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中国药物依赖性杂志 2018年第6期27卷 425-430页

作者：刘斌李廷利黑龙江中医药大学药学院哈尔滨150040

目的:探讨朱砂安神丸的安神助眠作用机理,实时评价朱砂安神丸引起的单胺神经递质变化效应,及其对睡眠的影响。方法:采用微透析和高效液相色谱-电化学检测器(HPLC-ECD)联用方法测定了大鼠下丘脑腹外侧视前区(vlpo)中5-HT,DA,NE的24 h内... 详细信息

目的:探讨朱砂安神丸的安神助眠作用机理,实时评价朱砂安神丸引起的单胺神经递质变化效应,及其对睡眠的影响。方法:采用微透析和高效液相色谱-电化学检测器(HPLC-ECD)联用方法测定了大鼠下丘脑腹外侧视前区(vlpo)中5-HT,DA,NE的24 h内的变化趋势。将探针插入大鼠右侧下丘脑腹外侧视前区(vlpo),大鼠在自由活动的清醒条件下,进行微透析操作,每隔2 h取样一次,24 h内连续取样。联合高效液相电化学HPLC-ECD进行样本分析,对vlpo脑区内的5-HT,DA,NE进行含量测定。结果:检测方法的线性范围为3. 125-50 pg﹒m L^(-1),日内和日间精密度均﹤3. 6,加标回收率为88. 8%-103. 8%,该方法适合于清醒动物脑内单胺类神经递质变化的测量分析。朱砂安神丸组NE,DA和5-HT在各时段均低于空白组。其中在7∶00-21∶00之间NE和5-HT含量显著低于空白组,P vlpo脑区5-HT和NE单胺类神经递质的含量,从而起到了安神助眠的作用。

关键词：朱砂安神丸 vlpo 单胺类递质微透析

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哈欠（睡意）与睡眠的相关性及四逆散冻干粉干预作用的研究

哈欠（睡意）与睡眠的相关性及四逆散冻干粉干预作用的研究

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作者：魏砚君黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的：明确哈欠(睡意)与睡眠的相关性并对四逆散冻干粉对哈欠(睡意)与睡眠相关性的干预作用进行研究。方法：1.哈欠模型的复制选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组与模型组。两组实验动物在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋... 详细信息

