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大肠癌中vhlmRNA,FIH-1mRNA的表达对HIF-1α蛋白水平的影响

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第四军医大学学报 2006年第23期27卷 2183-2186页

作者：杨晓军高鹏车团结黄海云兰州大学临床医学院甘肃省人民医院普外科甘肃兰州730000

目的:检测大肠癌中vhlmRNA,FIH-1mRNA以及HIF-1α蛋白的表达,探讨vhl,FIH-1对HIF-1α蛋白水平的影响.方法:采用RT-PCR技术检测42例大肠癌组织和相应的癌旁正常粘膜组织中vhlmRNA,FIH-1mRNA的表达,采用免疫组化SP法检测HIF-1α蛋白在大... 详细信息

目的:检测大肠癌中vhlmRNA,FIH-1mRNA以及HIF-1α蛋白的表达,探讨vhl,FIH-1对HIF-1α蛋白水平的影响.方法:采用RT-PCR技术检测42例大肠癌组织和相应的癌旁正常粘膜组织中vhlmRNA,FIH-1mRNA的表达,采用免疫组化SP法检测HIF-1α蛋白在大肠癌和癌旁正常组织中的表达,Spearman相关关系检验分析其之间的相关性.结果:大肠癌组织vhlmRNA和FIH-1mRNA的表达水平显著低于癌旁正常组织(t=-10.14,P=0.00;t=-15.26,P=0.00);二者的表达水平随Dukes分期而降低,DukesA+B期显著高于DukesC+D期(t=2.84,P=0.01;t=-5.13,P=0.00);它们的表达水平与与肿瘤部位、性别无关.大肠癌组织HIF-1α蛋白表达阳性率为69.1%(29/42),在癌旁正常组织中均为阴性;DukesC+D期(80.0%,24/30)显著高于DukesA+B期(41.7%,5/12),(t=5.89,P=0.02);Spearman相关分析显示,HIF-1α表达水平与vhlmRNA,FIH-1mRNA的表达水平显著负相关(rs=-0.97,P=0.01,rs=-0.66,P=0.01).结论:HIF-1α的过表达在大肠癌的发生发展、浸润转移过程中起着重要作用,大肠癌组织中vhl以及FIH-1的水平下降与HIF-1α蛋白水平的升高之间存在密切相关.

关键词：结直肠肿瘤低氧诱导因子1α vhl基因缺氧诱导因子抑制因子1

von Hippel-Lindau综合征三家族基因检测及临床发病特点分析

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von Hippel-Lindau综合征三家族基因检测及临床发病特点分析

作者：吴鑫尧安徽医科大学

学位级别：硕士

目的通过基因测序明确三个von Hippel-Lindau综合征家族基因突变位点,筛查出家族内基因突变携带者进行临床筛查,探讨家族基因突变及临床发病特点,并对家族内基因突变阳性者进行规范随访治疗指导。方法通过流行病学调查,共3例先证者临床... 详细信息

