检索结果-南通市图书馆

作者：沙琰琰郑州大学

学位级别：硕士

近年来,植物基因工程技术飞速发展,转基因植物在很多领域的研究推广取得了令人瞩目的成绩。植物基因工程中常用的转化方法一般是通过土壤农杆菌系统、植物病毒系统和DNA直接导入法这三种方法进行。土壤农杆菌转化系统包括Ti质粒转化系统... 详细信息

近年来,植物基因工程技术飞速发展,转基因植物在很多领域的研究推广取得了令人瞩目的成绩。植物基因工程中常用的转化方法一般是通过土壤农杆菌系统、植物病毒系统和DNA直接导入法这三种方法进行。土壤农杆菌转化系统包括Ti质粒转化系统和Ri质粒转化系统。Ti质粒转化系统又包括共和载体系统和双元载体系统。根癌农杆菌转化方式有多种,如活体接种法、共培养转化法、叶盘转化法等。植物病毒载体系统一般包括单链RNA植物病毒载体系统、单链DNA植物病毒载体系统和双链DNA植物病毒载体系统。DNA直接导入法通常分为化学物质诱导法、电穿孔法、脂质法、微注射法、基因枪法和花粉管通道法等。转基因技术快速发展的同时转基因植物检测技术也在不断地进步和完善,目前被广泛应用的转基因植物检测方法有三类：整合水平上的检测、转录水平上的检测和表达水平上的检测。整合水平上的检测通常有PCR检测、Southern blot检测和染色体原位杂交检测等;转录水平上的检测通常包括RT-PCR检测、Northrn blot杂交检测等;还有表达水平上的检测通常包括组织化学染色检测、Western blot检测、荧光蛋白检测、ELISA检测、叶片涂抹除草剂检测和叶片退绿检测等。 2004年Broun等第一次克隆出win1基因与蜡质代谢过程中蜡质基因表达密切相关,本实验通过转基因技术将win1基因导入烟草K326,改变其角质膜厚度和成分,以此来提高烟草K326抗旱、抗病和抗寒等性能。该项研究结果不仅对认识和揭示植物角质膜的结构功能有重要的理论意义,而且对植物基因工程技术改良和培育抗逆性强的优良植物品种以及农业生产都具有重要的应用价值。本实验从野生型拟南芥花蕾中提取总RNA扩增成win1基因,以载体PBI121为中间载体构建出植物表达载体PBI121-SHN1/win1,最后将本实验室构建成功的植物表达载体PBI121-SHN1,win1作为转基因载体,运用根癌农杆菌转化法中的叶盘法将目的基因win1转入烟草k326中,在转化的不同阶段筛选出四种最佳培养基对转化后外植体进行培养：（1）烟草叶盘共培养培养基T1：MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA;（2）烟草滤菌培养基T2:MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+500mg/L Carb;（3）烟草筛选培养基T3：MS+100mg/L Kan;（4）烟草继代培养基T4:MS+80mg/L Kan+300mg/L Carb。本实验通过根癌农杆菌介导法将win1基因导入烟草K326中,改变了烟草k326染色体基因组序列,然后通过PCR、RT-PCR检测方法对转基因烟草k326一代进行检测,最终得出win1基因已成功导入烟草K326,获得了转基因烟草K326一代品种。

关键词：外植体转基因烟草培养基转化共培养 win1基因基因克隆烟草农杆菌

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导蜡质基因win1转化烟草的初步研究

引用

植物研究 2011年第6期31卷 702-707页

作者：沙琰琰李晓莉史团省张俊王亚杰郑州大学生物工程系生物多样性与生态学研究所郑州450001

win1与蜡质代谢过程中基因的表达相关,本研究首先从野生型拟南芥花蕾中提取总RNA扩增成SHN1/win1,以载体PBI121为基础构建植物表达载体PBI121-SHN1/win1,然后利用农杆菌介导法将目的基因win1导入烟草k326中,在不同阶段选择四种不同培养... 详细信息

win1与蜡质代谢过程中基因的表达相关,本研究首先从野生型拟南芥花蕾中提取总RNA扩增成SHN1/win1,以载体PBI121为基础构建植物表达载体PBI121-SHN1/win1,然后利用农杆菌介导法将目的基因win1导入烟草k326中,在不同阶段选择四种不同培养基进行培养,其中烟草叶盘共培养培养基T1为:MS+1 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1NAA;烟草滤菌培养基T2为:MS+1 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1NAA+500 mg.L-1Carb;烟草筛选培养基T3为:MS+100 mg.L-1Kan;烟草继代培养基T4为:MS+80 mg.L-1Kan+300 mg.L-1Carb。本实验利用植物基因工程手段将win1基因整合入烟草K326中,改变烟草k326总基因序列。通过PCR、RT-PCR检测方法对转基因烟草k326一代进行鉴定得出win1基因成功导入烟草K326,最终获得了转基因烟草K326一代品种。本实验研究目标通过转基因技术将win1基因插入烟草K326,使其角质膜厚度和成分有所改变,以此来提高烟草K326抗旱、抗寒和抗病等性能,为提高烟草抗逆性特别是抗旱和抗寒性奠定基础。该项初步研究结果不仅对认识和揭示植物角质膜的结构功能具有重要理论意义,而且对应用植物基因工程技术改良和培育抗逆性强的植物优良品种和农业生产都具有重要的应用价值。

关键词： win1基因基因克隆烟草农杆菌

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

通过可诱导途径提高植物抗旱性研究

通过可诱导途径提高植物抗旱性研究

引用

作者：李斯石河子大学

学位级别：硕士

用抗旱转录因子提高农作物的的抗旱性是目前研究的热点。为了克服组成型表达转录国子基因影响转基国植物性状的缺点,本研究构建一种具有级联放大作用并带有表型标记的诱导型植物双价表达载体。该表达系统可在干旱等逆境条件下,通过级联... 详细信息

用抗旱转录因子提高农作物的的抗旱性是目前研究的热点。为了克服组成型表达转录国子基因影响转基国植物性状的缺点,本研究构建一种具有级联放大作用并带有表型标记的诱导型植物双价表达载体。该表达系统可在干旱等逆境条件下,通过级联放大的方式诱导表达,在增加植物抗逆性的同时,增加叶片表层蜡质的累积,达到易于表型识别的目的。我们首先用野生型拟南芥进行胁迫试验,通过PR-PCR半定量方式以检验胁迫条件下CBF3基国、win1基国、RD29A基国、LEA14基国诱导的表达,为植物表达载体的构建提供技术支持。然后采用PCR方法从拟南芥克隆获得冷诱导转录国子CBF3基国,蜡质合成相关win1基因,干旱诱导RD28A基国启动子和冷诱导的LEA14基国启动子,并用CBF3转录国子所调控的下游RD29A基国启动子和LEA14基国启动子分别驱动CBF3基国和win1基国表达,成功构建了双价植物表达载体RD29AP-CBF3/LEA14P-win1/pCAMBIA2201。重组质粒通过冻融法转化根癌农杆菌GV3101,转化烟草,经不定芽诱导、生根培养,获得转基国烟草植株。转基国烟草植株经那霉素检测PCR、RT-PCR检测、初步表明目的基国已整合到烟草基国组中,并可以正常转录。由于时间限制,本研究只得到了初步的实验结果。本实验为今后转基国抗早育种提供了一种切实可行的新思路,为利用花粉管通道法转化棉花,提高抗逆转基国棉花田间筛选的效率打下了基础。

关键词： CBF3基因 win1基因 RD29A基因启动子 LEA14基因启动子抗旱转录因子诱导型启动子表型标记植物表达载体构建

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：