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稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的u937白血病细胞株的建立及初步特性分析

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中山大学学报（医学科学版） 2015年第5期36卷 670-675页

作者：刘玲玲范蕊芳赖文兴林东军中山大学附属第三医院血液科∥血液病研究所广东广州510630

【目的】构建稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的人急性单核细胞白血病U937细胞株,并初步分析过表达p62基因对u937细胞的影响。【方法】首先在空载体MSCV-IRES-GFP(MIG)基础上构建重组质粒MSCV-p62-IRES-GFP(MPIG),分别用MIG及MPIG载体进... 详细信息

【目的】构建稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的人急性单核细胞白血病U937细胞株,并初步分析过表达p62基因对u937细胞的影响。【方法】首先在空载体MSCV-IRES-GFP(MIG)基础上构建重组质粒MSCV-p62-IRES-GFP(MPIG),分别用MIG及MPIG载体进行病毒包装,并感染u937细胞,用流式细胞分选仪分选出绿色荧光细胞,获得u937-GFP和u937-p62稳定细胞株,利用流式细胞仪及Western blot分别检测GFP细胞的阳性率及p62蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定u937-GFP和u937-p62细胞的生长情况,流式细胞术检测髓系细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达情况。【结果】荧光显微镜观察结果显示,MIG和MPIG病毒感染后,u937-GFP和u937-p62细胞均表达绿色荧光蛋白;经流式细胞仪分选后,u937-GFP和u937-p62细胞中GFP阳性表达率分别达98.5%和87.3%。Western blot的结果显示u937-p62细胞中p62蛋白表达较u937-GFP显著升高。MTT实验结果显示,与u937-GFP细胞相比,u937-p62细胞的生长速率加快。流式结果显示u937-GFP细胞和u937-p62细胞表达细胞表面分化抗原CD11b及CD14无明显差异。【结论】成功构建了p62基因过表达的u937稳定细胞株,过表达p62可促进u937细胞增殖,并不能促进u937细胞的分化。

关键词： U937细胞株 p62 载体构建

YFP-CD18融合蛋白在U937细胞株中的表达与鉴定

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生物技术 2003年第4期13卷 4-6页

作者：严鸣毛积芳钟纪根何健朱秋峰徐仁宝基础医学部病理生理学教研室基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院急救科长征医院麻醉科第二军医大学上海200433

目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载... 详细信息

目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载体 ,并将其转染至U937细胞株中进行表达。通过荧光显微镜观察转染成功后的u937细胞黄色荧光是否存在 ,以及流式细胞术检测确定PMA刺激后YFP -CD18活化后可否由胞浆内转位至膜上和测定PMA活化前后转染的u937细胞与其配基ICAM - 1粘附活性的变化等方面来进行鉴定。结果 :经酶切鉴定 ,pYFP -CD18构建正确 ,转染U937细胞株后 ,可见YFP -CD18融合蛋白发出的黄色荧光。结论 :构建完成YFP -CD18融合基因并可以在U937细胞株中进行表达。

关键词： YFP CD18 融合蛋白 U937细胞株表达黄色荧光蛋白

地西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株u937增殖及凋亡的影响及机制的研究

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地西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株U937增殖及凋亡的影响及机制...

作者：王凤云河北医科大学

学位级别：硕士

目的：白血病细胞耐药和复发仍然是目前阻碍患者长生存的主要原因，特别是对于老年和一般情况较差无法耐受强化疗的患者。表观遗传学药物为这些患者带来了新的治疗方法。目前常用的药物为DAN甲基转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂。... 详细信息