目的通过基因测序明确三个von Hippel-Lindau综合征家族基因突变位点,筛查出家族内基因突变携带者进行临床筛查,探讨家族基因突变及临床发病特点,并对家族内基因突变阳性者进行规范随访治疗指导。方法通过流行病学调查,共3例先证者临床诊断为von Hippel-Lindau综合征。抽取先证者及家族自愿者外周血,应用聚合酶链反应(PCR)体外扩增得到vhl基因片段,并进行测序;筛查中家族内具有vhl基因突变的携带者临床指导下进行中枢神经系统、血液系统检查、胰腺、肾脏及眼底等全身多系统行临床筛查;探讨三个vhl综合征家族基因突变及临床发病特点,并予以家族健康指导。结果三个家族共31例成员自愿加入此项研究,行vhl基因检测。3例先证者均发现vhl基因发生突变,基因突变方式分别为：家族1表现为外显子1第330位碱基A突变为碱基C,导致vhl基因编码的第110位组胺酸变为脯氨酸;家族2是外显子3第488位碱基C缺失,导致vhl编码的162位以后全部氨基酸紊乱;家族3是外显子1第233位碱基A突变为碱基G,导致vhl基因编码的第98位天冬酰胺酸变为丝氨酸。通过基因检测,家族中其余28名自愿者中,有10例存在突变。家族1中5例成员突变阳性,其中4例已发病,1例(1Ⅲ3)无临床症状下确定为基因突变携带者,临床检查,该携带者发病表现为双肾多发囊肿,胰腺多发囊肿,随访中;家族3中5例基因突变阳性,2例已发病,3例(3Ⅲ1、3Ⅲ4、3IV3)为基因突变携带者,3Ⅲ1表现为胰腺多发囊肿,建议定期随访检查;3Ⅲ4表现为视网膜血管母细胞瘤、胰腺多发囊肿,在我们指导下接受视网膜血管母细胞瘤激光治疗,取得良好手术效果。3IV3由于年龄较小,临床检查未见明显异常,继续接受规范化随访。3个家族均呈连续2或3代发病,男女均发病,符合常染色体显性遗传疾病规律。3个家族共15例vhl综合征患者,14例已发病,患者首次发病年龄为19～58(30.2±10.7)岁,全身多系统发病。3个家族共4例患者死亡,死亡率26.7%,平均死亡年龄37岁,主要死亡原因为脑血管母细胞瘤及肾透明细胞癌。结论*** Hippel-Lindau综合征发病年龄小,可全身多系统发病,隐匿发病,临床易漏诊,治疗后易复发,总体治疗不佳,患者生存时间短。***基因检测是诊断该疾病的金标准,尤其对早期诊断有关键作用,可筛查出无临床症状的家族内基因携带者,消除家族其余成员心理上的恐慌。3.临床上对基因筛查阳性患者进行全面的临床检查继而追踪随访予以指导治疗,患者有望得到最佳的治疗时机。

关键词： vhl综合征 vhl基因基因检测

肾透明细胞癌von Hippel-Lindau(vhl)蛋白调控HIF-1αmRNA表达的分子机制

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肾透明细胞癌von Hippel-Lindau(VHL)蛋白调控HIF-1αmRNA表达的...

作者：王仁勇南昌大学

学位级别：硕士

背景：已有的研究认为vhl基因在原发性散发性肾透明细胞癌(RCC)发病中起重要作用,但肿瘤形成机理仍有较多争论。vhl存在于细胞浆，与其他一些蛋白形成E3连接酶复合物，泛素化降解其他蛋白。缺氧诱导因子（HIF)是近年来研究较为热门的... 详细信息

背景：已有的研究认为vhl基因在原发性散发性肾透明细胞癌(RCC)发病中起重要作用,但肿瘤形成机理仍有较多争论。vhl存在于细胞浆，与其他一些蛋白形成E3连接酶复合物，泛素化降解其他蛋白。缺氧诱导因子（HIF)是近年来研究较为热门的与肿瘤形成有关的因子。在常氧状态下,HIFα的脯氨酸羟基化,与vhl蛋白结合,于是触发泛素-蛋白酶体[ubiquitin-proteasome]蛋白水解途径，使其迅速降解[15]。前期研究发现，在肾癌细胞株及临床肾透明细胞癌中，vhl蛋白促进HIF-1αmRNA的表达。进一步的研究发现，vhl蛋白对HIF-1α基因转录具有促进作用，但其分子机制不明，vhl蛋白对HIF-1αmRNA表达的影响未见文献报导。前期研究结果提示，vhl蛋白不仅可以从蛋白水平调控HIF1α的表达，而且可以从分子水平上调控HIF-1αmRNA的表达。目的：基于上述理论背景，本研究目的在于初步求证肾细胞癌中vhl蛋白和HIF-1α基因中的转录调控区域有关联，并能促进HIF-1αmRNA表达，进一步明确其分子机制及意义。方法： Western blot检测vhl蛋白表达量显示RCC4vhl(-)细胞株vhl蛋白表达量为零，差异具有统计学意义(P＜0.05).说明此细胞株vhl基因敲除成功。通过实时荧光定量PCR检测, vhl阴性肾癌细胞株与vhl阳性肾癌细胞株存在HIF-1αmRNA的表达差异，vhl阳性肾癌细胞株(RCC4T3-14) HIF-1αmRNA的表达明显高于阴性肾癌细胞株(RCC4)，差异具有统计学意义(P＜0.05)。该实验至少重复3次。结果：通过Western blot检测vhl蛋白表达量及差异确定RCC4vhl(-)细胞株vhl蛋白表达量为零，差异具有统计学意义(P＜0.05).说明此细胞株vhl基因敲除成功。通过实时荧光定量PCR检测，RCC4vhl(-)vhl阴性肾癌细胞株(RCC4)与vhl阳性肾癌细胞株(RCC4T3-14)存在HIF-1αmRNA的表达差异，vhl阳性肾癌细胞株(RCC4T3-14) HIF-1αmRNA的表达明显高于阴性肾癌细胞株(RCC4)，差异具有统计学意义(P＜0.05)。该实验至少重复3次。结论： vhl蛋白不仅可以从蛋白水平下调HIF-1α蛋白，而且可以从分子水平促进HIF-1αmRNA表达，vhl蛋白的结构提示，pvhl不是一个直接与DNA结合的转录因子，其可能通过一个中间物质作用于HIF-1α基因，调节其转录和表达，这个中间物质还不明确，需进一步研究。

