检索结果-南通市图书馆

作者：刘奇河北医科大学

学位级别：硕士

目的:谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统最主要的兴奋性神经递质,突触间隙谷氨酸的大量积聚、及其受体的过度激活,是包括神经病理性痛在内的多种神经系统病理过程发生的重要机制。谷氨酸由突触前神经元胞质中的谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的作用... 详细信息

目的:谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统最主要的兴奋性神经递质,突触间隙谷氨酸的大量积聚、及其受体的过度激活,是包括神经病理性痛在内的多种神经系统病理过程发生的重要机制。谷氨酸由突触前神经元胞质中的谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的作用下生成,通过囊泡谷氨酸转运体系统(vesicular glutamate transporters,vgluts),摄取并贮存于突触囊泡中,再以胞吐的形式释放到突触间隙。研究表明,vgluts的数量和功能对于突触间隙谷氨酸的含量具有重要的调控作用。突触间隙谷氨酸的清除,主要依赖分布于神经元及胶质细胞膜上的Na依赖的高亲和力谷氨酸转运体系统(excitatory amino acid transporters,EAATs)的摄取。被EAATs摄取入胶质细胞后,谷氨酸代谢为谷氨酰胺,被运输回神经元,并再次被转化为谷氨酸,被vgluts装配入突触囊泡中。因此,对于突触间隙谷氨酸水平的调控,vgluts和EAATs是两个重要靶点。目前已经发现了5种EAATs即GLAST(EAAT1)、GLT-1(EAAT2)、EAAC1(EAAT3)、EAAT4、EAAT5和3种vgluts即I型囊泡谷氨酸转运体(vglut1)、II型囊泡谷氨酸转运体(vglut2)、III型囊泡谷氨酸转运体(vglut3)。研究表明,肩负着约90%突触间隙内谷氨酸摄取和清除任务的胶质细胞谷氨酸转运体-1(glial glutamate transporter-1,GLT-1)和II型囊泡谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 2,vglut2)在痛及痛觉过敏的形成中发挥重要作用。如,多种疼痛模型均伴有GLT-1表达或功能的下调;我们应用GLT-1特异性激动剂头孢曲松钠(ceftriaxone,Cef)后,在上调GLT-1表达和功能的同时,发挥了抗神经病理性痛过敏的作用。vglut2在痛及痛觉过敏的形成中作用尚不一致,可能与疼痛的类型和/或性质有关。如,有研究发现,vglut2半量敲除小鼠的基础痛阈及炎性痛痛行为不受影响;在选择性坐骨神经分支损伤(spared nerve injury,SNI)后,出现机械痛觉过敏的减轻;而在坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)后,机械痛觉过敏并未出现显著变化。我们的研究发现,坐骨神经慢性缩窄性损伤即CCI术后,伴随痛觉过敏的产生,大鼠脊髓后角vglut2表达显著下调。因此在神经病理性痛形成过程中vglut2的确切作用尚有待深入探讨,并且vglut2与GLT-1之间的关系也尚不明了。我们在前期的研究中,给CCI大鼠应用GLT-1特异性激动剂Cef后,发现GLT-1表达上调的同时,vglut2表达也上调;并且GLT-1反义寡核苷酸可抑制Cef对vglut2的上调。这些结果初步提示,CCI术后GLT-1表达的下调,进而引起的vglut2表达下调,参与CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏的形成。但是,在这一过程中,下调vglut2对Cef上调GLT-1及其抗CCI诱导的伤害性感受的影响尚不明了。因此,本课题拟通过应用vglut2 shRNA慢病毒载体下调vglut2的表达后,观察Cef对CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏和脊髓后角GLT-1表达影响的变化,来进一步明确CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏过程中vglut2与GLT-1的调制关系,以期为阐明vglut2在神经病理性痛中的作用提供实验依据。方法:1.大鼠脊髓后角vglut2基因下调方案设计与效果评价委托吉玛基因股份有限公司以大鼠vglut2基因(Slc17a6)m RNA为模板,设计构建了三条vglut2 shRNA慢病毒载体序列及一条阴性对照序列:shRNA-668、shRNA-1267、shRNA-1732和shRNA-NC,并分别在细胞、整体两个水平进行效果评价。1.1细胞水平shRNA效果评价与筛选(1)确定大鼠皮层神经元最佳培养时长及病毒转染的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)将原代培养的大鼠皮层神经元分为3 d转染组和7 d转染组。3 d转染组于大鼠皮层神经元培养第3 d时,转染shRNA-NC慢病毒载体,MOI设置为10、20;7 d转染组于大鼠皮层神经元培养第7 d时,转染shRNA-NC慢病毒载体,MOI设置为5、10、20。所有细胞于转染3 d后应用倒置荧光显微镜观察转染效率及神经元状态,选择神经元存活状态好的培养时长、转染效率高的MOI用于后续实验。(2)vglut2 shRNA效果评价与筛选将原代培养大鼠皮层神经元分为5组:Control组、shRNA-NC组、shRNA-668组、shRNA-1267组和shRNA-1732组

