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鹅vip、vipR基因的克隆及其在不同繁殖阶段的组织表达研究

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鹅VIP、VIPR基因的克隆及其在不同繁殖阶段的组织表达研究

作者：刘毅四川农业大学

学位级别：硕士

活性血管肠肽（Vasoactive Intestinal Peptide, vip）是家禽催乳素（Prolactin, PRL）的释放因子,与存在于细胞膜上活性血管肠肽受体（Vasoactive Intestinal Peptide Receptor,vipR）结合发挥其功能。本实验首次克隆出浙东白鹅vip基... 详细信息

活性血管肠肽（Vasoactive Intestinal Peptide, vip）是家禽催乳素（Prolactin, PRL）的释放因子,与存在于细胞膜上活性血管肠肽受体（Vasoactive Intestinal Peptide Receptor,vipR）结合发挥其功能。本实验首次克隆出浙东白鹅VIP基因编码区（CDS）全部序列和vipR基因编码区（CDS）部分序列;采用实时荧光PCR技术研究vip和vipR基因在鹅不同繁殖周期各个组织中表达规律;并测定鹅繁殖周期血浆中PRL浓度。鹅vip与vipR基因核苷酸序列与鸡vip和vipR基因核苷酸序列相似率分别为95%和94%。在整个繁殖周期,vip和vipR基因mRNA在鹅各个组织中都有表达,其中,VIP基因mRNA在肠、下丘脑和胰中表达量比其他组织高（P＜0.01）,而vipR基因mRNA在肺、垂体、肠和胰中表达量比其他组织高（P＜0.05）。在下丘脑中,VIP基因mRNA在就巢期表达量最高（P＜0.01）,休产期表达量最低（P＜0.01）,与之相反,在其他组织中,VIP基因mRNA均在产蛋期和光刺激阶段表达量最高（P＜0.01）,休产期表达量最低（P＜0.01）。在垂体和下丘脑中,vipR基因mRNA在就巢期表达量最高（P＜0.01）,休产期表达量最低（P＜0.01）。在输卵管中,vipR基因mRNA在就巢期和光崧弛阶段表达量最高（P＜0.01）,其他繁殖阶段表达量没有明显的变化（P＞0.05）。在其他组织中,vipR基因mRNA在休产期表达量明显较低（P＜0.01）,其他繁殖周期没有明显变化。值得注意的是,vipR基因mRNA在肺中的表达量远远高于其他组织（P＜0.01）。鹅血浆中PRL浓度在不同的繁殖阶段的更替而改变,就巢期鹅血浆中PRL浓度最高（33.52±6.55 ng／ml）,明显高于其他繁殖阶段（P＜0.01）,休产期的鹅血浆中PRL浓度最低（8.03±2.36 ng／ml）（P＜0.01）。由上可知,鹅下丘脑VIP基因和垂体vipR基因mRNA的表达量与PRL分泌密切相关,vip在鹅繁殖周期的调节中起重要作用。

关键词：鹅 VIP基因 vipR基因克隆组织表达繁殖周期

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‘兴国灰鹅’均衡生产VIP基因的表达规律

中国农学通报 2016年第5期32卷 1-4页

作者：武艳平刘林秀康昭风黄江南季华员谢明贵韦启鹏陈受经谢金防江西省农业科学院畜牧兽医研究所南昌330200 江西省兴国县兴国灰鹅生产办公室江西兴国342400

为了解‘兴国灰鹅’在不同繁殖季节VIP基因在下丘脑、垂体、输卵管和卵巢中的表达情况,本试验抽取不同光照长度下‘兴国灰鹅’下丘脑、垂体、输卵管和卵巢的组织样本,进行荧光定量PCR。对照组在整个试验阶段自然产蛋和休产,试验组通过... 详细信息

