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白纹伊蚊“类IFN”因子vago的鉴定和功能初步研究

白纹伊蚊“类IFN”因子Vago的鉴定和功能初步研究

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全国寄生虫病高峰论坛暨2016年浙江省热带病与寄生虫病学术年会

作者：刘文权邢翠翠梁韶晖温州医科大学寄生虫学教研室温州医科大学热带医学研究所

目的:证实白纹伊蚊体内存在与果蝇和库蚊同源的"类IFN"因子vago,白纹伊蚊vago与登革病毒感染相关。方法:生物信息学分析白纹伊蚊唾液腺转录组,预测与果蝇和致倦库蚊vago蛋白同源的白纹伊蚊vago。RT-PCR验证白纹伊蚊vago在各个发育阶段(... 详细信息

目的:证实白纹伊蚊体内存在与果蝇和库蚊同源的"类IFN"因子vago,白纹伊蚊vago与登革病毒感染相关。方法:生物信息学分析白纹伊蚊唾液腺转录组,预测与果蝇和致倦库蚊vago蛋白同源的白纹伊蚊vago。RT-PCR验证白纹伊蚊vago在各个发育阶段(卵、幼虫、蛹和雌、雄成蚊)、不同组织(雌蚊的唾液腺和中肠组织)和白纹伊蚊C6/36细胞内的表达。PCR扩增vago成熟肽基因,构建重组表达载体pColdⅢ-vago,表达产物经SDS-PAGE及Westernblot鉴定后,利用镍离子亲和树脂纯化vago蛋白,以纯化产物为抗原免疫BALB/C小鼠制备抗vago的多克隆抗体。登革病毒(DENV2)感染C6/36细胞,分别在0h,12h,24h和48h收集C6/36细胞,RT-qPCR检测vago基因的表达,以制备的鼠抗vago多克隆抗体为一抗Western blot检测vago蛋白的表达。纯化的重组vago预处理C6/36细胞后进行DENV2感染实验,RT-qPCR检测细胞内DENV NS1基因。结果:生物信息学分析发现白纹伊蚊唾液腺转录组中有一个与致倦库蚊和果蝇的vago同源且富含半胱氨酸和具有8个半胱氨酸组成的VWC保守结构域的蛋白,信号肽分析显示其是一个分泌蛋白,因此将该蛋白命名为白纹伊蚊vago。RT-PCR验证表明白纹伊蚊vago在白纹伊蚊各个发育阶段、不同组织和C6/36细胞中均表达。RT-qPCR和Western blot结果表明DENV2感染C6/36细胞12h后,vago表达显著上升,且随着感染时间的延长,其表达也进一步升高,而紫外灭活DENV2、酵母和大肠杆菌处理细胞48h后并没有诱导vago表达变化。重组vago预处理的C6/36细胞内DENV NS1的表达水平明显下降(3vago(100n咖L和200n咖L)处理组之间NS1的表达水平无显著差异(p=0.20)。结论:证实白纹伊蚊体内表达vago蛋白,白纹伊蚊vago与白纹伊蚊抗登革病毒感染相关。

关键词：白纹伊蚊 vago 登革病毒 C6/36细胞

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对虾含脂肪酸羟化酶结构域蛋白的抗病毒作用机理研究

对虾含脂肪酸羟化酶结构域蛋白的抗病毒作用机理研究

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作者：朱小旭山东大学

学位级别：硕士

脂肪酸羟化酶超家族包含了多个亚家族,其中包括胆固醇25羟化酶（Cholesterol 25-hydroxylase,CH25H）和含脂肪酸羟化酶结构域蛋白质2（Fatty acid hydroxylase domain containing protein 2,FAXDC2）。CH25H 催化胆固醇氧化形成可溶的25羟基胆固醇（25HC）,该胆固醇具有抑制病毒感染功能。目前,所有关于CH25H的研究主要限制在脊椎动物中,在无脊椎动物中未发现该基因。FAXDC2在脊椎动物和无脊椎动物中均有发现,但功能仍然未知。在本研究中,我们从日本囊对虾（Marsupenaeusjaponicus）中鉴定出两个含脂肪酸羟化酶结构域蛋白质2样分子,并将它们命名为FAXDC2-like A（FAXDC2-LA）和FAXDC2-like B（FAXDC2-LB）。在受白斑综合症病毒（WSSV）感染的对虾中,Faxdc2-1a和Faxdc2-1b明显上调表达。利用RNA干扰技术敲低Faxdc2-la和Faxdc2-lb表达后,25HC含量明显下降,WSSV复制显著增加。注射或口服25HC后,对虾中的病毒含量显著降低,而对虾的成活率明显提高。所有结果都表明,FAXDC2-Ls的作用类似于脊椎动物的CH25H,并通过其酶促产物25HC在对虾抗病毒反应中发挥重要作用。机制上,Faxdc2-ls是JAK/STAT通路的靶基因,其通过vago5-JAK/STAT-FAXDC2-25HC通路发挥对虾的抗病毒功能,类似于脊椎动物中IFN-JAK/STAT-CH25H-25HC通路。同时,我们还发现FAXDC2-LA和FAXDC2-LB胞内部分都可以与WSSV囊膜蛋白VP26结合,表明FAXDC2-Ls可能通过与WSSV囊膜蛋白发生相互作用来进一步抑制病毒的增殖。该研究为无脊椎动物干扰素系统的存在提供了新的证据。这也为虾类养殖中WSSV的防治提供了一种新的策略和候选药物。

关键词：日本囊对虾含脂肪酸羟化酶结构域蛋白2 胆固醇25羟化酶 25羟基胆固醇 vago JAK/STAT 白斑综合征病毒

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