目的：明确哈欠(睡意)与睡眠的相关性并对四逆散冻干粉对哈欠(睡意)与睡眠相关性的干预作用进行研究。方法：1.哈欠模型的复制选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组与模型组。两组实验动物在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第三天9：00-13：00,将微量注内管插入导管内,向模型组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3μL含有50ng NMDA的林格氏溶液,空白组大鼠给予相同剂量的林格氏溶液,以0.3 μL/min的速度注射1 min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内空白组与模型组大鼠的哈欠次数,复制大鼠哈欠的模型。2.哈欠与睡眠的相关性研究2.1哈欠对大鼠脑内vlpo区神经元中Fos蛋白表达的影响选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组与模型组,灌胃给予蒸馏水(10 mL/kg)7天。两组实验动物于第5天在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第8天9：00-13：00,将微量注射内管插入导管内,向模型组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3 μL含有50 ng NMDA的林格氏溶液,空白对照组大鼠给予相同剂量的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内空白对照组与模型组大鼠的哈欠次数。记录完成后,两组大鼠立即以生理盐水及4%多聚甲醛灌流取脑,经脱水(5%、10%、20%蔗糖溶液)、固定(4%多聚甲醛)、OCT包埋后,用冷冻切片机将大鼠脑组织切片,利用免疫组化技术(SP法)分别测定空白对照组与模型组大鼠脑内vlpo区神经元中Fos蛋白的表达水平。2.2哈欠对大鼠脑内促睡眠相关因子含量的影响选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组与模型组,灌胃给予蒸馏水(10 mL/kg)7天。两组实验动物于第5天在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第8天9：00-13：00,将微量注射内管插入导管内,向模型组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3μL含有50 ng NMDA的林格氏溶液,空白对照组大鼠给予相同剂量的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内空白对照组与模型组大鼠的哈欠次数。记录完成后,立即取大鼠新鲜脑组织,冰水中研磨、匀浆,经低温离心机(3000 r/min, 10min)离心后,取上清液,利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定空白对照组与模型组大鼠脑内一氧化氮合酶(NOS)、白介素-2(IL-2)等促睡眠相关因子含量,利用硝酸还原酶法测定两组大鼠脑内一氧化氮(NO)含量。3.四逆散冻干粉对哈欠与睡眠相关性的影响3.1 四逆散冻干粉对哈欠模型大鼠哈欠次数与脑内vlpo区神经元中Fos蛋白表达的影响选取雄性SD大鼠15只,作为给药组,灌胃给予四逆散冻干粉剂(10mL/kg)7天。两组实验动物于第5天在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第8天9：00-13：00,将微量注射内管插入导管内,向给药组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3 μL含有50ng NMDA的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1 min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内给药组大鼠的哈欠次数。记录完成后,动物立即以生理盐水及4%多聚甲醛灌流取脑,经脱水(5%、10%、20%蔗糖溶液)、固定(4%多聚甲醛)、OCT包埋后,用冷冻切片机将大鼠脑组织切片,利用免疫组化技术(SP法)测定给药组大鼠脑内vlpo区神经元中Fos蛋白的表达水平。3.2 四逆散冻干粉对哈欠模型大鼠脑内促睡眠相关因子含量的影响选取雄性SD大鼠15只,作为给药组,灌胃给予四逆散冻干粉剂(10nL/kg)7天。两组实验动物于第5天在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第8天9：00-13：00,将微量注射内管插入导管内,向模型组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3 gL含有50 ng NMDA的林格氏溶液,空白对照组大鼠给予相同剂量的林格氏溶液,以03μL/min的速度注射1 min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内给药组大鼠的哈欠次数。记录完成后,动物立即以生理盐水及4%多聚甲醛灌流取脑,经脱水(5%、10%、20%蔗糖溶液)、固定(4%多聚甲醛)、OCT包埋后,用冷冻切片机将大鼠脑组织切片,利用免疫组化技术(SP法)测定给药组大鼠脑内vlpo区神经元中Fos蛋白的表达水平。结果：1.哈欠模型的复制实验结果表明,与空白组相比,模型组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1h内,哈欠次数极显著增加,

关键词：哈欠睡意四逆散 vlpo 睡眠

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电针调整超前性光暗周期转移后睡眠—觉醒紊乱的作用及其对相关中枢神经递质影响的研究

电针调整超前性光暗周期转移后睡眠—觉醒紊乱的作用及其对相关中...

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作者：陶渊成都中医药大学

学位级别：硕士

目的：从睡眠-觉醒周期的时间量和睡眠中枢及觉醒中枢平衡调节的角度探索电针对超前性光暗周期转移后节律紊乱所导致的睡眠-觉醒周期紊乱的调节作用及其机理。方法：将动物按正常光暗周期驯化后,采用每2天提前8小时开始光照的方法模拟... 详细信息

目的：从睡眠-觉醒周期的时间量和睡眠中枢及觉醒中枢平衡调节的角度探索电针对超前性光暗周期转移后节律紊乱所导致的睡眠-觉醒周期紊乱的调节作用及其机理。方法：将动物按正常光暗周期驯化后,采用每2天提前8小时开始光照的方法模拟超前性光暗周期转移,复制睡眠-觉醒紊乱大鼠模型。采用生理遥测系统分析动物睡眠、觉醒EEG各种波形,并结合免疫组织化学法检测目标神经核团相关递质及受体,观察在ZT4(11：00)电针刺激“内关”穴、“足三里”穴三天后对睡眠-觉醒周期时间量异常的调节作用及DMH内γ-氨基丁酸受体、谷氨酸受体和LHA内食欲素、vlpo内甘丙肽表达量的影响。结果：1.在造模后,模型制备动物转轮活动峰相位均向前转移,各组之间平均转移量比较差异无统计学意义;模型制备动物脑电觉醒时间增加而总睡眠时间以及慢波睡眠2期和异相睡眠时间减少,其结果与空白组比较差异具有统计学意义(Pvlpo内GAL表达量显著下降,而DMH内L-Glu受体和LHA内食欲素表达量明显升高,与空白组比较差异均有统计学意义(Pvlpo内GAL明显升高,而DMH内L-Glu受体和LHA内食欲素表达量均有显著降低,与模型组和捆绑组之间比较,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论：ZT4电针对睡眠-觉醒紊乱具有明显的整复作用,可促进已紊乱的睡眠-觉醒时间量再平衡。其作用机理可能与电针对DMH-vlpo和DMH-LHA的调节相关：在ZT4电针可以上调DMH内GABA受体和vlpo内GAL的表达,增加机体睡眠中枢的兴奋,从而维持正常的生理节律;同时电针可以下调DMH内L-Glu受体和LHA内食欲素的表达,使睡眠时间增加而觉醒时间减少,增加睡眠时间、提高睡眠质量,从而维持正常的睡眠-觉醒平衡。