为了解‘兴国灰鹅’在不同繁殖季节VIP基因在下丘脑、垂体、输卵管和卵巢中的表达情况,本试验抽取不同光照长度下‘兴国灰鹅’下丘脑、垂体、输卵管和卵巢的组织样本,进行荧光定量PCR。对照组在整个试验阶段自然产蛋和休产,试验组通过人工控制光照在整个试验阶段接受短或长光照处理,使其与对照组在相反的季节开产和休产。利用荧光定量PCR检测试验组和对照组产蛋期和休产期的vip表达情况。结果表明:试验组休产时垂体vip的表达明显高于开产的对照组(Pvip的表达明显低于休产的对照组(Pvip的表达在休产期高于产蛋期。

关键词：兴国灰鹅 VIP基因表达规律

不同地区苏云金芽胞杆菌vip3Aa基因的鉴定及杀虫活性分析

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不同地区苏云金芽胞杆菌vip3Aa基因的鉴定及杀虫活性分析

作者：李帅东北农业大学

学位级别：硕士

全球农业的健康发展一直受到农业害虫的制约,农业害虫的防控和治理,多年来主要依靠化学农药。化学农药大剂量、大范围的施用对生态系统造成非常严重的破坏,对全球农业的可持续发展构成威胁。采用生防的手段可以有效的解决这些难题,苏云... 详细信息

全球农业的健康发展一直受到农业害虫的制约,农业害虫的防控和治理,多年来主要依靠化学农药。化学农药大剂量、大范围的施用对生态系统造成非常严重的破坏,对全球农业的可持续发展构成威胁。采用生防的手段可以有效的解决这些难题,苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）杀虫活性高,而且对人、畜等非靶生物无害,现已成为使用最为普遍的环境友好型杀虫微生物。然而,长期施用Bt制剂使部分敏感的农业害虫产生了抗性,目前应用的Bt菌株存在杀虫谱窄和毒力低等缺点,因此我们要筛选新型高毒力的Bt基因来满足生防的需求,扩大Bt的杀虫谱,丰富转基因资源。本研究首次比较了中国不同气候类型（热带-海南省,亚热带-广西壮族自治区,温带-黑龙江省）的Bt菌株和VIP基因的分布情况。从海南841份土样中分离出156株Bt菌（18.55%）,从广西1420份土样中分离出356株Bt菌（25.07%）,从黑龙江1010份土样中分离出167株Bt菌（16.53%）;从海南的156株Bt菌鉴定出22个vip3基因（14.10%）,广西的356株Bt菌鉴定出2个vip3基因（5.62%）,黑龙江的156株Bt菌没有鉴定出vip3基因（0%）。本实验利用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction–Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP）方法成功从海南的SL3和SL4 Bt菌株分别鉴定、克隆出vip3Aa的全长基因,并获得登录号KP309808和KT792883,经Bt国际命名委员会正式命名为vip3Aa57和vip3Aa62。将这两个基因插入到表达载体pET-21b,转化菌株Rosetta（DE3）,在低温条件下均表达88 k Da大小的蛋白。将蛋白进行生物活性测定,结果显示vip3Aa57蛋白对甜菜蛾（Spodoptera exigua）有体重抑制的作用,对棉铃虫（Heliothis armigera）无明显的生物活性;vip3Aa62蛋白对甜菜蛾具有较好的杀虫活性,LC50为5.124 ng/mg;对棉铃虫活性较低,LC50为870.1 ng/mg。石蜡切片结果显示vip3Aa57蛋白使甜菜蛾中肠细胞的形态发生变化。通过这些研究结果表明Bt菌株和VIP基因的分布有地域性差异,在温度较高的热带、亚热带地区有比较丰富的Bt菌株和VIP基因资源。本研究将有利于充分利用土壤中的Bt菌株,分离具有自主知识产权和重要应用价值的新型vip抗虫基因,这将会为研究新型杀虫蛋白,延缓害虫抗性问题提供有利帮助。

关键词：苏云金芽胞杆菌 VIP基因鉴定气候类型生物活性测定

荔波瑶山鸡血管活性肠肽及其受体基因变异与繁殖性状的关联性

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西南农业学报 2021年第6期34卷 1335-1341页

