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非洲马瘟病毒vp5蛋白和vp2截短蛋白的表达及抗体制备

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非洲马瘟病毒VP5蛋白和VP2截短蛋白的表达及抗体制备

作者：范亚亚河南科技学院

学位级别：硕士

非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是由非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)引起的一种感染马、驴、骡等马属动物的传染病。该病的主要特征为发热和肺水肿,病死率极高,幼龄马匹可达到95%,是严重危害世界养马业的重大... 详细信息

非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是由非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)引起的一种感染马、驴、骡等马属动物的传染病。该病的主要特征为发热和肺水肿,病死率极高,幼龄马匹可达到95%,是严重危害世界养马业的重大疫病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定必须报告的疫病,在我国被列为一类动物传染病。非洲马瘟主要分布在撒哈拉沙漠以南的非洲地区,目前在我国尚未发现此病,但与我国邻近的泰国和马来西亚在2020年的3月与8月分别暴发了非洲马瘟疫情,一旦非洲马瘟传入我国,将对我国养马业造成巨大损失。非洲马瘟病毒的vp5和vp2结构蛋白互作形成了病毒的外层衣壳,是诱导机体产生中和抗体是主要蛋白抗原,其中vp2蛋白是AHSV最主要的血清型特异性抗原。本研究首先参考Gen Bank中的AHSV-1参考毒株序列,分别合成了S2(编码vp2)和S6(编码vp5)全长基因,长度分别为3218bp和1564bp。设计表达引物,通过PCR扩增、胶回收纯化后进行酶切,将S6基因亚克隆于杆状病毒穿梭载体p Fast Bac HTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了含有S6基因的重组穿梭质粒p Fast Bac HTB-AHSV-vp5。将该质粒转化DH10Bac感受态细胞,并经蓝白斑筛选后,进行PCR鉴定,获取阳性单克隆菌株,提取纯化转座杆粒Bacmid-AHSV-vp5,转染sf9昆虫细胞,获得表达AHSV-1 vp5蛋白的重组杆状病毒,SDS-PAGE和Western-blot结果显示,重组表达的vp5蛋白大小为60k Da,并利用镍柱层析获得了纯化的重组vp5蛋白。通过生物信息学软件对AHSV-1 vp2蛋白进行抗原性分析,将其分为1-502aa和503-1056aa进行原核表达,设计表达引物,以合成的S2基因为模板,进行PCR扩增,获得S2(1-502aa)和S2(503-1056aa)两段截短基因,分别与载体p RSF-Duet1-SUMO连接,获得了重组质粒p RSF-S2-502和p RSF-S2-1056,将其分别转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,获得了大小分别为70k Da和72k Da的截短表达蛋白,通过镍柱层析分别获得了纯化的目的蛋白,并分别利用SUMO蛋白酶切掉了目的蛋白上的SUMO标签。将纯化的重组vp5、vp2(1-502aa)和vp2(503-1056aa)分别三次免疫新西兰大白兔,制备了特异性多克隆抗体,利用纯化的vp2截短蛋白vp2(1-502aa)和vp2(503-1056aa)进行了Dot-ELISA检测,结果显示制备的vp2截短蛋白特异性良好。本研究利用杆状病毒和大肠杆菌成功表达了AHSV-1 vp5和截短的vp2(1-502aa)和vp2(503-1056aa)结构蛋白并制备了相应的多克隆抗体,这为进一步研制AHSV的亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗提供了实验材料,同时也为建立基于vp2型特异性抗原的ELISA以及胶体金试纸条检测方法奠定了基础,对我国有效防控非洲马瘟的传入具有重要意义。

