵巢肿瘤组中不表达（-）,细胞外间质可见微弱阳性表达,蛋白表达阳性率为0（0/7）;在对照组中可见梭形细胞及细胞外间质呈现弱阳性到阳性表达,蛋白表达阳性率为54.5%（12/22）。在四组中,上皮性卵巢癌组中wnt1蛋白表达情况高于其他三组,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.上皮性卵巢癌组中wnt1蛋白表达与临床病理特征之间的关系wnt1蛋白表达在有淋巴结转移者中的阳性率90.9%（10/11）,明显高于无淋巴结转移者47.8%（11/23）,差异有统计学意义（P＜0.05）。分期越晚,wnt1蛋白表达阳性率越高,III+IV期阳性率为78.3%（18/23）明显高于I+II期44.4%（8/18）,差异有统计学意义（P＜0.05）。在≥50岁和＜50岁的两组中,wnt1蛋白表达的阳性率无统计学差异（P＞0.05）。研究结果提示,wnt1蛋白表达与淋巴结转移、病理学分期有关,而与年龄无关。3.各组中DKK1蛋白表达情况在免疫组化反应中,DKK1蛋白在各组中表达程度不一、阳性表达位置也不一致。在上皮性卵巢癌组中,DKK1蛋白在细胞浆和细胞核中呈现强阳性表达,少数肿瘤呈现出肿瘤组织不表达,而细胞外间质出现阳性表达的特点。细胞浆和细胞核中蛋白表达阳性率为46.3%（19/41）。在交界性卵巢肿瘤组中,细胞浆表达阳性,表达阳性率为30%（3/10）。在良性卵巢肿瘤组中,细胞浆中呈现阳性表达,表达阳性率为42.9%（3/7）。在对照组中,可见在梭形细胞和卵泡周围呈现弱阳性到阳性表达,表达阳性率为45.5%（10/22）。虽然DKK1蛋白在上皮性卵巢癌组中表达阳性率比其他分组高,但是无统计学差异（P＞0.05）。4.上皮性卵巢癌组中DKK1蛋白表达与临床病理特征之间的关系在上皮性卵巢癌组中,无淋巴结转移者中蛋白表达阳性率高于有淋巴结转移者,但两者之间无统计学差异（P＞0.05）。临床分期I+II期阳性率高于III+IV期,但两者之间无统计学差异（P＞0.05）。DKK1蛋白表达与年龄、淋巴结转移、临床分期无关（P＞0.05）。5.在上皮性卵巢癌组中,部分样本细胞外间质表达:有12例样本wnt1蛋白、有16例样本DKK1蛋白同时或仅在细胞外间质表达。结论***1蛋白在上皮性卵巢癌组织中表达阳性率高于交界性卵巢肿瘤、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织。***1蛋白表达与上皮性卵巢癌淋巴结转移和肿瘤分期有关。***1在上皮性卵巢癌和正常卵巢组织中表达阳性率无差异。***1蛋白和DKK1蛋白在细胞外间质中表达,未来需进一步研究。

关键词： wnt通路卵巢癌 wnt1蛋白 DKK1蛋白