检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

传染性法氏囊病病毒vp3抗原表位的鉴定

病毒学报 2007年第4期23卷 305-311页

作者：邓小芸高玉龙高宏雷祁小乐王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用肽扫描技术对4株IBDV vp3的单克隆抗体（HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E）的抗原表位进行了研究。通过Western blot和ELISA鉴定,将HRB-3F和HRB-7B的抗原表位定位于vp3 109-119aa（位于IB-DV聚合蛋白的864-874aa）,HRB-7C和HRB-10E的抗原表位定位于vp3 177-190aa（位于IBDV聚合蛋白的932-945aa）。进一步检测其反应原性及免疫原性,结果表明,这两个表位均能与抗IBDV阳性血清反应。将这两个表位短肽免疫BALB/c小鼠,其血清可以和IBDV反应,具有较好的免疫原性。与D6948、HK46和UK661等多株IBDV相应区域的同源性进行了比较,结果显示,这两个表位在多种毒株中同源性为100%。通过IBDV vp3抗原表位的研究,筛出两个新的保守线性表位并进行精确定位,对进一步分析IBDV结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。

关键词： IBDV vp3 抗原表位融合表达 Western blot ELISA 单抗

Residues of 862, 921 of vp3 are associated with virulence in infectious bursal disease virus

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Natural Science 2010年第7期2卷 718-725页

作者： Renmao Li Haiying Wang Guangming Huang Manfu Zhang 不详

Reverse genetics was used to study the effect of particular amino acids of infectious bursal disease virus (IBDV) on virulence. Using site-directed mutagenesis, altering of two amino acids in vp2 (Q253H, A284T) and vp3 (H783Q, V862M, I921V) in the segment A of a Chinese very virulent IBDV field strain Harbin-1, 4 virus mutants including H253/284, H783/862, H862/921, H921/783 were rescued. To evaluate the characteristics of the recovered viruses in vivo, we inoculated 4-week-old chickens with virus mutants and rescued Harbin- 1 (rHarbin-1), analyzed their bursae for pathological lesions 4 days postinfection. rHarbin-1 and H783/862, H253/284 caused severe bursal lesion, milder lesion for H862/921, mildest for H921/783. However, H253/284 caused the lowest mortality. The results showed that residue at position Q253, A284 of vp2 and V862, I921 of vp3 gene are involved with virulence, but there is difference between vp2 and vp3’s role in virulence. The ability of 862 and 921 to control virulence in vp3 is stronger than 253 and 284.

关键词： IBDV vp3 Mutagenesis Reverse Genetics Viru-lence

2013年苏皖地区鹅细小病毒的分离鉴定及其vp3基因序列分析

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2014年第12期34卷 1916-1921页

作者：邵红霞吕亚楠叶建强金文杰钱琨秦爱建扬州大学兽医学院/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心/江苏省动物预防医学重点实验室/禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009

鹅细小病毒(GPV)主要引起雏鹅和雏番鸭的高死亡率。本研究对2013年采集的苏皖地区疑似GPV感染的病鹅组织,通过鹅胚病毒分离以及PCR扩增,共分离鉴定出11株GPV病毒。这11株GPV病毒的鹅胚致死时间为43~159h。与NCBI中检索到的21个vp3进行... 详细信息

鹅细小病毒(GPV)主要引起雏鹅和雏番鸭的高死亡率。本研究对2013年采集的苏皖地区疑似GPV感染的病鹅组织,通过鹅胚病毒分离以及PCR扩增,共分离鉴定出11株GPV病毒。这11株GPV病毒的鹅胚致死时间为43~159h。与NCBI中检索到的21个vp3进行的序列分析发现,这些GPV的vp3氨基酸同源性为97.2%~100%。进化树分析表明,新分离的GPV vp3与分离于1982年的台湾GPV毒株82-0308最接近。与其他分离株vp3比较,这11株中有3株vp3中存在N35D、V261L、Y293H共突变现象。这些苏皖地区GPV毒株的分离、鉴定以及序列特征,对进一步探究苏皖地区GPV病毒的分子演化特征以及流行病学提供了材料。

关键词：鹅细小病毒分离与鉴定 PCR vp3 序列分析

酵母双杂交筛选与CVB3 vp3相互作用的人心脏蛋白

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国人兽共患病学报 2014年第10期30卷 1014-1019页

作者：张志勤赵颖洁夏燕华王静项国仕邹叶青黄孝天南昌大学医学院微生物学教研室南昌330006 南昌大学第二附属医院南昌330006

目的从人心脏cDNA文库中筛选与B3型柯萨奇病毒(coxsackievirus group B type 3,CVB3)结构蛋白vp3相互作用的蛋白,为进一步研究CVB3分子致病机制提供新的线索。方法构建酵母双杂交重组质粒(pGBKT7-vp3),转化至感受态酵母菌AH109,检测BD-c... 详细信息