关键词： vglut2 GLT-1 头孢曲松钠 shRNA 原代神经元培养大鼠

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Involvement of vglut2 in Neuropathic Pain and Its Regulation by Wnt1/β-Catenin Signaling

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神经药理学报 2019年第Z1期 52-53页

作者： YU Gang SU Rui-bin State Key Laboratory of Toxicology and Medical Countermeasures Beijing Key Laboratory of NeuropsychopharmacologyBeijing Institute of Pharmacology and Toxicology

Backgrounds:Vesicular glutamate transporters(vgluts),which transport glutamate into presynaptic vesicles selectively,are fundamental in glutamate storage and release. The distribution of vglut2 isoform in CNS suggests a possible involvement of vglut2 in pain signaling. Objective:The present study was aimed to investigate the involvement of vglut2 in neuropathic pain and to elucidate the regulatory mechanism of vglut2,in a mouse spared nerve injury(SNI) model. Methods:The temporal changes in vglut2 expression were determined by western blot and immunohistochemistry in the spinal cord and pain-related brain regions of SNI mice. The cell distribution characteristics of vglut2 in the pathological condition were observed by immunofluorescent staining. Then,we regulated the expression and function of vglut2 by shRNA interference and vglut inhibitors respectively,and the behavioral consequences were observed. We also investigated the effects of vglut2 down-regulation or inhibition on glutamate release. Finally,the effects of Wnt/β-catenin signaling on vglut2 expression and pain behavior were investigated by using Wnt agonist,Wnt1,and Wnt/β-catenin pathway inhibitor XAV939 in SNI mice. Results:SNI surgery induced significant up-regulation of vglut2 in the spinal cord and supraspinal regions. In SNI mice,vglut2 is mainly co-locolized with NeuN and MAP2,but not Iba-1 and GFAP. Intrathecal or intracerebral administration of vglut2 shRNAs or CSB6 B significantly attenuated mechanical allodynia and decreased glutamate release. Meanwhile,Wnt1/β-catenin signaling was also activated in SNI mice. Wnt agonist or Wnt1 significantly increased vglut2 expression,while Wnt/β-catenin pathway inhibitor XAV939 decreased vglut2 expression. Additionally,XAV939 attenuated mechanical allodynia in mice,and this effect was in accordance with down-regulation of vglut2 protein levels. vglut2 shRNAs significantly attenuated mechanical allodynia induced by Wnt agonist or Wnt1. Conclusion:The changes i

关键词： vglut2 neuropathic pain RNA interference Glutamate release Wnt1 β-catenin

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大鼠vglut2基因shRNA慢病毒载体转染原代培养脊髓神经元对vglut2表达的影响

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神经解剖学杂志 2012年第6期28卷 537-543页

作者：方相春张春奎唐君李志红张婷李金莲第四军医大学人体解剖与组织胚胎学教研室暨梁銶琚脑研究中心西安710032

目的:探讨新构建的可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 2,vglut2)短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒载体能否有效地感染大鼠脊髓原代培养神经元,并鉴定其对培养神经元内vglut2基因的特异性... 详细信息

