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蚌埠医学院学报 2010年第6期35卷 552-554页

作者：吕静竹李月琴周天鸿安徽理工大学医学院生化教研室安徽淮南232001 暨南大学生命科学技术学院广东广州510632

目的:观察大肠埃希菌RNase P催化亚基M1 RNA在细胞外水平上对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)DNA聚合酶ul54 mRNA的切割效果,探讨核酶作为新型抗病毒制剂的应用前景。方法:针对HCMVul54 mRNA设计特异性的外部引导序列(externa... 详细信息

目的:观察大肠埃希菌RNase P催化亚基M1 RNA在细胞外水平上对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)DNA聚合酶ul54 mRNA的切割效果,探讨核酶作为新型抗病毒制剂的应用前景。方法:针对HCMVul54 mRNA设计特异性的外部引导序列(external guide sequences,EGSs)EGS-T6,观察其引导M1 RNA特异的细胞外切割活性。结果:在EGS-T6引导下,大肠埃希菌RNase P催化亚基M1 RNA在细胞外可特异地对靶mRNA进行有效切割。结论:EGS-T6具备引导M1 RNA对ul54 mRNA特异切割的能力,可发展成一种新型抗病毒制剂。

关键词： RNase P 外部引导序列人巨细胞病毒 ul54 mRNA

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异基因造血干细胞移植后人巨细胞病毒感染临床毒株ul54基因的克隆及序列分析

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临床内科杂志 2005年第4期22卷 248-251页

作者：田传军李月琴王波叶铁真张纯青苏运贞何华坤周天鸿暨南大学生命科学与技术学院生物化学与分子生物学实验室广州510632 广州医学院第一附属医院

目的　研究异基因造血干细胞移植(AlloHSCT)后感染人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株ul54基因的克隆与鉴定。方法　从异基因造血干细胞移植后感染HCMV的患者体内分离出HCMV临床毒株,根据GenBank提供的实验室标准病毒株HCMVAD169ul54基因DNA... 详细信息

目的　研究异基因造血干细胞移植(AlloHSCT)后感染人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株ul54基因的克隆与鉴定。方法　从异基因造血干细胞移植后感染HCMV的患者体内分离出HCMV临床毒株,根据GenBank提供的实验室标准病毒株HCMVAD169ul54基因DNA全序列及有关文献,从该临床毒株DNA中扩增分离出ul54基因片段,并克隆入pEGM3Z载体。对重组体pEGM3Z ul54进行测序鉴定,并进行初步的序列分析。结果　从临床病毒株中扩增出约3728bp的片段,克隆产物经琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定,证实为HCMVul54基因,其序列保守区域与GenBank报道AD169基本一致,但在第519、618、723、910、1188、1641、2070、2278、2279、2442、3140等11个位点发生碱基突变,涉及到编码氨基酸C304R、T760N、Y1047C、R1054K等位点发生改变,其中T760N为ul54保守区域改变。结论　成功克隆出AlloHSCT后感染野生型人巨细胞病毒的ul54基因,初步的序列分析证实其存在11个碱基发生突变,并导致编码产物4个氨基酸位点发生改变。

关键词：异基因造血干细胞移植人巨细胞病毒 ul54 克隆序列分析

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以HCMVul54为靶基因构建M1GS真核表达载体及两个M1GS体内活性的检测

以HCMVUL54为靶基因构建M1GS真核表达载体及两个M1GS体内活性的检...