目的：白血病细胞耐药和复发仍然是目前阻碍患者长生存的主要原因，特别是对于老年和一般情况较差无法耐受强化疗的患者。表观遗传学药物为这些患者带来了新的治疗方法。目前常用的药物为DAN甲基转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂。地西他滨（decitabine,DAC）为DNA甲基转移酶抑制剂，能够抑制DNA甲基转移酶的活性，逆转抑癌基因的异常甲基化，从而使沉默的抑癌基因激活，使白血病细胞恢复正常的分化和凋亡。地西他滨疗效肯定，同强化疗相比，安全性强，治疗相关死亡率低，是治疗白血病的新选择。现有研究表明组蛋白乙酰化药物能够干扰细胞周期、诱导细胞分化和凋亡，且发现其与DNA甲基转移酶抑制剂具有协同抗白血病作用。丙戊酸钠（Valproic acid,VPA）是传统的抗癫痫药物，近年发现其具有组蛋白去乙酰化转移酶的抑制作用，能够诱导白血病细胞凋亡。本实验以u937白血病细胞为研究对象，观察地西他滨联合丙戊酸钠对u937细胞的增殖抑制和促凋亡作用，并研究DAC对DNA甲基转移酶和抑癌基因P15在mRNA水平的影响，初步探讨药物的作用机理. 方法： 1常规培养人白血病细胞株u973，取对数生长期的细胞进行实验;2MTT法检测DAC、VPA及两药联合对u937细胞的增殖抑制;DAC的浓度分别为0.1、0.8、1.6mmol/L;VPA的浓度分别为1.0、3.0、5.0mmol/L;DAC（0.8mmol/1）联合VPA（1.0、3.0、5.0mmol/L）分别作用于u937细胞24、48、72小时，MTT检测细胞增殖抑制率。 3AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡:终浓度为0.1、0.8、1.6mmol/L的DAC，终浓度为1.0、3.0、5.0mmol/L的VPA及DAC（0.8mmol/1）联合VPA（1.0、3.0、5.0mmol/L）分别作用于u937细胞72小时，PI染色，流式细胞仪检测细胞凋亡 4PI染色流式细胞术检测细胞周期变化;DAC浓度分别为0.1、0.8、1.6mmol/L作用于u937细胞72小时，PI染色、流式细胞仪检测细胞周期变化。 5RP-PCR检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P15mRNA表达水平的变化:检测药物处理前后细胞目的基因mRNA表达的变化。 6SPSS16.0软件分析，分组资料以均数±标准差表示，两组比较应用T检验方法，多组比较应用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。结果： 1DAC、VPA及两药联合对u937细胞增殖的影响随着药物浓度的增加和作用时间的延长，DAC对u937细胞的增殖抑制率由10.1%增加到67.0%，各组进行统计学分析P＜0.05，差异具有统计学意义;VPA的细胞增殖抑制率由17.6%增加到61.8%，各组进行比较显示，VPA在5.0mmol/L时，48小时的增殖抑制率与24小时及72小时的增殖抑制率之间的差别无统计学意义（P＞0.05），VPA浓度在1.0、3.0mmol/L时各组间抑制率有明显差异（P＜0.05）;联合用药组细胞的最大增殖抑制率为89.2%，联合用药组之间比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。u937细胞的增殖抑制率均随着药物浓度增加和药物作用时间延长逐渐增加。通过国内金氏公式计算，24h、48h、72h的Q值0.983、1.042、0.943;1.079、1.277、1.208;1.189、1.254、1.137。提示两药联合有协同相加作用。 2DAC、VPA及两药联合对u937细胞凋亡的影响 DAC作用72小时u937细胞的凋亡率由13.17%增加到30.53%，显示细胞凋亡率随药物浓度增加而增加,明显高于对照组（P＜0.05）;VPA作用后细胞的凋亡率由28.61%增加到47.30%，细胞凋亡率呈剂量依赖性,各组比较（P＜0.05）;DAC联合VPA作用于u937细胞的凋亡率明显高于单药组，细胞凋亡率最高可达68.40%，各组比较（P＜0.05），结果显示两药联合具有协同促凋亡作用。 3DAC作用72小时u937细胞周期变化DAC主要作用于S期细胞，随着DAC药物浓度的增加，u937细胞G0/G1期比例逐渐增加，由50.85%增至68.9%，S期比例逐渐减少，由47.78%减至28.11%。各组进行统计学分析P值均＜0.05，差异具有统计学意义。 4RT-PCR检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B及P15mRNA表达水平的变化未使用药物处理前DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3BmRNA在u937细胞中均有表达，而P15mRNA在u937细胞中没有表达，DAC作用72小时DNMT1和DNMT3AmRNA表达量减少并随药物浓度的增加表达量逐