关键词：肾细胞癌 vhl基因 HIF-1α

SEPP1高甲基化在vhl野生型肾透明细胞癌发生中的作用和机制研究

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SEPP1高甲基化在VHL野生型肾透明细胞癌发生中的作用和机制研究

作者：刘侃中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

目的：1.利用基因芯片技术筛选出在vhl野生型和vhl突变型的肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)中甲基化程度及表达程度均有差异的基因,在ccRCC原代培养细胞及肿瘤组织中对差异进行验证。2.构建目的基因表达载体及稳... 详细信息

目的：1.利用基因芯片技术筛选出在vhl野生型和vhl突变型的肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)中甲基化程度及表达程度均有差异的基因,在ccRCC原代培养细胞及肿瘤组织中对差异进行验证。2.构建目的基因表达载体及稳转细胞株,通过一系列功能试验研究目的基因在ccRCC的发生中发挥的功能,对vhl野生型肾透明细胞癌的发生机制进行补充。方法：1.对ccRCC的新鲜肿瘤组织进行细胞传代培养,在得到的稳定传代培养的肿瘤细胞株中(均进行过str鉴定)根据患者性别、年龄、肿瘤的Fur man分级、肿瘤直径进行配对分组，筛选出5例vhl突变及5例vhl野生型的ccRCC.提取这10个ccRCC的总RNA，进行Affymetrix HTA2.0表达谱芯片检测;提取这10个ccRCC的总DNA,进行Illumina 450K甲基化芯片检测。2.提取20例vhl突变和20例vhl野生型的原代培养细胞的总RNA,逆转成cDNA,利用RT-PCR的方法验证表达谱芯片结果。3.提取20例vhl突变和20例vhl野生型的原代培养细胞的总DNA并进行硫化,利用甲基化特异性PCR的方法验证甲基化芯片结果。4.使用Sequenom MassArray甲基化检测方法检测目标基因CpG岛甲基化程度。5.使用Western-blot及免疫组化方法检测目标基因SEPP1在vhl突变和vhl野生型ccRCC组织中的表达情况。6.以人胚肾细胞株293T细胞的cDNA作为模板,通过PCR方法获得人SEPP1全长序列片段,并与慢病毒表达载体plv-EGFP(2A) Puro质粒相连接,获得重组plv-EGFP(2A)Puro-SEPP1载体并进行基因测序验证。将重组慢病毒载体与包装质粒共同转染293T细胞,进行病毒包装。用病毒上清感染肾透明细胞癌细胞株786-O和769-P,得到稳转细胞株。7.使用Western blot方法检测SEPP1蛋白表达情况。按照重组慢病毒载体感染细胞株、空载体感染细胞株、未经感染细胞株进行分组,并通过MTS检测法、细胞平板克隆形成实验、细胞周期试验对细胞的增殖能力进行评估。结果：1.表达谱芯片中筛选出80个差异倍数大于1.5且P基因,在其中筛选出12个改变倍数>2的编码基因并利用RT-PCR在原代培养细胞中进行验证，结合文献报道及基因已知的功能,选择SLC34A2, CXCL5, SULT1C4, AKAP12, SEPP1进行验证。2.从甲基化芯片中选择甲基化改变明显且在表达谱芯片中存在差异的四个基因：SLUT1C4,SEPP1、SLC34A2和AKAP12,利用MSP 和 Sequenom MassARRAY甲基化检测，其中SEPP1在vhl突变型和vhl野生型ccRCC中的甲基化差异得到验证。3.利用western-blot和免疫组化方法,SEPPI的表达差异在组织中得到验证。4plv-EGFP(2A)Puro-SEPP1重组慢病毒表达载体构建成功,经其感染的786-O、769-P细胞株在转染48h后在荧光显微镜下可见绿色荧光表达显著，SEPP1 蛋白表达水平均明显提高。***实验结果提示plv-EGFP(2A)Puro-SEP P1感染组的细胞增殖能力降低(Pvhl突变型和vhl野生型ccRCC中甲基化水平和表达水平均存在差异的基因SEPP1。2、成功构建重组慢病毒表达载体plv-EGFP(2A)Puro-SEPP1,在786-O、769-P细胞株中过表达的SEPP1可引起细胞周期G2/M期阻滞,并显著降低细胞增殖能力。