目的:探讨新构建的可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 2,vglut2)短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒载体能否有效地感染大鼠脊髓原代培养神经元,并鉴定其对培养神经元内vglut2基因的特异性干扰效果,从而为进一步在整体动物脊髓水平研究vglut2的功能提供有力的工具。方法:首先分别将已筛选到的两对互补并靶向作用于编码大鼠vglut2序列两个位点的特异性shRNA序列和一个阴性对照的寡核苷酸,克隆到pGCSIL-GFP质粒(经Age I和EcoRI双酶切)载体内,经酶切、测序鉴定及转染293T细胞,包装得到病毒颗粒。然后将筛选出的慢病毒感染体外分离、培养的胚胎大鼠脊髓神经元,将培养的原代神经元分为正常组、阴性对照组、vglut2-shRNA-1组和vglut2-shRNA-2组,在荧光显微镜下分别观察GFP的表达情况;同时运用Westernt blot检测各组vglut2蛋白的表达水平。结果:免疫荧光检测显示,阴性对照组、vglut2-shRNA-1组和vglut2-shRNA-2组脊髓原代培养神经元均能观察到明显的GFP荧光,表明这些神经元已被慢病毒载体高效转染;但vglut2 shRNA-1组和vglut2 shRNA-2组神经元vglut2的表达量明显低于正常组和阴性对照组。Western blot结果显示,vglut2-shRNA-1组和vglut2-shRNA-2组的vglut2蛋白的表达量与正常组和阴性对照组相比明显有所下降,分别占正常组的62.42±1.12%和66.07±1.33%(Pvglut2-shRNA-1组和vglut2-shRNA-2组之间无显著性差异(P>0.05);阴性对照组与正常组相比亦无明显差异(P>0.05)。结论:vglut2-shRNA-1组和vglut2-shRNA-2组重组慢病毒载体均能有效地感染原代培养脊髓神经元,并高效下调其神经元内目的基因vglut2的表达。

关键词： vglut2 RNA干扰慢病毒载体脊髓原代培养神经元大鼠

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大鼠vglut2基因shRNA慢病毒载体的构建和鉴定

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神经解剖学杂志 2011年第6期27卷 597-603页

作者：姜俊高凡葛顺楠李志红唐君李金莲第四军医大学航空医学系2009级学员口腔医学系2008级学员人体解剖学教研室暨梁銶琚脑研究中心西安710032

目的:构建可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体(vglut2)shRNA的慢病毒载体,特异性下调中枢神经系统内vglut2的表达,从而为研究vglut1和vglut2的功能差异提供有力的工具。方法:首先在体外合成四对互补并靶向作用于编码大鼠vglut2序列四个... 详细信息

目的:构建可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体(vglut2)shRNA的慢病毒载体,特异性下调中枢神经系统内vglut2的表达,从而为研究vglut1和vglut2的功能差异提供有力的工具。方法:首先在体外合成四对互补并靶向作用于编码大鼠vglut2序列四个位点的特异性短发卡RNA(short hairpin RNA)序列和一个阴性对照的寡核苷酸,克隆到pGCSIL-GFP质粒(经Age I和EcoRI双酶切)载体内,经酶切及测序鉴定正确后,将该质粒与辅助质粒pHelper1.0以及pHelper2.0共转染T293细胞,包装得到病毒颗粒。各组病毒载体转染原代培养的大鼠皮层神经元后,运用免疫荧光和Western Blot检测各组蛋白的表达水平。结果:pGCSIL-GFP质粒克隆得到的vglut2 shRNA序列正确,包装得到的病毒可以有效转染原代培养的皮层神经元,Western Blot检测结果显示:vglut2 shRNA-1与vglut2 shRNA-2病毒组的vglut2表达水平与空白组相比有显著性差异(Pvglut2 shRNA-3与vglut2 shRNA-4病毒组的vglut2表达水平与空白组相比同样有显著性差异(Pvglut2shRNA-1与vglut2 shRNA-2病毒组相比无显著性差异(P>0.05);但vglut2 shRNA-3与vglut2 shRNA-4病毒组与vglut2 shRNA-1和vglut2 shRNA-2病毒组相比有显著性差异(Pvglut2 shRNA-3与vglut2 shRNA-4组病毒能较为高效的下调培养的皮层神经元vglut2的表达,下调效率超过60%。结论:本研究成功构建出表达针对大鼠vglut2基因shRNA的慢病毒载体,并可有效下调vglut2的表达,为进一步研究vglut2的功能及其与vglut1之间的功能差异提供了有力的工具。