关键词：非洲马瘟病毒 vp5蛋白 vp2截短蛋白表达多克隆抗体

基于PiggyBac转座系统构建稳定表达UL19基因的小鼠乳腺癌细胞系

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生物工程学报 2024年

作者：赵晓彤王欣雅刘滨磊胡翰汪洋湖北工业大学生命科学与健康工程学院

为研究溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒（oncolytic herpes simplex virus type 2，oHSV2）主要衣壳蛋白vp5蛋白（由UL19基因编码）调控免疫细胞抗肿瘤的机制。本研究通过PiggyBac转座系统构建了稳定表达vp5蛋白、近红外荧光蛋白(near-infrared fl... 详细信息

为研究溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒（oncolytic herpes simplex virus type 2，oHSV2）主要衣壳蛋白vp5蛋白（由UL19基因编码）调控免疫细胞抗肿瘤的机制。本研究通过PiggyBac转座系统构建了稳定表达vp5蛋白、近红外荧光蛋白(near-infrared fluorescent protein，iRFP）和绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的小鼠乳腺癌细胞4T1-iRFP-vp5-GFP细胞系。通过流式细胞术及免疫印迹法筛选GFP及vp5高表达的单克隆细胞系，检测所构建细胞系中UL19基因表达稳定性。经SYBR Green I实时荧光定量PCR、免疫印迹法检测，连续传代至15代的4T1-iRFP-vp5-GFP细胞中的UL19基因拷贝数及vp5蛋白表达量均显著高于瞬转UL19基因的4T1细胞，证明了UL19基因稳定插入至4T1细胞基因组中。实时无标记动态细胞分析技术（real time cellanalysis，RTCA）监测4T1-iRFP-vp5-GFP细胞显示具有与其亲代细胞4T1相似的生长活性。进一步研究证实，NK92细胞对4T1-iRFP-vp5-GFP细胞的杀伤能力显著高于4T1细胞。本研究为阐述vp5蛋白在4T1细胞中通过HLA-E分子调控包括T细胞、NK细胞在内的免疫细胞发挥抗肿瘤功能奠定了基础。

关键词：溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒 vp5蛋白 PiggyBac转座系统 4T1细胞

新疆地区蓝舌病病毒的分离鉴定及编码vp5外壳蛋白的基因序列分析

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草食家畜 2022年第4期 22-26页

作者：马晓菁薛晓波叶锋刘丽娅古丽扎提·塔力甫汗谷文喜易新萍新疆畜牧科学院兽医研究所/新疆畜牧科学院动物临床研究中心乌鲁木齐830002 新疆畜牧科学院畜牧业经济与信息研究所乌鲁木齐830002

对分离的新疆蓝舌病病毒(BTV)株编码vp5蛋白的S6基因序列进行比对分析,旨在了解分离毒株的基因遗传变异及进化关系,以期为新疆地区蓝舌病疫苗研究提供科学依据。本研究对绵羊全血中分离的疑似BTV分离毒株,提取RNA进行NS1-PCR扩增,克隆... 详细信息

对分离的新疆蓝舌病病毒(BTV)株编码vp5蛋白的S6基因序列进行比对分析,旨在了解分离毒株的基因遗传变异及进化关系,以期为新疆地区蓝舌病疫苗研究提供科学依据。本研究对绵羊全血中分离的疑似BTV分离毒株,提取RNA进行NS1-PCR扩增,克隆测序。应用全长cDNA扩增(full-length ampli-fication of cDNAs,FLAC)技术获得S6基因序列,NCBI Blast比对S6基因同源性,MEGA5.0软件绘制进化树,分析BTV新疆分离株与蓝舌病病毒28个血清型S6基因的序列遗传进化关系。结果表明,新疆地区疑似蓝舌病病毒分离株NS1片段与蓝舌病病毒NS1片段序列相似性为98.04%,获得1株蓝舌病病毒。BTV分离株S6基因序列仅与GenBank中BTV strain XJ1407株、BTV strainMNG2/2016株及BTV-18 strain USA2014/FL株的S6基因具有同源性,且同源性均低于90%,分别为88.11%,87.35%以及70.92%。BTV分离株S6基因序列进化关系分析结果表明,分离株与BTV-18血清型在同一进化分支,与BTV-27血清型亲缘关系最近。研究结果为新疆地区蓝舌病疫苗研制提供科学依据。