关键词：电针昼夜节律睡眠-觉醒失衡脑电 DMH vlpo LHA

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吗啡诱导觉醒的机制研究

吗啡诱导觉醒的机制研究

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作者：王勤复旦大学

学位级别：硕士

目的：吗啡主要通过阿片受体发挥生物效应,广泛用于治疗疼痛,但存在许多副作用,包括睡眠紊乱。临床使用量能减少深度睡眠(stage4)和快动眼睡眠;动物急性给予低剂量吗啡产生觉醒效应。已知阿片受体有mu、kappa和delta三种亚型。腹外侧视... 详细信息

目的：吗啡主要通过阿片受体发挥生物效应,广泛用于治疗疼痛,但存在许多副作用,包括睡眠紊乱。临床使用量能减少深度睡眠(stage4)和快动眼睡眠;动物急性给予低剂量吗啡产生觉醒效应。已知阿片受体有mu、kappa和delta三种亚型。腹外侧视前区(vlpo)是促睡眠相关核团,mu和kappa受体mRNA在vlpo区有一定程度的表达,推测吗啡可能通过vlpo发挥觉醒作用。采用细胞膜片钳技术,在细胞水平上研究吗啡对vlpo神经元的作用和受体机制,运用睡眠觉醒记录解析系统,在整体水平上研究vlpo区阿片受体在吗啡调节睡眠觉醒中的作用。方法：vlpo主要存在两类神经元,即睡眠促进神经元和中间神经元。睡眠促进神经元呈三角形或多边形,电生理学上具有低阂值峰电位,可被去甲肾上腺素(noradrenaline, NA)等觉醒相关神经递质抑制;中间神经元呈梭形,不能产生低阈值峰电位,被NA等兴奋。本实验在离体脑片上,根据神经元对NA的反应,对vlpo神经元进行分类和鉴别,观察吗啡对其兴奋性的影响,并研究受体机制。利用高度自动化睡眠觉醒生物解析系统,在vlpo区手术埋植导管的自由运动大鼠上,从整体水平研究vlpo在吗啡促觉醒效应中的作用。皮下注射不同剂量的吗啡(0.3、1和3mg/kg),找出最适宜剂量后做进一步研究。vlpo局部微注射mu受体拮抗剂CTOP(0.05、0.15和0.5nmol/side)或kappa受体拮抗剂nor-BIN(0.5和1.5pmol/side),15min后皮下注射吗啡,观察这些拮抗剂是否能拮抗吗啡的作用;通过vlpo单独微注射CTOP(0.5nmol/side)和nor-BIN (1.5pmol/side),观察对生理性睡眠觉醒是否有影响。结果：离体脑片研究显示：0.1μM吗啡对vlpo睡眠促进神经元动作电位发放频率没有显著影响;1、10和100μM吗啡都可完全抑制睡眠促进神经元动作电位发放。但最大剂量吗啡(100μM)对中间神经元动作电位发放频率没有影响。在TTX存在下,10μM吗啡引起睡眠促进神经元膜电位超极化,可被mu受体拮抗剂CTOP (1μM)逆转。说明吗啡可以通过mu受体,使睡眠促进神经元超极化。在CTOP (1μM)存在下,吗啡仍能抑制睡眠促进神经元放电,这种抑制效应可被kappa受体拮抗剂(nor-BIN)阻断;离体脑片直接灌流kappa受体激动剂(U50488H)可抑制睡眠促进神经元的放电。说明吗啡也能通过kappa受体抑制促睡眠神经元。kappa受体激动剂U50488H可抑制促睡眠神经元mEPSC的频率,但不影响其幅度。说明kappa受体可突触前抑制睡眠促进神经元谷氨酸能突触传递,从而间接地抑制睡眠促进神经元。行为学研究发现：皮下注射0.3、1和3mg/kg吗啡能剂量依赖地改变动物觉醒水平。吗啡(1和3mg/kg)在给药后3小时分别增加觉醒63.5%和71.5%,0.3mg/kg对睡眠觉醒行为无显著影响。与vlpo双侧微注射生理盐水组相比,CTOP(0.5、0.15、0.05nmol/side)可剂量依赖性减少1mg/kg吗啡引起的觉醒,同时增加NREM睡眠和REM睡眠量,但or-BIN (0.5、1.5pmol/side)不能拮抗吗啡引起的觉醒作用。vlpo微注射CTOP或nor-BIN对生理性睡眠觉醒行为没有影响。小结：在离体脑片,吗啡通过mu和kappa受体抑制vlpo促睡眠神经元。在整体水平,吗啡主要通过vlpo的mu受体诱导觉醒。