关键词： vglut2 RNA干扰慢病毒载体原代培养神经元大鼠

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靶向下调大鼠脊髓背角内vglut2基因对外周痛觉信息传递的影响

靶向下调大鼠脊髓背角内VGLUT2基因对外周痛觉信息传递的影响

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作者：方相春第四军医大学

学位级别：硕士

疼痛是人们在不同的病理状态下由大脑所产生的一种不愉悦的感觉，而长期的慢性痛则在全世界的范围内成为严重影响患者生命质量的重要疾病。因此，阐明疼痛发生和传递的机制，开发更有效的镇痛新药以及临床上对于疼痛的靶向治疗，已经成... 详细信息

疼痛是人们在不同的病理状态下由大脑所产生的一种不愉悦的感觉，而长期的慢性痛则在全世界的范围内成为严重影响患者生命质量的重要疾病。因此，阐明疼痛发生和传递的机制，开发更有效的镇痛新药以及临床上对于疼痛的靶向治疗，已经成为当今生命科学研究领域的热点问题[1]。背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）和脊髓背角是躯体感觉信息（包括痛觉信息）传递和调控的初级门户，位于其内的谷氨酸在外周痛觉信息的传递中具有重要作用。已有的研究证实，在对痛觉信息的传递和调控过程中，谷氨酸是其中最主要的神经递质之一，谷氨酸在神经元的胞体合成后须由突触囊泡进行转运并胞吐释放才能发挥其兴奋性递质的作用，这种转运方式又必须借助特定的囊泡膜谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporters, vgluts)来完成。近10年，研究人员利用快速发展的分子生物学技术成功地分离并克隆出了不同亚型的囊泡膜谷氨酸转运体，并将之命名vglut1、vglut2、 vglut3[2,3]。由于vglut1和vglut2广泛分布于谷氨酸能轴突终末内，故目前在国际上人们已经将vglut1和vglut2作为中枢神经系统内谷氨酸能终末的特异性标记物[4]。谷氨酸参与感觉信息的传递和调控的结构基础在于它不仅分布在投射神经元内，在中间神经元内也有广泛的分布，而新近研究也发现在长传导通路的各级核团和中间神经元内均有vglut2的分布;进一步的研究也证实DRG和脊髓背角内有大量的vglut2表达神经元和轴突终末[5]。目前在国内外由于缺乏针对vglut2特异性的激动剂和拮抗剂，导致对vglut2所参与外周痛觉信息传递和调控机制的研究十分困难[6,7]。随着分子生物学技术的迅速发展，基因敲除技术很好的解决了这一难题。然而，基因敲除技术对于针对vglut2为疼痛的靶点，作为临床上开发有效的镇痛药而言显然是不现实的。随着基因阻断技术的发展，RNA干扰技术（RNA interference, RNAi）为特定基因功能研究和相关疾病的治疗提供了一种全新的思路。脊髓背角的中间神经元（同样作为躯体感觉信息传递和调控的关键部位），其内的vglut2与外周疼痛信息的传递和调控的关系如何，到目前为止尚不十分清楚。另外，脊髓内vglut2样阳性终末由于既来源于初级传入神经元（DRG），也来自于脊髓中间神经元本身，因此在慢性痛状态下，这两部分来源的vglut2究竟是怎样参与痛觉信息的传递和调控的，目前也无文献报道。针对这两个问题，我们拟综合采用RNA干扰技术结合顺行束路追踪、免疫荧光组织化学、细胞培养和电生理学技术从以下几个方面进行了研究。第一部分：将携带有两种不同vglut2shRNA序列的慢病毒载体，感染在体外原代培养的脊髓神经元，进一步验证并筛选能够最有效下调脊髓神经元内vglut2表达的慢病毒载体。目的：验证已经在体外培养的皮层神经元上筛选得到的可以特异性干扰vglut2表达的两种慢病毒是否能够有效地感染原代培养的大鼠脊髓神经元，筛选出能够最高效干扰培养脊髓神经元内的vglut2基因表达的慢病毒。方法：首先将这两种重组慢病毒直接感染体外培养的胚胎大鼠脊髓神经元，实验分为正常组、阴性对照组（空病毒载体组）、vglut2-shRNA-1组以及vglut2-shRNA-2组，分别观察各组大鼠脊髓神经元内绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的表达情况;同时运用免疫蛋白质印迹（Western Blot）技术检测vglut2蛋白的表达水平。结果：免疫荧光组织化学染色结果显示：阴性对照组、两组vglut2-shRNA慢病毒组脊髓神经元内均可以观察到GFP的荧光，提示这些神经元已经被慢病毒载体高效地感染;但两组vglut2-shRNA慢病毒组神经元内的vglut2的表达量要明显比正常组和阴性对照组低。Western Blot结果显示：两组vglut2-shRNA慢病毒组脊髓神经元内vglut2蛋白的表达量明显低于其他两组的表达量(Pvglut2-shRNA-1组和vglut2-shRNA-2组vglut2蛋白的表达量分别占正常组表达量的62.42±1.12%和66.07±1.33%，但两组vglut2-shRNA慢病毒组组间的vglut2蛋白的表达量相比无明显差异(P>0.05);阴性对照组和正常组之间相比也无明显差异(P>0.05)。结论：两组vglut2-shRNA重组慢病毒均能高效地感染原代培养脊髓神经元，并且能够下调脊髓神经元内vglut2的表达。第二部分：将在体外有效降低vglut2的两种shRNA重组的慢病毒，通过定位注射方式注入大鼠脊髓背角，进而感染脊髓背角神经元，观察下调其内vglut2的表达对