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作者：苏运贞暨南大学

学位级别：硕士

源自大肠杆菌的RNase P是促使ptRNA 5’端成熟的天然核酶。其催化核心RNA亚单位(M1 RNA)能在缺乏辅助单位C5蛋白情况下,发挥切割作用。RNaseP是结构识别酶,能与mRNA形成RNase P识别的底物形式的小片段RNA称为外部引导序列EGS(Extemal gu... 详细信息

源自大肠杆菌的RNase P是促使ptRNA 5’端成熟的天然核酶。其催化核心RNA亚单位(M1 RNA)能在缺乏辅助单位C5蛋白情况下,发挥切割作用。RNaseP是结构识别酶,能与mRNA形成RNase P识别的底物形式的小片段RNA称为外部引导序列EGS(Extemal guide sequence)。EGS共价连接到M1RNA的3’末端成为附属于M1RNA的一段引导序列,称为GS。附带GS的M1RNA成为具备自我引导和序列特异切割能力的核酶-M1GS。人巨细胞病毒DNA聚合酶催化亚单位—ul54,是人巨细胞病毒(HCMV)复制的关键酶。许多HCMV耐药株与该基因点突变相关。因此干扰ul54基因,能抑制HCMV的繁殖以及提高给药治疗效果。本实验根据陈浩军硕士的体外切割实验,选用具有切割作用的两个核酶T4-M1GS和T7-M1GS构建在携带U6启动子的逆转录病毒载体上,使其在Hela细胞内具备转录能力,研究其对构建在真核载体pZGFP-N1的ul54片段表达的RNA的切割作用,为进一步研究以RNase P为基础的反义RNA技术抑制病毒基因表达奠定基础。本论文进行了下列实验: T4-M1GS和T7-M1GS分别构建于携带U6启动子的逆转录病毒载体pLXSN上,命名为T4-M1GS-pLXSN和T7-M1GS-pLXSN。 T4-M1GS-pLXSN和T7-M1GS-pLXSN分别与空载体pEGFP-N1共转染Hela细胞,结果显示这两个核酶对报告基因GFP不产生干扰作用。核酶重组质粒T4-M1GS-pLXSN和底物重组质粒ul54-C-GFP共转染Hela细胞,实验表明核酶T4-M1GS能作用于ul54-C-GFP的RNA片段。进一步将ul54-CD-GFP转染至T4-M1GS-pLXSN稳定表达的Hela细胞中,Northern blot结果表明在Hela细胞中稳定表达的T4-M1GS能切割绝大部分底物ul54-CD。具有最高体外切割活性的T7-M1GS-pLXSN和底物ul54-CD-GFP共转染Hela细胞,Northern blot结果显示此核酶在细胞水平上仍具有对底物很高的切割作用。研究结果表明,体外实验筛选到的高切割活性的核酶在细胞内也具有较强的

关键词：核酶RNase P 人巨细胞病毒人巨细胞病毒 DNA聚合酶 ul54

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喜树碱通过抑制HSV-1复制相关基因的表达发挥抗HSV-1作用

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中草药 2018年第17期49卷 4078-4084页

作者：周洁钟鹏禹许群芬陈恬李祖锐崔家旗张倩成都医学院基础医学院四川成都610500 四川大学华西第二医院循证药学中心四川成都610041

目的探讨喜树碱体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的作用及其机制。方法不同浓度的喜树碱作用于HSV-1感染的Vero细胞后,采用细胞病变(cytopathologic effects,CPE)法评价喜树碱体外抗HSV-1的作用,计算喜树碱半数毒性浓度(TC_(50))、病毒半... 详细信息

目的探讨喜树碱体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的作用及其机制。方法不同浓度的喜树碱作用于HSV-1感染的Vero细胞后,采用细胞病变(cytopathologic effects,CPE)法评价喜树碱体外抗HSV-1的作用,计算喜树碱半数毒性浓度(TC_(50))、病毒半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI),并通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测喜树碱对HSV-1相关基因m RNA表达的影响。结果喜树碱的TC_(50)为2 153.44 nmol/L,IC_(50)为43.01 nmol/L,TI为50.07。RT-qPCR结果显示,喜树碱能明显抑制HSV-1 ul12、ul42、ul54、TK基因的表达,其抑制作用与喜树碱浓度呈剂量依赖关系。结论喜树碱具有明显抗HSV-1的作用,能抑制HSV-1 ul12、ul42、ul54、TK基因的转录。

关键词：喜树碱单纯疱疹病毒Ⅰ型抗病毒活性实时荧光定量PCR ul12 ul42 ul54 TK

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