关键词：蓝舌病 vp5蛋白新疆分离株

大菱鲆呼肠孤病毒(SMReV)vp5蛋白的原核表达及分析

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南方水产科学 2018年第1期14卷 43-49页

作者：高小蝉郭明瑜霍志鹏河南科技大学动物科技学院河南洛阳471023

大菱鲆呼肠孤病毒(Scophthalmus maximus reovirus,SMRe V)属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属水生呼肠孤病毒A型(AQRV-A),其病毒粒子具有双层衣壳,外衣壳由vp5和vp7蛋白构成。从SMRe V基因组中克隆出表达外衣壳蛋白vp5的全长基因vp5(2 0... 详细信息

大菱鲆呼肠孤病毒(Scophthalmus maximus reovirus,SMRe V)属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属水生呼肠孤病毒A型(AQRV-A),其病毒粒子具有双层衣壳,外衣壳由vp5和vp7蛋白构成。从SMRe V基因组中克隆出表达外衣壳蛋白vp5的全长基因vp5(2 057 bp),构建包含该基因全长的原核表达质粒p ET32a-vp5,转化E.coli表达菌BL21(DE3)。经诱导获得的融合蛋白以包涵体的形式表达,大小约为88 k D。将纯化的融合蛋白免疫小鼠,制备出抗SMRe V vp5的多抗血清。经Western blot杂交分析显示,该抗体制备成功,且能识别SMRe V的vp5蛋白,大小约为69 k D。进一步经间接免疫荧光分析显示,vp5呈颗粒状分布在宿主CIK细胞质中。

关键词：大菱鲆呼肠孤病毒 vp5蛋白原核表达 Western blot分析外衣壳蛋白

蓝舌病病毒3型vp5蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 387-390页

作者：孙晶孙恩成刘二战孙亮徐青元杨涛吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)vp5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组vp5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化... 详细信息

为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)vp5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组vp5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化的重组vp5蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗BTV3 vp5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(3F2)。间接免疫荧光结果表明:MAb 3F2与BTV3、BTV5、BTV9、BTV16呈阳性反应;与BTV6、BTV7、BTV13、BTV21呈弱阳性反应;与其它BTV血清型均呈阴性反应。利用原核表达的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽对MAb 3F2识别的抗原表位进行鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为89PGERGIQMKIKEIEEE104。氨基酸序列比对结果显示该表位在不同地域来源的BTV3株间比较保守。该MAb的制备和鉴定为进一步研究vp5蛋白的结构和功能奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒3型 vp5蛋白单克隆抗体抗原表位

鸭肠炎病毒vp5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医杂志 2013年第1期49卷 9-12页

作者：李慧昕刘胜旺韩宗玺邵昱昊刘晓丽华育平刘娣孔宪刚东北林业大学博士后流动站黑龙江省农业科学院博士后工作站黑龙江哈尔滨150086 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

应用截短表达的鸭肠炎病毒(DEV)vp5-C蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合及筛选,获得4株稳定分泌抗vp5蛋白的杂交瘤细胞株,命名为1B5、3A1、4F9、6F6。抗体亚类鉴定表明,4株单克隆抗体均为IgG、k链。间接免疫荧光检测结果表明,4株单克隆... 详细信息

应用截短表达的鸭肠炎病毒(DEV)vp5-C蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合及筛选,获得4株稳定分泌抗vp5蛋白的杂交瘤细胞株,命名为1B5、3A1、4F9、6F6。抗体亚类鉴定表明,4株单克隆抗体均为IgG、k链。间接免疫荧光检测结果表明,4株单克隆抗体均能够与DEV感染CEF发生特异性反应,而不与CEF对照发生反应。Western blot检测,4株单克隆抗体均能够识别大小约为150kDa的蛋白,说明4株单抗隆抗体是特异性识别vp5蛋白的抗体。DEV vp5蛋白单克隆抗体的制备为进一步鉴定vp5蛋白B细胞抗原表位及vp5蛋白功能研究提供了有效工具。