目的从人心脏cDNA文库中筛选与B3型柯萨奇病毒(coxsackievirus group B type 3,CVB3)结构蛋白vp3相互作用的蛋白,为进一步研究CVB3分子致病机制提供新的线索。方法构建酵母双杂交重组质粒(pGBKT7-vp3),转化至感受态酵母菌AH109,检测BD-cMyc-vp3融合蛋白自激活,应用酵母双杂交筛选与CVB3vp3相互作用的人心脏蛋白。对阳性候选克隆进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析vp3与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果诱饵质粒pGBKT7-vp3构建成功,检测到BD-cMyc-vp3融合蛋白在AH109中表达,且诱饵蛋白vp3在酵母中不存在自激活,从人心脏cDNA文库中筛选到10个与CVB3vp3相互作用的蛋白:真核翻译起始因子4A2、羟酰辅酶A脱氢酶三官能蛋白转录变体3、肌钙蛋白I3型、平滑肌蛋白3、线粒体乙醛脱氢酶2等。结论本研究成功应用酵母双杂交技术筛选出与CVB3vp3相互作用的10个蛋白。为研究CVB3引起心肌炎和心肌疾病的分子致病机制提供了一些新的线索。

关键词：酵母双杂交 CVB3 vp3 蛋白相互作用

共表达鹅细小病毒vp3-gIL2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2013年第2期44卷 262-269页

作者：丁轲余祖华李旺闫文朝王臣赵战勤程相朝张春杰王天奇程安春汪铭书河南科技大学动物疫病与公共安全院士工作站洛阳471003 河南科技大学功能微生物与免疫重点实验室洛阳471003 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心雅安625014

笔者拟构建共表达鹅细小病毒(GPV)vp3和鹅白细胞介素-2(IL-2)的分泌性重组乳酸杆菌,评价口服表达融合蛋白GPV vp3-gIL2的重组乳酸杆菌的免疫效果。通过酶切将vp3基因和IL-2基因连接,并在其5′端连入乳酸杆菌的信号肽基因SP,亚克隆到乳... 详细信息

笔者拟构建共表达鹅细小病毒(GPV)vp3和鹅白细胞介素-2(IL-2)的分泌性重组乳酸杆菌,评价口服表达融合蛋白GPV vp3-gIL2的重组乳酸杆菌的免疫效果。通过酶切将vp3基因和IL-2基因连接,并在其5′端连入乳酸杆菌的信号肽基因SP,亚克隆到乳酸杆菌整合表达载体pMJ67,电转化入干酪乳杆菌***5276,SDS-PAGE和Western blot法鉴定重组菌GPVvp3-gIL2融合蛋白的表达活性。将重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅后检测血清GPV抗体、小肠黏液sIgA和脾淋巴细胞增殖情况,评价其免疫效果。结果表明,酶切和测序结果表明成功构建重组表达载体pMJ-SP-GPVvp3-gIL2,PCR证实质粒pMJ-SP-GPVvp3-gIL2成功整合到乳酸杆菌基因组;Western blot表明重组乳酸杆菌分泌表达的融合蛋白GPVvp3-gIL2能与GPV阳性血清特异性结合;淋巴细胞增殖试验表明口服重组菌后能特异地刺激脾淋巴细胞增殖,且在第4、5、6周明显高于GPV vp3组和gIL2组;重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅可以产生抗vp3蛋白抗体,且具有中和活性的抗体显著高于GPV vp3组;小肠黏液sIgA细胞生成的数量自第2周较GPV vp3组和疫苗组显著上升。动物攻毒试验结果显示GPV vp3-gIL2融合蛋白免疫组能够获得85%的保护率,表明所构建的重组乳酸杆菌口服后对GPV的攻击具有较好的免疫保护作用。本试验成功构建能稳定表达GPV vp3-IL2融合蛋白的口服乳酸杆菌工程菌,为研究其作为口服疫苗奠定了基础。

关键词：鹅细小病毒(GPV) vp3 鹅白细胞介素-2(IL-2) 乳酸杆菌共表达口服免疫融合蛋白

鹅细小病毒vp3基因重组禽痘病毒的构建和表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2003年第6期25卷 437-439页

作者：赵丽荣王君伟贾永清东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

本实验采用质脂体转染方法将禽痘病毒转移载体质粒PSY6 81vp3LacZ转染被禽痘病毒FPV_0 17感染的鸡胚成纤维细胞CEF ,通过蓝白筛选和 6轮蚀斑克隆纯化 ,获得了稳定的重组病毒。PCR鉴定 ,重组病毒基因组中含有vp3基因。Dot_ELISA实验证明 ... 详细信息

本实验采用质脂体转染方法将禽痘病毒转移载体质粒PSY6 81vp3LacZ转染被禽痘病毒FPV_0 17感染的鸡胚成纤维细胞CEF ,通过蓝白筛选和 6轮蚀斑克隆纯化 ,获得了稳定的重组病毒。PCR鉴定 ,重组病毒基因组中含有vp3基因。Dot_ELISA实验证明 ,重组病毒表达了vp3,并具有抗原性。

