检索结果-南通市图书馆

作者：范亚亚河南科技学院

学位级别：硕士

非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是由非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)引起的一种感染马、驴、骡等马属动物的传染病。该病的主要特征为发热和肺水肿,病死率极高,幼龄马匹可达到95%,是严重危害世界养马业的重大... 详细信息

非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是由非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)引起的一种感染马、驴、骡等马属动物的传染病。该病的主要特征为发热和肺水肿,病死率极高,幼龄马匹可达到95%,是严重危害世界养马业的重大疫病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定必须报告的疫病,在我国被列为一类动物传染病。非洲马瘟主要分布在撒哈拉沙漠以南的非洲地区,目前在我国尚未发现此病,但与我国邻近的泰国和马来西亚在2020年的3月与8月分别暴发了非洲马瘟疫情,一旦非洲马瘟传入我国,将对我国养马业造成巨大损失。非洲马瘟病毒的vp5和vp2结构蛋白互作形成了病毒的外层衣壳,是诱导机体产生中和抗体是主要蛋白抗原,其中vp2蛋白是AHSV最主要的血清型特异性抗原。本研究首先参考Gen Bank中的AHSV-1参考毒株序列,分别合成了S2(编码vp2)和S6(编码vp5)全长基因,长度分别为3218bp和1564bp。设计表达引物,通过PCR扩增、胶回收纯化后进行酶切,将S6基因亚克隆于杆状病毒穿梭载体p Fast Bac HTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了含有S6基因的重组穿梭质粒p Fast Bac HTB-AHSV-vp5。将该质粒转化DH10Bac感受态细胞,并经蓝白斑筛选后,进行PCR鉴定,获取阳性单克隆菌株,提取纯化转座杆粒Bacmid-AHSV-vp5,转染sf9昆虫细胞,获得表达AHSV-1 vp5蛋白的重组杆状病毒,SDS-PAGE和Western-blot结果显示,重组表达的vp5蛋白大小为60k Da,并利用镍柱层析获得了纯化的重组vp5蛋白。通过生物信息学软件对AHSV-1 vp2蛋白进行抗原性分析,将其分为1-502aa和503-1056aa进行原核表达,设计表达引物,以合成的S2基因为模板,进行PCR扩增,获得S2(1-502aa)和S2(503-1056aa)两段截短基因,分别与载体p RSF-Duet1-SUMO连接,获得了重组质粒p RSF-S2-502和p RSF-S2-1056,将其分别转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,获得了大小分别为70k Da和72k Da的截短表达蛋白,通过镍柱层析分别获得了纯化的目的蛋白,并分别利用SUMO蛋白酶切掉了目的蛋白上的SUMO标签。将纯化的重组vp5、vp2(1-502aa)和vp2(503-1056aa)分别三次免疫新西兰大白兔,制备了特异性多克隆抗体,利用纯化的vp2截短蛋白vp2(1-502aa)和vp2(503-1056aa)进行了Dot-ELISA检测,结果显示制备的vp2截短蛋白特异性良好。本研究利用杆状病毒和大肠杆菌成功表达了AHSV-1 vp5和截短的vp2(1-502aa)和vp2(503-1056aa)结构蛋白并制备了相应的多克隆抗体,这为进一步研制AHSV的亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗提供了实验材料,同时也为建立基于vp2型特异性抗原的ELISA以及胶体金试纸条检测方法奠定了基础,对我国有效防控非洲马瘟的传入具有重要意义。

关键词：非洲马瘟病毒 vp5蛋白 vp2截短蛋白表达多克隆抗体

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

犬细小病毒vp2截短基因的原核表达及表达蛋白抗原性分析

引用

中国兽医学报 2012年第7期32卷 967-970,992页

作者：王净王鹏李刚史利军袁维峰王慧文穆秀明高志花河北北方学院动物科技学院河北张家口075131 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 河北北方学院农林科技学院河北张家口075131

采用PCR方法扩增了犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)2段vp2截短基因,将2段短基因片段分别克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,表达质粒命名为pET-32a-306和pET-32a-363。将pET-32a-306和pET-32a-363转化至宿主菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果显示,融合蛋白相对分子质量大小为30 000和33 000;与全长vp2蛋白相比,目的蛋白得到了高效表达,且都为可溶性表达。West-ern blotting结果表明,该蛋白融合表达并且有很好的免疫反应原性,可为CPV亚单位疫苗和免疫学诊断方法的研究提供候选抗原。

关键词：犬细小病毒 vp2截短蛋白原核表达可溶性蛋白

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：