检索结果-南通市图书馆

伪狂犬病病毒变异株ul3、ul46和ul50基因失活株的构建与生物学特性分析

畜牧与兽医 2021年第11期53卷 67-73页

作者：殷涵臻张传健曾荣愚费荣梅王继春南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 天康制药(苏州)有限公司江苏苏州215000

为探究ul3、ul46和ul50基因对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)毒力的影响,本研究应用En Passant技术,分别对PRV变异株AH02LA的细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC)的ul3、ul46和ul50起始密码子进行敲除,获得3株基因失活重组BAC:BAC^(PRV-ul3knock)、BAC^(PRV-ul46knock)和BAC^(PRV-ul50knock)。将BAC DNA与带有同源臂的gE/gI序列片段共转染猪睾丸(swine testis, ST)细胞,获得重组病毒:PRV-ul3^(knock)、PRV-ul46^(knock)和PRV-ul50^(knock)。生长动力学试验结果显示ul3、ul46和ul50突变失活株在感染12和36 h滴度显著低于PRV AH02LA亲本株,表明ul3、ul46和ul50可能介导病毒复制。小鼠的致病性试验显示,PRV-ul3^(knock)、PRV-ul46^(knock)和PRV-ul50^(knock)对小鼠的LD_(50)分别为10^(4.44)TCID_(50)、10^(4.5)TCID_(50)和10^(4.05)TCID_(50),与PRV AH02LA相似(LD_(50)为10^(4.91)TCID_(50)),暗示ul3、ul46和ul50基因可能对PRV毒力无显著影响。本研究分析了ul3、ul46和ul50基因对PRV毒力的影响,为PRV致病机制的研究提供了参考。

关键词：伪狂犬病病毒 ul3 ul46 ul50 缺失株生物学特性

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

伪狂犬病病毒ul3、ul46、ul50突变株和ul43截短体的构建及生物学特性初步鉴定

伪狂犬病病毒UL3、UL46、UL50突变株和UL43截短体的构建及生物学...

引用

作者：殷涵臻南京农业大学

学位级别：硕士

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)能感染除灵长类以外的其他诸多哺乳动物,猪为PRV天然贮存宿主,PRV能逃避猪体免疫系统,形成潜伏感染。PRV可以引起初生仔猪死亡、成年猪的呼吸系统症状和神经症状和母猪的繁殖障碍等。2011年以来,PR... 详细信息

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)能感染除灵长类以外的其他诸多哺乳动物,猪为PRV天然贮存宿主,PRV能逃避猪体免疫系统,形成潜伏感染。PRV可以引起初生仔猪死亡、成年猪的呼吸系统症状和神经症状和母猪的繁殖障碍等。2011年以来,PRV变异株的出现给我国猪场带来了巨大损失,对该病的防控成为近年来亟待解决的一大难题。研究表明PRV编码的一些蛋白可以起到免疫抑制的作用,包括对MHC-I分子递呈、干扰素通路、补体调节通路的干扰等。PRV-ul43的马疱疹病毒Ⅰ型(Equine Herpesvirus-Ⅰ,EHV-Ⅰ)等位基因产物能抑制MHC-Ⅰ递呈,胞内区可能是ul43的重要信号转导区域,可能对蛋白信号起转导作用;PRV的ul3的功能未有相关研究报道;PRV的ul46可以诱导核膜破裂,加速病毒粒子的侵入和包装过程;PRV ul50除了作为PRV的焦磷酸酶外,还可以拮抗α-干扰素反应。本研究运用PRV AH02LA株构建的细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC),通过Red两步重组法构建ul3、ul46、ul50突变株和ul43胞内区截短重组株,并分析其生物学特性,为进一步研究这些基因的作用奠定基础,也为研制新的PRV疫苗的缺失靶标位点提供参考。1 PRV ul3、ul46、ul50突变株的构建与生物学特性初步鉴定应用PRV AH02LA株细菌人工染色体技术(BAC),通过Red两步重组将ul3、ul46和ul50的起始密码子敲除,构建了3株基因突变重组BAC,分别命名为:BAC、BAC、BAC。将重组BAC转染ST细胞,经过挑斑纯化,获得重组病毒,命名为:PRV-ul3、PRV-ul46、PRV-ul50。测定了PRV-ul3、PRV-ul46、PRV-ul50和PRV AH02LA亲本株的生长动力学,传代稳定性和对小鼠的致病力。结果显示,PRV-ul3、PRV-ul46、PRV-ul50在48～72hpi,毒价均达到峰值,依次为10TCID/m L、10TCID/m L、10TCID/m L,毒价略低于PRV AH02LA亲本株(10TCID/m L),但无显著性差异。表明ul3、ul46、ul50蛋白对病毒体外增殖能力均无显著影响;ul46突变失活株在12hpi未检测到活病毒,24hpi的毒价(10TCID/m L)显著低于PRV AH02LA亲本株(10TCID/m L),表明ul46蛋白可能对病毒早期复制有重要作用。遗传稳定性实验显示,3种突变失活株在ST细胞连续传10代以后,敲除位点未发生回补或变异。小鼠致病力实验结果显示,PRV-ul3、PRV-ul46、PRV-ul50对小鼠的LD分别为10TCID、10TCID、10TCID,与PRV AH02LA亲本毒(LD为10TCID)相似,表明PRV的ul3、ul46、ul50蛋白对小鼠致病性无减弱作用。2 PRV ul43截短体的构建及其生物学特性初步鉴定应用PRV AH02LA株细菌人工染色体技术(BAC),通过Red两步重组分别将ul43的3个胞内区部分碱基(286～291bp、571～585bp、850～858bp)敲除,获得重组BAC,分别命名:BAC、BAC、BAC。将重组BAC转染ST细胞,经过数轮挑斑纯化获得重组病毒,分别命名为:PRV-ul431knock、PRV-ul43、PRV-ul43。测定了PRV-ul43、PRV-ul43、PRV-ul43和PRV AH02LA亲本株的生长动力学,传代稳定性和对小鼠致病力。生长动力学结果显示,12hpi,PRV-ul43、PRV-ul43、PRV-ul43毒价依次为10TCID/m L、10TCID/m L、10 TCID/m L,低于PRV AH02LA亲本株(10TCID/m L);36hpi,3株ul43截短重组毒毒价依次为10TCID/m L、10TCID/m L、10TCID/m L,低于PRV AH02LA亲本株(10TCID/m L),表明ul43胞内区可能参与调节病毒早期与中期复制;48～72hpi,所有突变株毒价达到峰值,依次为10TCID/m L、10TCID/m L、10TCID/m L。与亲本株相似(10TCID/m L)。表明ul43胞内区对病毒体外增殖能力无显著影响。各毒株在ST细胞上遗传稳定性良好,连续传10代以后,胞内区缺失位点碱基未发生回补或变异。小鼠致病力实验结果显示,PRV-ul43、PRV-ul43、PRV-ul43的的LD分别为10TCID,10TCID,10TCID,与PRV AH02LA亲本株(LD为10TCID)相似,表明ul43胞内区对小鼠的致病性无减弱作用。通过对ul3、ul46、ul50突

关键词：伪狂犬病病毒 BAC ul3 ul46 ul50 ul43胞内区生物学特性

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：