关键词：鸭肠炎病毒 vp5蛋白单克隆抗体

传染性囊病病毒vp5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医杂志 2016年第12期52卷 10-13页

作者：孙晓霞蔺文成李晓齐曹红王永强郑世军中国农业大学动物医学院农业生物技术国家重点实验室北京海淀100193

传染性囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)的非结构蛋白vp5在病毒感染细胞的不同阶段发挥着抑制或诱导细胞凋亡的重要作用。为制备抗血清I型IBDV vp5蛋白的单克隆抗体,取经His-vp5蛋白免疫4次的BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓... 详细信息

传染性囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)的非结构蛋白vp5在病毒感染细胞的不同阶段发挥着抑制或诱导细胞凋亡的重要作用。为制备抗血清I型IBDV vp5蛋白的单克隆抗体,取经His-vp5蛋白免疫4次的BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,3次亚克隆后获得2株能稳定分泌vp5蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5EC7和2BE5。经间接ELISA测定,以上2株单抗的亲和力解离常数分别为1.14×10^(-10)和4.87×10^(-10),亚类分别为Ig G2a和Ig G1。通过Western Blot和间接免疫荧光试验检测,2株单抗均能识别IBDV感染DF-1细胞后产生的vp5蛋白。Western Blot试验表明,2株单抗识别的抗原表位区域为vp5 N-端的1~10 aa。该单抗为研究血清I型IBDV vp5蛋白的生物学功能及病毒致病机理奠定基础。

关键词：传染性囊病病毒 vp5蛋白原核表达单克隆抗体

传染性法氏囊病病毒vp4和vp5蛋白基因真核表达载体的构建、表达及对Ⅰ型干扰素信号通路的影响

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传染性法氏囊病病毒VP4和VP5蛋白基因真核表达载体的构建、表达及...

作者：洑景军南京农业大学

学位级别：硕士

鸡传染性法氏囊病是由鸡传染性法氏囊病病毒(Infections bursal disease virus, IBDV)引起的一种急性、高度接触性和免疫抑制性的传染病。IBDV属于双RNA病毒科双RNA病毒属,IBDV基因组有两个双股的RNA片段,分别为A片段和B片段。A片段长约... 详细信息

