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小麦SBEⅡa、SSⅡa基因片段的克隆及vigs重组载体的构建

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新疆农业科学 2013年第11期50卷 1961-1966页

作者：李淼淼南富波刘伟李卫华石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室新疆石河子832003

【目的】克隆小麦SBEⅡa、SSⅡa基因部分序列并构建二者的vigs重组载体,为在小麦上利用vigs技术研究SBEⅡa、SSⅡa基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础。【方法】根据GenBank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)、SSⅡa(AF155217.2)基因序列... 详细信息

【目的】克隆小麦SBEⅡa、SSⅡa基因部分序列并构建二者的vigs重组载体,为在小麦上利用vigs技术研究SBEⅡa、SSⅡa基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础。【方法】根据GenBank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)、SSⅡa(AF155217.2)基因序列分别设计特异引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡa、SSⅡa基因的特异片段。然后以BSMV:γ-PDS为原载体,通过酶切连接用SBEⅡa、SSⅡa基因片段分别将原载体中的PDS基因进行替换,从而构建BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体。【结果】克隆的SBEⅡa和SSⅡa基因片段长分别是178 bp和171 bp。序列分析表明:SBEⅡa基因片段与小麦SBEⅡa(AF286319.1)序列同源性为100%;、SSⅡa基因片段与SSⅡa(AF155217.2)序列同源性也为100%;酶切鉴定结果表明成功构建BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体。【结论】构建的BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体将为下一步利用vigs技术在小麦上研究SBEⅡa、SSⅡa基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础。

关键词：小麦 SBEⅡa SSⅡa vigs载体

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病毒诱导基因沉默技术在豆科植物中的应用

中国油料作物学报 2022年第3期44卷 497-502页

作者：魏正欣孙虎向艳涛蒋浩中沙爱华刘良军长江大学农学院/主要粮食作物产业化湖北省协同创新中心/湿地生态与农业利用教育部工程研究中心湖北荆州434025 湖北省农业科学院粮食作物研究所/粮食作物种质创新与遗传改良湖北省重点实验室湖北武汉430064

病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,vigs)是一种基于转录后基因沉默的反向遗传学研究方法,用于快速鉴定基因功能。该技术具有实验周期短、操作简便、低成本、高效率、获得表型快以及高通量等优点,被广泛地应用于植物基因... 详细信息

病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,vigs)是一种基于转录后基因沉默的反向遗传学研究方法,用于快速鉴定基因功能。该技术具有实验周期短、操作简便、低成本、高效率、获得表型快以及高通量等优点,被广泛地应用于植物基因功能研究。豆科植物作为人类食品中淀粉、蛋白质、油和蔬菜的重要来源之一,具有重要的经济价值。本文从vigs的技术原理、vigs载体的开发和改良、vigs在豆科植物中的应用等方面进行了综述,分析了vigs技术在豆科植物中存在的问题,并展望了其应用前景。

关键词：豆科植物病毒诱导基因沉默 vigs载体

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病毒诱导的基因沉默在茄科植物基因功能研究中的应用进展

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河南农业科学 2018年第7期47卷 8-19页

作者：曲玲李彦龙安巍焦恩宁赵建华刘兰英秦垦曹有龙宁夏农林科学院枸杞工程技术研究所/国家枸杞工程技术研究中心宁夏银川750002

茄科植物中有许多重要的经济与药用植物,随着茄科植物基因组测序工作的陆续完成,急需对基因组中大量功能未知基因的生物学功能进行鉴定。病毒诱导的基因沉默(vigs)是近20 a发展起来的一种研究植物基因功能的高效反向遗传学技术,在总结V... 详细信息