关键词：肾透明细胞癌 DNA甲基化 vhl基因 Affymetrix HTA2.0表达谱芯片 Illumina 450K甲基化芯片 SEPP1基因硒蛋白P 慢病毒表达载体肿瘤增殖

低氧诱导因子在肾透明细胞癌中作用的研究进展

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现代生物医学进展 2017年第10期17卷 1975-1980页

作者：项鹏程孙鹏程刘玉伟卢云汉徐万海哈尔滨医科大学附属第四医院黑龙江哈尔滨150001

vhl基因具有调节转录、稳定细胞生长相关基因和调节细胞周期的功能,其突变、缺失、重排和超甲基化与肾细胞癌(RCC)的发生密切相关。vhl基因产物vhl肿瘤抑制蛋白(p vhl)是泛素连接酶的成分,具有调节低氧诱导因子(HIF)稳定性的作用。HIF... 详细信息

vhl基因具有调节转录、稳定细胞生长相关基因和调节细胞周期的功能,其突变、缺失、重排和超甲基化与肾细胞癌(RCC)的发生密切相关。vhl基因产物vhl肿瘤抑制蛋白(p vhl)是泛素连接酶的成分,具有调节低氧诱导因子(HIF)稳定性的作用。HIF家族主要包含三种HIFα因子(HIF1α、HIF2α、HIF3α)和两种HIFβ因子(HIF1β、HIF2β)。HIF1α位于14q染色体上,在肾透明细胞癌中该染色体经常缺失,且这种14q的缺失常伴有预后不良。HIF2α的表达异常促进了p vhl缺陷型肾透明细胞癌中的发生。目前,抑制HIF2α及其下游的血管内皮生长因子(VEGF)的药物都处于临床试验的不同阶段,已有四种VEGF抑制剂获准用于肾透明细胞癌的治疗。选择抑制HIF或具有HIF靶基因抑制选择性的药物进行研究,可能为肾透明细胞癌的治疗提供新的方法。本文就HIF在vhl蛋白缺陷型肾透明细胞癌中作用的研究进展进行了综述。

关键词：肾透明细胞癌 vhl基因低氧诱导因子血管内皮生长因子

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家族型vhl综合征2例

中国实验诊断学 2019年第1期23卷 9-10页

作者：毛洪涛苏晓明张蕾韩雪立吉林大学第二医院放射线科吉林长春130041

vhl综合征即Von Hippel-Lindau综合征的简称,又称林岛综合征,具有家族遗传特性,外国学者[1]将vhl基因划分于抑癌基因范畴,vhl基因的突变、缺失是诱发vhl综合征发病的重要因素。vhl综合征临床特征为多发于中枢神经系统或视网膜的血管母... 详细信息

vhl综合征即Von Hippel-Lindau综合征的简称,又称林岛综合征,具有家族遗传特性,外国学者[1]将vhl基因划分于抑癌基因范畴,vhl基因的突变、缺失是诱发vhl综合征发病的重要因素。vhl综合征临床特征为多发于中枢神经系统或视网膜的血管母细胞瘤合并胰腺、肾脏、肝脏、肾上腺的实质脏器肿瘤性病变或多发囊性病变[2],发病率极为罕见[3]。