鸡传染性法氏囊病是由鸡传染性法氏囊病病毒(Infections bursal disease virus, IBDV)引起的一种急性、高度接触性和免疫抑制性的传染病。IBDV属于双RNA病毒科双RNA病毒属,IBDV基因组有两个双股的RNA片段,分别为A片段和B片段。A片段长约3.2 kb,包括两个部分重合的开放阅读框(open reading frame, ORF),第一个ORF编码vp5,第二个ORF编码vp2-vp4-vp3. vp4是病毒的蛋白酶,具有丝氨酸(Ser)蛋白酶的活性,因此,vp4的主要作用是对多聚前体蛋白vp2-vp4-vp3进行加工,放出vp2和vp3两个主要的结构蛋白。vp5蛋白是一种非结构蛋白,在IBDV感染的过程中能够引起细胞凋亡。Ⅰ型干扰素(Interferon, IFN)是机体细胞抵抗病毒感染的第一道防线。Ⅰ型IFN的产生和发挥效应是通过IFN产生的信号通路(IFN Production Pathway)和IFN发挥效应的信号通路(IFN Working Signal Pathway)来实现的。具体而言,病毒感染机体后,细胞能够产生Ⅰ型IFN并且很快释放到细胞外,从而使细胞建立抗病毒状态。研究发现,IBDV能够通过抑制IFN基因的转录来抑制机体的先天性免疫应答,但究竟是IBDV的哪个蛋白参与引起机体Ⅰ型IFN的下调,并未做深入研究。本研究将构建IBDV各病毒蛋白基因的真核表达载体,与报告质粒共转染Vero细胞,运用研究Ⅰ型IFN号通路的经典方法荧光素酶试验,研究IBDV的vp4和vp5蛋白对RIG-I (Retinoic acid-inducible gene I)介导的信号通路、IRF3 (Interferon regulatory factor 3, IRF3)、NF-κB(Nuclear factor kappa B)等IFN产生或者发挥效应的信号通路,尤其是JAK-STAT信号通路的影响。为研究IBDV的感染和发病机制提供重要的理论参考,并为预防和控制IBDV感染提供新的靶向分子。主要研究内容如下：试验I. IBDV病毒蛋白基因真核表达载体的构建与表达为了构建病毒蛋白基因的真核表达载体,根据IBDV CV03株各基因片段测序的基因序列和GenBar 发表的B87株的基因序列,设计一系列N端带Flag标签的引物,分别用于扩增CV03株vp1、vp2、vp3、vp4和vp5以及B87株vp4和vp5蛋白的基因,连接pMD19-T载体进行序列分析,将正确的序列连接真核表达载体pCI-neo,构建各基因的真核表达载体pCI-CV03vp1、pCI-CV03vp2、pCI-CV03vp3、pCI-CV03vp4、 pCI-CV03vp5及pCI-B87vp4和pCI-B87vp5并进行双酶切鉴定,结果符合目的基因条带大小。用Western-blott ing检测真核表达载体在Vero细胞中的表达情况,结果显示有符合目的蛋白大小的特异性条带存在,IFA检测进一步证明了所构建的真核表达载体具有较好表达能力。试验Ⅱ.vp4和vp5蛋白对Ⅰ型IFN产生和发挥作用信号通路的影响为了研究IBDV vp4和vp5蛋白对Ⅰ型IFN产生和发挥作用的信号通路Jak-stat信号通路转导的影响,构建了IBDV CV03株所有的结构蛋白和非结构蛋白基因的真核表达载体,与pIFN-β-Luc报告质粒共转染Vero细胞,转染poly(I:C)进行刺激,发现IBDV的vp4蛋白和非结构蛋白vp5能够明显降低IFN-p启动子的活性,从而明显降低IFN的产生,而vp1、vp2和vp3的作用相对较弱。同时用弱毒株B87的vp4和vp5蛋白基因的真核表达载体,与CV03的vp4和vp5作对照,与pIFN-β-Luc报告质粒共转染Vero细胞,转染pcDNA3-RIG-I刺激细胞,发现两株病毒的vp4和vp5蛋白能够明显抑制RIG-I介导IFN信号通路的活性。分别将报告质粒p4xIRF3-Luc和pNF-κB-Luc与两株病毒的vp4和vp5蛋白基因的真核表达载体共转染Vero细胞,研究发现,vp4和vp5蛋白能够明显抑制IRF3启动子的活性,同时对NF-κ.B的表达产生明显的促进作用。因此,IBDV的vp4和vp5蛋白是通过IRF3信号通路抑制机体I型IFN的表达。将构建的ISRE的报告质粒pISRE-Luc与表达病毒蛋白vp4和vp5的真核表达载体共转染,以观察vp4和vp5蛋白对Ⅰ型IFN介导的Jak-Staat信号转导通路活化程度的影响。结果表明,IBDV vp4和vp5蛋白对Jak-Stat通路的信号转导产生明显的抑制作用。

关键词：传染性法氏囊病毒 vp4蛋白 vp5蛋白 Ⅰ型IFN 信号通路

蓝舌病病毒4型vp5蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位的鉴定

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蓝舌病病毒4型VP5蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位的鉴定