茄科植物中有许多重要的经济与药用植物,随着茄科植物基因组测序工作的陆续完成,急需对基因组中大量功能未知基因的生物学功能进行鉴定。病毒诱导的基因沉默(vigs)是近20 a发展起来的一种研究植物基因功能的高效反向遗传学技术,在总结vigs作用原理、vigs载体开发和改良研究现状的基础上,就近年来vigs在茄科植物品质性状、生长发育、植物-病原真菌互作以及代谢产物生物合成和调控相关重要基因功能分析等方面的国内外研究进展进行了综述,并讨论了vigs技术应用于茄科植物存在的问题和前景展望。

关键词：茄科植物病毒诱导的基因沉默基因功能解析 vigs载体植物-病原真菌互作代谢产物生物合成与调控

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烟草属（Nicotiana）抗病基因vigs沉默系统的构建

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烟草属（Nicotiana）抗病基因VIGS沉默系统的构建

作者：毛兰兰华中农业大学

学位级别：硕士

植物中已经克隆出来的抗病基因大多数包含NBS-LRR结构域,这类基因经常以簇的形式存在于基因组中,其中有功能的抗病基因会与其相应病原体的无毒基因作用,发生程序性细胞死亡(即过敏反应),从而限制病原物的扩散来保护植株的其它部位不受... 详细信息

植物中已经克隆出来的抗病基因大多数包含NBS-LRR结构域,这类基因经常以簇的形式存在于基因组中,其中有功能的抗病基因会与其相应病原体的无毒基因作用,发生程序性细胞死亡(即过敏反应),从而限制病原物的扩散来保护植株的其它部位不受侵染。本实验以烟草野生种为对象,研究接种苗龄、农杆菌浓度、乙酰丁香酮浓度和培养温度等四个方面对11种烟草野生种vigs(virus induced gene silencing, vigs)沉默效率的影响,优化最合适的vigs沉默体系：研究表明,在烟草苗龄6叶(出苗后生长20～25天),侵染的农杆菌OD600值0.6,AS浓度为400mmol/L,培养环境为22℃,16h黑暗;18℃,8h光照条件下,可以获得vigs沉默的最佳效果。此外,本研究在该条件下对另外14种烟草野生物种vigs沉默效率也进行了研究。同时根据茄科中已知的抗病基因的序列设计引物,在Nicotiana alata中扩增,进而构建pTRV系统病毒诱导的基因沉默(vigs)载体。本研究共构建了113个载体,覆盖了茄科中所有已知的抗病基因家族。利用已知功能的人7基因,对该系统进行验证,结果表明其中的N基因家族沉默载体有效地沉默了N. benthamiana中的对烟草花叶病毒(TMV)抗性。该套vigs载体有望用于分析烟草属中NBS-LRR编码的各种抗性,并快速克隆抗病基因,从而为烟草、番茄、马铃薯等作物提供新的抗性资源。

关键词：过敏反应 TRV 抗病基因克隆 vigs载体

病毒诱导基因沉默(vigs)在禾本科植物中的研究进展

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植物学研究 2014年第3期3卷 91-104页

作者：田焕焕覃瑞刘虹刘清云李刚中南民族大学生命科学学院南方少数民族地区生物资源保护与综合利用工程中心武汉湖北浠水县农业局黄冈

病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing, vigs)是近几年新发展起来的一种反向遗传学技术。它是通过将含有目的基因的重组病毒载体导入到宿主植物中,抑制植物内源基因表达,使其表现出目标基因功能丧失或表达水平下降的表型,属... 详细信息

病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing, vigs)是近几年新发展起来的一种反向遗传学技术。它是通过将含有目的基因的重组病毒载体导入到宿主植物中,抑制植物内源基因表达,使其表现出目标基因功能丧失或表达水平下降的表型,属于转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS)。与传统的技术相比,vigs技术具有操作简便、无需构建转基因植株、能快速获得沉默表型等明显优点,现已被广泛应用于植物功能基因组学的研究。本文对vigs的作用机制、操作过程、影响沉默效率的因素、应用领域各个方面进行阐述,其中会对禾本科植物中的可用载体、研究进展、前景展望进行重点介绍。

关键词：病毒诱导基因沉默(vigs) vigs载体沉默效率禾本科