作者：伍革民朱丽莉韩雪唐继高贵州省农业科学院畜牧兽医研究所贵州贵阳550005

【目的】探明血管活性肠肽(vip)及其受体vipR-1和vipR-2基因与荔波瑶山鸡繁殖性状的关联性,找出可作为荔波瑶山鸡繁殖性状的重要标记。【方法】采用PCR测序法对VIP基因编码区及部分内含子区、vipR-1和vipR-2基因部分序列区域进行变异检... 详细信息

【目的】探明血管活性肠肽(vip)及其受体vipR-1和vipR-2基因与荔波瑶山鸡繁殖性状的关联性,找出可作为荔波瑶山鸡繁殖性状的重要标记。【方法】采用PCR测序法对VIP基因编码区及部分内含子区、vipR-1和vipR-2基因部分序列区域进行变异检测,并与繁殖性状进行关联分析。【结果】在瑶山鸡群体中,VIP基因检测到1个内含子变异位点,vipR-1基因检测到1个编码区变异位点,1个插入/缺失变异以及14个内含子区域SNP位点,vipR-2基因检测到1个编码区变异位点以及2个内含子变异位点。vipR-1基因的6个多态位点(基因位置39 109、39 114、39 227、68 817、69 061、97 123)和vipR-2基因的3个多态位点(基因位置3739、3184、49 246)与300日龄产蛋量、就巢性状呈显著或极显著相关(P<0.05或P<0.01)。【结论】以上多态位点可作为荔波瑶山鸡繁殖性状有显著或极显著影响指标的辅助选择标记。

关键词： VIP基因 vipR基因遗传变异荔波瑶山鸡繁殖性状

如皋黄鸡产蛋性能和蛋品质性状的遗传参数估计及分子标记筛选

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如皋黄鸡产蛋性能和蛋品质性状的遗传参数估计及分子标记筛选

作者：洪军扬州大学

学位级别：硕士

产蛋性能及蛋品质性状是重要的生产性状,直接影响养鸡业的生产效率和经济利润。如何提高鸡的产蛋量和改善蛋品质,成为当前重要的研究课题。本研究以如皋黄鸡选育产蛋性能的第四和第五两个世代群体为试验材料,比较两个世代群体的孵化性... 详细信息