关键词： vhl综合征家族多发囊性病变 vhl基因血管母细胞瘤中枢神经系统肿瘤性病变遗传特性

vhl相关型中枢神经系统血管母细胞瘤的研究进展

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世界最新医学信息文摘 2018年第A2期18卷 131-133页

作者：杨芳李维段永建河南大学第一附属医院肿瘤科

vhl相关型中枢神经系统血管母细胞瘤是起中枢神经系统高度血管化的良性肿瘤综合征,是一种常染色显性遗传病,具有中枢神经系统多发并常累及多个内脏器官的特点,常常因检查不全面、未常规随访等导致漏诊。这篇文章通过文献回顾对中枢神经... 详细信息

vhl相关型中枢神经系统血管母细胞瘤是起中枢神经系统高度血管化的良性肿瘤综合征,是一种常染色显性遗传病,具有中枢神经系统多发并常累及多个内脏器官的特点,常常因检查不全面、未常规随访等导致漏诊。这篇文章通过文献回顾对中枢神经系统血管母细胞瘤的流行病特点、发病机制、临床诊断、系统治疗予以总结分析,着重分析其发病机制、治疗进展。

关键词：中枢神经系统血管母细胞瘤 vhl基因分子机制治疗

pvhl/HIF通路与PI3K/PKB/FOXO通路在肾透明细胞癌发生、发展中的作用

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现代肿瘤医学 2009年第11期17卷 2231-2234页

作者：何春锋刘永上海交通大学附属第一人民医院移植泌尿外科上海200080

肿瘤抑制基因vonHipple-Lindau(简称vhl基因)的突变失活导致肿瘤细胞中缺氧诱导因子的累积,进而调节其下游靶基因的转录和表达,促进肿瘤内新生血管形成及细胞增殖,从而促进肾透明细胞癌的发生、发展。磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B通路异常... 详细信息

肿瘤抑制基因vonHipple-Lindau(简称vhl基因)的突变失活导致肿瘤细胞中缺氧诱导因子的累积,进而调节其下游靶基因的转录和表达,促进肿瘤内新生血管形成及细胞增殖,从而促进肾透明细胞癌的发生、发展。磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B通路异常活化,在肾细胞肿瘤的发生、发展、转移中发挥重要作用。上述两通路存在着错综复杂的联系。本文通过分析两通路在肾肿瘤发生,发展中的作用,为探寻肾癌治疗的新靶点提供理论依据。

关键词：肾肿瘤 vhl基因缺氧诱导因子磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B FOXO转录因子信号通路

肾癌患者血清vhl HIF-1α HIF-2α水平变化及意义

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河北医学 2018年第1期24卷 34-38页

作者：史春夏李忠心刘永泉张会敏首都医科大学附属北京潞河医院肾病中心北京101149

目的:探讨血清希佩尔-林道基因(vhl)、缺氧诱导因子(HIF)1α及HIF-2α在肾癌患者中的变化及意义。方法:收集2015年1月至2016年4月的45例肾癌患者作为肾癌组,并在同一时期收集健康查体者作为对照组,检测两组血清vhl、HIF-1α及HIF-2α水... 详细信息

目的:探讨血清希佩尔-林道基因(vhl)、缺氧诱导因子(HIF)1α及HIF-2α在肾癌患者中的变化及意义。方法:收集2015年1月至2016年4月的45例肾癌患者作为肾癌组,并在同一时期收集健康查体者作为对照组,检测两组血清vhl、HIF-1α及HIF-2α水平;对肾癌患者的癌灶最大直径进行测定;对肾癌患者进行6个月随访,观察并记录复发患者情况。结果:肾癌组比对照组血清vhl水平明显下降,但HIF-1α和HIF-2α水平显著上升(Pvhl、HIF-1α和HIF-2α表达和患者年龄、性别没有明显关系(P>0.05),但和TNM分期、临床分期、癌灶直径以及淋巴结转移呈显著相关(Pvhl水平显著更低,而HIF-1α和HIF-2α水平明显更高(Pvhl、HIF-1α及HIF-2α水平与肾癌病理分级、临床分期、癌灶大小以及淋巴结转移相关,可能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要作用。

关键词：肾癌 vhl基因缺氧诱导因子-1α 缺氧诱导因子-2α