作者：孙亮中国农业科学院

学位级别：硕士

蓝舌病（Bluetongue, BT）是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒（Bluetongue virus, BTV）引起的,主要感染绵羊,山羊,牛和鹿等反刍动物的非接触性传染病。该病经媒介昆虫（库蠓,伊蚊等）传播,可以引起病畜高热,过度流涎,面部和舌头肿... 详细信息

蓝舌病（Bluetongue, BT）是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒（Bluetongue virus, BTV）引起的,主要感染绵羊,山羊,牛和鹿等反刍动物的非接触性传染病。该病经媒介昆虫（库蠓,伊蚊等）传播,可以引起病畜高热,过度流涎,面部和舌头肿胀以及舌头发绀等。到目前为止,世界上已经发现26种BTV血清型。由于抗原变异以及各个血清型之间有限的免疫交叉保护力,这给BTV的免疫预防带来了极大地困难。因此,群特异性或型特异性表位疫苗的发展对BTV的防治具有重要的意义。本研究首先对GenBank中各个地理分离株BTV4的S6序列进行比对,根据非编码区的保守性序列设计反转录引物。然后从BTV4感染的BHK-21细胞中提取基因组dsRNA,对vp5蛋白的目的基因进行RT-PCR,连接至pEASY-Blunt载体,并对其测序。根据测序结果,分别设计上下游引物,对vp5目的基因的编码区进行PCR,经双酶切后连接至原核表达载体pMALTM-c4x和Bac-to-Bac真核表达载体pFastBacTMHTA,构建重组质粒pMAL-vp5和pFast-vp5.将重组质粒pFast-vp5转化至DH10Bac感受态细胞进行基因重组,提取重组杆粒BAC-vp5。然后将重组杆粒转染至Sf21昆虫细胞,拯救出能够稳定表达vp5蛋白的重组杆状病毒BACV-vp5。由于全长vp5蛋白表达量很低,所以把N端缺失41氨基酸的vp5蛋白按照上述过程分别进行原核和真核表达。用原核表达并纯化的vp5蛋白作为免疫原对4-6周龄的BALB/c小鼠进行免疫,经过三次免疫,测其抗体效价,然后在融合前三天加强免疫。取小鼠脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞融合。用杆状病毒BACV-vp5在Sf21细胞中表达的重组vp5蛋白作为检测抗原包被ELISA板,筛选阳性杂交瘤细胞。经过3次细胞克隆纯化,筛出5株能够稳定分泌针对vp5蛋白的MAbs,分别是1D3,2C3,4C11,186和3E4。Western blot鉴定表明,5株MAbs均可与BTV4感染的BHK-21细胞的vp5蛋白反应,而与阴性对照BHK-21细胞不反应;IFA鉴定表明,5株MAbs均能与BTV4感染的细胞发生特异性免疫荧光反应,与其他血清型的BTV,中山病毒（Chuzan virus）感染细胞的反应谱系不一,而与赤羽病病毒（Akabane virus）和BHK-21细胞呈阴性反应。所制备的5株MAbs共鉴定出5个不同的B细胞线性表位（E1-119-134aa, E2-257-272aa, E3-286-301aa, E4-322-337aa和E5-481-496aa）,同时利用软件对鉴定的表位进行保守性分析,结果发明,来自不同地理分布的BTV4病毒株的vp5蛋白序列之间高度保守;对BTV1-26以及同一种属其它病毒vp5蛋白序列比对显示,表位257KLKKVINALSGIDLSH272和481VYDEELQMHILRGPLH496相对比较保守,而表位119ITKEFGKELEEVYDFM134,286TLEHRFKEIPDEQLAV301和322QEILPKFKQMDEEKE337保守性较差。本实验共制备5株抗BTV4vp5蛋白的MAbs,并鉴定获得5个抗原表位,这些都为vp5蛋白结构与功能的研究以及表位疫苗与标记疫苗的研制奠定了基础,同时对BTV的鉴别诊断也具有重要意义。

关键词：蓝舌病病毒4型 vp5蛋白单克隆抗体抗原表位