关键词：谷氨酸 vglut2 神经病理性痛 DRG shRNA 慢病毒脊髓大鼠

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脊髓不同类型C纤维末梢中vglut2在头孢曲松钠抗CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏中的变化

脊髓不同类型C纤维末梢中VGLUT2在头孢曲松钠抗CCI大鼠慢性神经病...

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作者：房阔河北医科大学

学位级别：硕士

目的:胶质细胞谷氨酸转运体-1（Glial glutamate transporter-1,GLT-1）是维持突触间隙谷氨酸稳态的主要转运体,其肩负着约90%突触间隙内谷氨酸的摄取和清除。研究发现,GLT-1的表达或功能下调,参与包括神经病理性痛在内的多种疼痛及痛... 详细信息

目的:胶质细胞谷氨酸转运体-1（Glial glutamate transporter-1,GLT-1）是维持突触间隙谷氨酸稳态的主要转运体,其肩负着约90%突触间隙内谷氨酸的摄取和清除。研究发现,GLT-1的表达或功能下调,参与包括神经病理性痛在内的多种疼痛及痛觉过敏的形成和维持。Rothstein等报道,β-内酰胺类抗生素,如头孢曲松钠（Ceftriaxone,Cef）等,可特异性地上调GLT-1的表达及其对谷氨酸的摄取。在这一报道的基础上,我们前期的研究发现,Cef可以通过上调大鼠脊髓后角GLT-1的表达,增强其对谷氨酸的摄取而发挥抗CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏的作用,但是其深层次的机制尚有待进一步研究。被GLT-1摄取入星形胶质细胞内的谷氨酸,通过谷氨酸-谷氨酰胺循环,再次回到突触前神经末梢,再通过囊泡型谷氨酸转运体（vesicular glutamate transporter,vglut）,被装配入囊泡,并释放至突触间隙。因此,通过谷氨酸-谷氨酰胺循环,vglut和GLT-1被密切联系在一起,共同维持突触内谷氨酸的稳态。其中,II型囊泡型谷氨酸转运体,即vglut2,在脊髓主要分布在I板层、II板层,以及IV、V的深部,在感觉和伤害性信息的传递和加工中发挥着重要作用。我们前期的研究发现,伴随着热和机械性痛觉过敏的产生,坐骨神经慢性缩窄性损伤（chronic constriction injury of sciatic nerve,CCI）大鼠脊髓后角vglut2蛋白的表达显著降低;Cef通过上调GLT-1,进而上调vglut2的表达,而发挥抗CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏的作用。尽管目前已经有了一些vglut2参与疼痛的证据,但其结果不尽相同。如,有研究发现,全身vglut2基因半量敲除的杂合子小鼠,在坐骨神经分支选择性损伤（spared nerve injury,SNI）后表现出机械和冷痛觉过敏的减轻,而在CCI模型中仅表现为冷痛觉过敏的减轻。因此,vglut2在神经病理性痛中的确切作用,以及Cef上调vglut2减轻痛觉过敏的确切机制,还有待进一步探讨。脊髓后角中vglut2免疫反应阳性神经末梢的构成复杂:既包括来源于初级传入神经元的神经末梢,又包括来源于脊髓内固有神经元的神经末梢。