关键词：吗啡 vlpo mu受体 kappa受体觉醒

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四逆散冻干粉对哈欠(睡意)与睡眠相关性的干预作用研究

四逆散冻干粉对哈欠(睡意)与睡眠相关性的干预作用研究

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中国睡眠研究会第十届全国学术年会

作者：魏砚君李廷利

研究目的:四逆散冻干粉对哈欠（睡意）与睡眠相关性的干预作用进行研究。方法:选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组及给药组,灌胃给予空白组大鼠蒸馏水（10 mL/kg）7天,灌胃给予给药组大鼠相同剂量的四逆散冻干粉剂7天。两组实验动... 详细信息

研究目的:四逆散冻干粉对哈欠（睡意）与睡眠相关性的干预作用进行研究。方法:选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组及给药组,灌胃给予空白组大鼠蒸馏水（10 mL/kg）7天,灌胃给予给药组大鼠相同剂量的四逆散冻干粉剂7天。两组实验动物于第5天在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第3天9:00-13:00,将微量注射内管插入导管内,向给药组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3μL含有50ng NMDA的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1min,留针1min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内空白对照组及给药组大鼠的哈欠次数。记录完成后,动物立即以生理盐水及4%多聚甲醛灌流取脑,经脱水（5%、10%、20%蔗糖溶液）、固定（4%多聚甲醛）、OCT包埋后,用冷冻切片机将大鼠脑组织切片,利用免疫组化技术（SP法）测定空白组大鼠和给药组大鼠脑内vlpo区神经元中Fos蛋白的表达水平。结果:1.实验结果表明,与空白组相比,给药组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1h内,哈欠次数显著增加,二者之间存在着显著的差异（P＜0.05）;2.实验结果表明,与空白组相比,给药组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1h,vlpo区神经元中Fos蛋白表达量显著增加,二者之间存在着显著的差异（P＜0.05）。结论:四逆散冻干粉能显著地增加哈欠（睡意）的发生,并能提高睡眠中枢（vlpo）区域神经元的活性。

关键词：哈欠睡意四逆散 vlpo 睡眠

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全身麻醉机制与VLP0睡眠通路

全身麻醉机制与VLP0睡眠通路

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2014年贵州省医学会麻醉学分会学术年会暨贵州省第五次...

作者：袁杰喻田贵州省麻醉与器官保护基础研究重点实验室遵义医学院麻醉学系

背景全身麻醉与自然睡眠之间存在一定的相似性,但睡眠-觉醒核团是否参与全身麻醉药物致意识消失的过程目前仍未有定论。目的综述睡眠-觉醒通路中主要的促睡眠核团vlpo(下丘脑腹外侧视前核)及其相关通路与全身麻醉机制之间的关系。内容... 详细信息

背景全身麻醉与自然睡眠之间存在一定的相似性,但睡眠-觉醒核团是否参与全身麻醉药物致意识消失的过程目前仍未有定论。目的综述睡眠-觉醒通路中主要的促睡眠核团vlpo(下丘脑腹外侧视前核)及其相关通路与全身麻醉机制之间的关系。内容全身麻醉药可能会通过兴奋主要的促睡眠核团和抑制关键的促觉醒核团产生镇静催眠效应。趋向探讨全身麻醉药物作用于睡眠核团及其相关通路的生理机制,为全身麻醉机制研究提供一新的思路。

关键词：全麻机制睡眠 vlpo GABA

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