关键词：鹅细小病毒 vp3 重组禽痘病毒

禽脑脊髓炎病毒结构蛋白vp3基因真核表达载体的构建及其免疫

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2006年第4期26卷 367-368,372页

作者：徐建生唐波成大荣曹军吕玲周晓昕扬州大学兽医学院江苏扬州225009

根据已发表的禽脑脊髓炎病毒(AEV)1 143株结构蛋白vp 3基因的序列,设计1对特异性引物,经PCR从原核表达载体pET-vp 3中扩增出vp 3基因片段,克隆入T载体经测序证明所扩增的序列正确。从T载体切下目的片段,定向克隆入pcDNA 3.1(+)载体,转... 详细信息

根据已发表的禽脑脊髓炎病毒(AEV)1 143株结构蛋白vp 3基因的序列,设计1对特异性引物,经PCR从原核表达载体pET-vp 3中扩增出vp 3基因片段,克隆入T载体经测序证明所扩增的序列正确。从T载体切下目的片段,定向克隆入pcDNA 3.1(+)载体,转化大肠杆菌DH 5α,鉴定后大量提取质粒,转染CO S-1细胞,用间接免疫荧光检测到目的基因的表达。将重组载体对BALB/c小鼠进行免疫,结果2次免疫后就检测到特异性抗体,表明该载体在动物体内有较高的表达水平,可用于动物体内免疫,为进一步研究AEV的核酸疫苗打下了基础。

关键词：禽脑脊髓炎病毒 vp3 真核表达 DNA疫苗

塞尼卡病毒vp1与vp3蛋白原核表达及蛋白纯化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2020年第3期40卷 463-468,475页

作者：张金勇张赫孙文超肖朋朋南福龙韩继成解长占哈卓庄忻雨许汪鲁会军金宁一吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 军事科学院军事兽医研究所吉林长春130122 温州大学病毒学研究所浙江温州325035 吉林大学动物医学学院吉林长春130062

利用原核表达系统表达塞尼卡病毒(Seneca Valley virus,SVV)vp1与vp3蛋白,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化研究。扩增SVV vp1与vp3目的基因,并分别将vp1、vp3克隆至pET32a(+)载体,构建pET32a-vp1与pET32a-vp3重组质粒,将两者分别转化... 详细信息

利用原核表达系统表达塞尼卡病毒(Seneca Valley virus,SVV)vp1与vp3蛋白,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化研究。扩增SVV vp1与vp3目的基因,并分别将vp1、vp3克隆至pET32a(+)载体,构建pET32a-vp1与pET32a-vp3重组质粒,将两者分别转化至BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达。优化蛋白表达条件,利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白。RT-PCR结果显示可扩增出792bp SVV vp1与717bp vp3目的片段,将vp1与vp3目的基因成功克隆至pET32a(+)载体,分别转化至BL21(DE3),成功地表达50000pET32a-vp1重组蛋白以及48000pET32a-vp3重组蛋白;pET32a-vp1及pET32a-vp3重组蛋白均在条件为37℃、0.6mmol/L诱导剂诱导5h表达量最高,重组蛋白均以包涵体的形式进行表达并且可纯化出目的蛋白。结果表明,本试验成功地利用原核表达系统表达并纯化SVV vp1与vp3重组蛋白,为制备单克隆与多克隆抗体、检测试剂盒研发以及新型疫苗的研发奠定了基础。

关键词：塞尼卡病毒 vp1 vp3 原核表达蛋白纯化

轮状病毒vp3表达载体pEGFP-vp3的构建、表达及功能研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物学杂志 2020年第6期37卷 7-11页

作者：杜静周艳纳璐林晓晨胡晓青汪艺李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

通过构建重组表达载体pEGFP-vp3,将pEGFP-vp3转染MA104细胞,观察vp3的表达情况和表达的vp3对轮状病毒复制的作用,进一步评价构建方式是否成功。GFP荧光和Western Blot结果显示,pEGFP-vp3转染MA104细胞48 h,重组蛋白vp3表达量最高。通过R... 详细信息

通过构建重组表达载体pEGFP-vp3,将pEGFP-vp3转染MA104细胞,观察vp3的表达情况和表达的vp3对轮状病毒复制的作用,进一步评价构建方式是否成功。GFP荧光和Western Blot结果显示,pEGFP-vp3转染MA104细胞48 h,重组蛋白vp3表达量最高。通过RV拷贝数和免疫荧光检测病毒的复制情况,结果均显示重组蛋白vp3可促进病毒复制,为后续更加深入地探究vp3的功能及在轮状病毒复制中的作用提供了实验基础。

关键词：轮状病毒真核表达载体 vp3 病毒复制抗病毒反应