不同的神经末梢在伤害性信息的传递和痛觉过敏的形成中发挥着不同的作用。一般认为,无髓鞘的C纤维参与痛觉信息的传递。根据神经递质的不同,C纤维又可以分为植物凝聚素B4（isolectin B4,IB4）阳性的非肽能神经纤维和降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）阳性的肽能神经纤维。在神经病理性痛的发生发展过程中,这些与伤害性信息传递直接相关的初级传入神经末梢中vglut2的变化,尚不明了。因此,本课题旨在观察Cef治疗后,CCI大鼠脊髓后角不同类型C纤维末梢中vglut2的表达变化及其与GLT-1之间的调制关系,以期为阐明Cef抗慢性神经病理性痛过敏的机制、及GLT-1和vglut2在神经病理性痛中的作用提供进一步的实验依据。方法:选用健康雄性Sprague-Dawley大鼠108只,体重290±20克,随机分为以下5组:（1）Sham组（n=12）:仅暴露大鼠右侧坐骨神经但不结扎。于术前1 d、术后4 d、7 d观察大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值的变化;于术后7 d取大鼠L4-L6节段脊髓后角,用Western blot检测GLT-1和vglut2的表达变化,用免疫荧光双标法检测IB4和vglut2、CGRP和vglut2的共定位表达变化。（2）CCI组（n=12）:行大鼠右侧坐骨神经CCI手术。于术前1 d、术后4 d、7 d观察大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值的变化;于术后7 d取大鼠L4-L6节段脊髓后角,用Western blot检测GLT-1和vglut2的表达变化,用免疫荧光双标法检测IB4和vglut2、CGRP和vglut2的共定位表达变化。（3）CCI+NS+R-ODNs组（n=28）:行大鼠右侧坐骨神经CCI术,于术后当天开始给大鼠腹腔注射生理盐水（normal saline,NS）,0.72ml/kg,每日一次,连续7 d。于腹腔注射NS的同时,给大鼠椎管内注射GLT-1的无意义寡核苷酸（random oligodeoxynucleotides,R-ODNs）,每次10μl（18 nmol）。根据椎管内注射的次数,分为一次、两次和三次注射三个亚组。椎管内一次注射组（n=8）为第一次腹腔注射后3 d,给大鼠椎管内注射GLT-1 R-ODNs一次;椎管内两次注射组（n=12）为第一次腹腔注射后2 d和5 d时,分别给大鼠椎管内注射GLT-1 R-O

关键词：头孢曲松钠神经病理性痛 GLT-1 vglut2 C纤维大鼠

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枢经推拿对慢性疼痛大鼠vglut2表达的影响及其机制研究

枢经推拿对慢性疼痛大鼠VGLUT2表达的影响及其机制研究

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作者：王雄将广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究以L5脊神经结扎（SNL）神经病理性疼痛的大鼠模型为研究对象,从行为学检测和分子生物学检测观察分析推拿对SNL大鼠的镇痛作用,以2型囊泡膜谷氨酸转运体（vglut2）在外周痛觉信息传递中的分子机制及其变化,探究推拿的镇痛效... 详细信息