产蛋性能及蛋品质性状是重要的生产性状,直接影响养鸡业的生产效率和经济利润。如何提高鸡的产蛋量和改善蛋品质,成为当前重要的研究课题。本研究以如皋黄鸡选育产蛋性能的第四和第五两个世代群体为试验材料,比较两个世代群体的孵化性能、产蛋性能和蛋品质,并估计产蛋性能和蛋品质性状的遗传参数。以鸡血管活性肠肽（vip）、血管活性肠肽受体-1（vipR-1）、促卵泡激素受体（FSHR）、雌激素受体a（ESRa）等四个基因作为产蛋性能及蛋品质性状的侯选基因,采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术筛选SNP位点,运用SHEsis在线软件进行位点间的连锁不平衡分析,采用PHASE V2.1软件对各个基因构建单倍型并与群体的产蛋性能和蛋品质性状进行关联性分析,主要结果如下： 1.种蛋孵化效果检测结果表明,第五世代如皋黄鸡的受精率、入孵蛋孵化率、受精蛋健雏孵化率、入孵蛋健雏孵化率分别比第四世代高1.49%、2.71%、2.24%、0.85%;而死胚率较第四世代降低了2.97%。 2.两个世代产蛋性能和蛋品质比较,第五世代个体的开产体重、40周龄体重分别比第四世代低6.31%（P＜0.05）、7.74%（P＜0.05）,而40周龄总产蛋数比第四世代高3.48%（P＜0.01）;第四世代的蛋壳强度、蛋黄色泽和哈氏单位分别比第五世代高16.06%（P＜0.01）、3.25%（P＜0.05）、3.62%（P＜0.01）,而第五世代的蛋形指数和蛋壳颜色分别比第四世代高2.13（P＜0.05）、5.89（P＜0.01）。 3.第四世代鸡群的开产日龄为高遗传力性状（0.470）,开产体重、开产蛋重和40周龄体重均为中等遗传力（0.237～0.307）;40周龄总产蛋数为低遗传力性状（0.177）;而第五世代的开产日龄、开产体重、40周龄体重属于中等遗传力性状（0.224-0.329）;开产蛋重和40周龄总产蛋数均为低遗传力0.167-0.150)。综合两个世代来看,开产日龄的遗传力较高,开产体重和40周龄体重次之,40周龄总产蛋数最低。 4.开产日龄、开产体重、开产蛋重和40周龄体重之间呈遗传正相关（0.003-0.842）,40周龄总产蛋数与开产日龄、开产体重、开产蛋重均呈遗传负相关（-0.510--0.188）。蛋重与蛋形指数、蛋壳强度,蛋形指数与蛋壳颜色、蛋壳厚度、蛋壳重,蛋壳颜色与蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋壳重之间的遗传相关为负值,蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋壳重之间均为正相关。 5.4个基因共检测出14个SNP,全部位于非编码区。其中,vipR-1基因C10593T和C42913T,FSHR基因C29329A、C30582G和G32281A,VIP基因C800T等6个位点偏离Hardy-Weinberg平衡。 6.FSHR基因3个位点间处于连锁平衡状态;vipR-1基因4个位点构成9种单倍型,13种基因型;ESRa基因3个位点构成3种单倍型,5种基因型;VIP基因4个位点构成4种单倍型,7种基因型。 7.各基因单倍型与如皋黄鸡产蛋性能和蛋品质的关联分析表明,对于vipR-1基因而言,A5A5和A5A6型组合为选育产蛋性能的优势单倍型,A5A6和A8A9型为选育蛋品质的优势单倍型;ESRa基因,C2C2型可作为选育如皋黄鸡产蛋性能和蛋品质的最优单倍型;VIP基因,D1D4和D2D4型可作为选育产蛋性能和蛋品质的优势单倍型。

关键词：如皋黄鸡 VIP基因 vipR-1基因 FSHR基因 ESRa基因产蛋性能蛋品质单倍型

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新型杀虫蛋白vips研究进展

微生物学杂志 2002年第3期22卷 35-37页

作者：郑大胜闫建平罗绍彬袁志明中国科学院武汉病毒研究所湖北武昌430071

简述了芽孢杆菌属 (Bacillus)中的新型活性杀虫蛋白营养期杀虫蛋白vips及其编码基因的发现、特性、作用模式及机制等研究进展 ,并对其杀虫活性和安全因素作了初步评估和预示。

关键词：苏云金芽孢杆菌蜡状芽孢杆菌营养期杀虫蛋白 VIP基因

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营养期杀虫蛋白vips研究进展

生命科学仪器 2007年第11期5卷 3-5页

作者：冀晓娜郝君莲杜志军孟永红北京市朝阳区红领巾公园北京100025 邯郸市邯山区北张庄学区河边学校河北省邯郸市056001 河北省邯郸县农牧局河北省邯郸市056001 石家庄市动物园河北省石家庄市050200

营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal proteins,vips)是苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在对数生长中期分泌的一类新型杀虫毒蛋白。本文简述了芽孢杆菌属(Bacillus)中的新型活性杀虫蛋白营养期杀虫蛋白vips及其编码基因的发... 详细信息

营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal proteins,vips)是苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在对数生长中期分泌的一类新型杀虫毒蛋白。本文简述了芽孢杆菌属(Bacillus)中的新型活性杀虫蛋白营养期杀虫蛋白vips及其编码基因的发现、特性、作用模式等研究进展。

关键词：苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白 VIP基因