目的:本研究以L5脊神经结扎（SNL）神经病理性疼痛的大鼠模型为研究对象,从行为学检测和分子生物学检测观察分析推拿对SNL大鼠的镇痛作用,以2型囊泡膜谷氨酸转运体（vglut2）在外周痛觉信息传递中的分子机制及其变化,探究推拿的镇痛效应机制。通过本次研究,为临床上慢性神经病理性疼痛的治疗提供一种安全有效、操作简单的方法,也为推拿镇痛的进一步研究提供科学依据和理论基础。方法:将72只雄性SD大鼠进行两次随机分组,第一次分为正常组16只、假手术组16只、模型组40只,模型组通过L5脊神经结扎建立SNL模型,造模7天后,每组随机选择8只进行行为学检测及取材;进行第二次随机分组,将32只模型组大鼠随机分为模型组8只、慢病毒注射组8只、假推拿组8只、枢经推拿组8只。对慢性病毒注射组大鼠脊髓内注入使vglut2下调的慢病毒颗粒,仅注射1次;对假推拿组大鼠轻轻抚摸背部18min,每天1次,共干预10天;对枢经推拿组大鼠采用按摩推拿手法模拟仪依次刺激双侧足少阳胆经上的环跳、风市、阳陵泉三穴,手法模拟为点按法、拨法、揉法,每法每穴1min,共干预10天,干预结束后进行行为学检测及取材。通过热痛觉阈值测定、机械痛阈值测定观察各组痛觉过敏情况;通过斜板实验评价各组大鼠的运动功能情况;采用免疫组化和Western blot法检测脊髓腰膨大节段中vglut2蛋白的表达水平。结果:1.大鼠体重变化结果:造模7天后,正常组、假手术组与模型组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）,正常组、假手术组差异无统计学意义（P＞0.05）;干预10天后,正常组和假手术组差异无统计学意义（P＞0.05）;正常组、假手术组与模型组、慢性病毒注射组、假推拿组、枢经推拿组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）;慢性病毒注射组、假推拿组、枢经推拿组大鼠体重差异无统计学意义（P＞0.05）,与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。2.热痛觉阈值测定结果:造模7天后,正常组与假手术组相比较差异无统计学意义（P＞0.05）;正常组和假手术组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;干预10天后,正常组、假手术组、慢性病毒注射组、枢经推拿组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,模型组与假推拿组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。3.机械痛觉阈值测定结果:造模7天后,正常组与假手术组相比较差异无统计学意义（P＞0.05）;正常组和假手术组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。干预10天后,正常组、假手术组、慢性病毒注射组、枢经推拿组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,模型组与假推拿组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。4.斜板实验结果:造模7天后,假手术组与模型组相比较差异无统计学意义（P＞0.05）;假手术组、模型组与正常组相比较差异有统计学意义（P＜0.05）。干预10天后,斜板实验测定数据显示,正常组、假手术组、模型组、慢性病毒注射组、假推拿组、枢经推拿组相比较差异无统计学意义（P＞0.05）。5.免疫组化检测结果:造模7天后,正常组弱阳性（±）占比12.5%,阳性（+）占比87.5%;假手术组阳性（++）占比62.5%,强阳性（+++）占比37.5%;模型组强阳性（+++）占比100%。干预10天后,正常组阳性（+）占比100%;假手术组阳性（+）占比87.5%,阳性（++）占比12.5%;模型组强阳性（+++）占比100%;慢性病毒注射组弱阳性（±）占比75%,阳性（+）占比25%;假推拿组阳性（+++）占比100%;枢经推拿组阳性（+）占比100%。*** blot检测结果:造模7天后,假手术组与正常组相比较差异有统计学意义（P＜0.05）,假手术组与模型组比较比较差异有统计学意义（P＜0.05）,模型组与正常组相比较差异有统计学意义（P＜0.05）;干预10天后,正常组、假手术组、枢经推拿组相比较差异无统计学意义（P＞0.05）,模型组与假推拿组相比较差异无统计学意义（P＞0.05）,正常组、假手术组、枢经推拿组与慢性病毒注射组相比较差异有统计学意义（P＜0.05）,正常组、假手术组、枢经推拿组与模型组、假推拿组相比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:***造模不会对大鼠的运动功能产生影响,枢经推拿可以促进SNL大鼠的热痛阈、机械痛阈的恢复,提示枢经推拿可以改善SNL大鼠的感觉功能。2.皮肤、肌肉组织损伤疼痛和神经损伤疼痛都会引起vglut2表达上升,通过靶向下调大鼠脊髓神经元内的vglut2表达,能够改善大鼠的疼痛外观状态,能够恢复大鼠的热痛觉阈值、机械痛觉阈值至正常组水平。3.枢经推拿可下调vglut2的表达,进而调节脊髓内突触终末神

关键词：枢经推拿神经病理性疼痛 vglut2

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Sexual Dimorphism of Inputs to the Lateral Habenula in Mice

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Neuroscience Bulletin 2022年第12期38卷 1439-1456页

作者： Xue Liu Hongren Huang Yulin Zhang Liping Wang Feng Wang Shenzhen Key Lab of Neuropsychiatric Modulation Guangdong Provincial Key Laboratory of Brain Connectome and BehaviorCAS Key Laboratory of Brain Connectome and Manipulationthe Brain Cognition and Brain Disease InstituteShenzhen Institute of Advanced TechnologyChinese Academy of SciencesShenzhen-Hong Kong Institute of Brain Science-Shenzhen Fundamental Research InstitutionsShenzhen 518055China University of the Chinese Academy of Sciences Beijing 100049China

The lateral habenula(LHb),which is a critical neuroanatomical hub and a regulator of midbrain monoaminergic centers,is activated by events resulting in negative valence and contributes to the expression of both appetitive and aversive ***,whole-brain cell-type-specific monosynaptic inputs to the LHb in both sexes remain incompletely *** this study,we used viral tracing combined with in situ hybridization targeting vesicular glutamate transporter 2(vglut2)and glutamic acid decarboxylase 2(Gad2)to generate a comprehensive whole-brain atlas of inputs to glutamatergic andγ-aminobutyric acid(GABA)ergic neurons in the *** found>30 ipsilateral and contralateral brain regions that projected to the *** these,there were significantly more monosynaptic LHb-projecting neurons from the lateral septum,anterior hypothalamus,dorsomedial hypothalamus,and ventromedial hypothalamus in females than in *** interestingly,we found a stronger GABAergic projection from the medial septum to the LHb in males than in *** results reveal a comprehensive connectivity atlas of glutamatergic and GABAergic inputs to the LHb in both sexes,which may facilitate a better understanding of sexual dimorphism in physiological and pathological brain functions.

关键词： vglut2 Gad2 Monosynaptic inputs Lateral habenula Sex differences Rabies retrograde tracing

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Medial Preoptic Area Modulates Courtship Ultrasonic Vocalization in Adult Male Mice

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Neuroscience Bulletin 2019年第4期35卷 697-708页

作者： Shu-Chen Gao Yi-Chao Wei Shao-Ran Wang Xiao-Hong Xu Institute of Neuroscience State Key Laboratory of Neuroscience CAS Center for Excellence in Brain Science and Intelligence Technology Chinese Academy of Sciences Shanghai 200031 China University of the Chinese Academy of Sciences Beijing 100049 China

Adult male mice emit highly complex ultrasonic vocalizations(USVs)in response to female *** US Vs,thought to facilitate courtship behaviors,are routinely measured as a behavioral index in mouse models of neurodevelopmental and psychiatric disorders such as *** the regulation of US Vs by genetic factors has been extensively characterized,the neural mechanisms that control USV production remain largely ***,we report that optogenetic activation of the medial preoptic area(mPOA)elicited the production of USVs that were acoustically similar to courtship US Vs in adult ***,mPOA vesicular GABA transporter-positive(Vgat +)neurons were more effective at driving USV production than vesicular glutamate transporter 2-positive ***,ablation of mPOA Vgat+ neurons resulted in altered spectral features and syllable usage of USVs in targeted ***,these results demonstrate that the mPOA plays a crucial role in modulating courtship USVs and this may serve as an entry point for future dissection of the neural circuitry underlying USV production.

关键词： mPOA Optogenetics Vgat vglut2 Ultrasonic vocalization Courtship

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Transcriptional control of neurotransmitter phenotypes and their receptors in the developing dorsal spinal cord

Transcriptional control of neurotransmitter phenotypes and t...

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细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学...

作者： Tianwen Huang Wenlong Zhao Menggui Huang Zhen Guo Jia Hu Leping Cheng Institute of Neuroscience and State Key Laboratory of Neuroscience Shanghai Institutes for Biological SciencesChinese Academy of Sciences Institute of Biochemistry and Cell Biology Shanghai Institutes for Biological SciencesChinese Academy of Sciences

Establishing the pattern of expression of transmitters and peptides as well as their receptors in different neuronal types is crucial for understanding the circuitry in various regions of the *** dorsal horn of the spinal cord is an integrative center that transmits and processes diverse somatosensory *** neurons in the dorsal spinal cord can be grouped into excitatory and inhibitory neurons that use glutamate and GABA/glycine as their fast transmitters,*** studies

关键词： Neurotransmitter phenotype Transcriptional control vglut2 Tlx3 Dorsal spinal cord

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