关键词： U937细胞株地西他滨丙戊酸钠增殖凋亡 DNA甲基转移酶

六亚甲基二乙酰胺对急性白血病细胞株HL-60和u937分化、凋亡的影响及其机制

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中华血液学杂志 2004年第3期25卷 154-157页

作者：王钦红谢毅范华骅高跞刘燕谢彦晖复旦大学附属华山医院血液科上海200040 上海血液中心血液工程研究室

目的　研究六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)体外诱导HL 6 0和u937细胞分化、凋亡的作用及其机制。方法　流式细胞仪检测细胞分化抗原CD1 1b、CD1 4,细胞凋亡标记Annexin Ⅴ以及进行细胞周期分布和细胞内cyclinD、cyclinE、p2 7抗原的分析 ,RT ... 详细信息

目的　研究六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)体外诱导HL 6 0和u937细胞分化、凋亡的作用及其机制。方法　流式细胞仪检测细胞分化抗原CD1 1b、CD1 4,细胞凋亡标记Annexin Ⅴ以及进行细胞周期分布和细胞内cyclinD、cyclinE、p2 7抗原的分析 ,RT PCR检测c myc、Rb、Bcl 2基因mRNA的表达。结果　HL 6 0、u937细胞经HMBA处理 72h后CD1 1b表达显著增高 ,高剂量HMBA促使Annexin Ⅴ表达增加。HMBA阻滞HL 6 0、u937细胞于G0 G1 期 ,并使该两种细胞内cyclinE表达显著下降 ,cyclinD、p2 7表达显著增高 ,呈剂量依赖关系 ;HMBA可使HL 6 0、u937细胞c myc、Bcl 2mRNA表达下调 ,而RbmRNA在HL 6 0细胞表达上调 ,在u937细胞则无显著改变。结论　HMBA能诱导HL 6 0、u937细胞出现明显的分化 ,高剂量的HMBA有促使HL 6 0、u937细胞凋亡的倾向 ,其机制可能是通过影响细胞周期调控分子以及有关的增殖分化相关基因的表达 ,从而抑制细胞增殖 ,促进细胞分化。

关键词：六亚甲基二乙酰胺急性白血病 HL-60细胞株 U937细胞株细胞分化细胞凋亡流式细胞仪

4-1BBL单克隆抗体激发u937细胞NF-κB的核转位及4-1BBL/CD28同型异构分子共定位

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中国实验血液学杂志 2013年第5期21卷 1121-1125页

作者：张蔚仇红霞田甜陈纬凤王菊娟杨向绸许戟段丽敏南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院血液科老年血液科

本研究探讨共刺激分子4-1BBL逆向信号在人急性单核细胞白血病细胞株u937中的分子机制。选择U937细胞株作为靶细胞,与鼠抗人4-1BBL激发型单克隆抗体1F1(mAb 1F1)共培养。应用激光共聚焦显微镜观察U937细胞株上NF-κB核转位及4-1BBL分子与... 详细信息

本研究探讨共刺激分子4-1BBL逆向信号在人急性单核细胞白血病细胞株u937中的分子机制。选择U937细胞株作为靶细胞,与鼠抗人4-1BBL激发型单克隆抗体1F1(mAb 1F1)共培养。应用激光共聚焦显微镜观察U937细胞株上NF-κB核转位及4-1BBL分子与CD28同型异构分子(CD28i)的共定位;使用流式细胞术及RTPCR检测u937细胞4-1BBL和CD28i的分子表达。结果表明:u937细胞经mAb 1F1刺激后,出现明显的NF-κB核内转位及细胞膜上4-1BBL与CD28i分子的共定位。结论:介导u937细胞生长的4-1BBL逆向信号的传导与NF-κB的核转位相关;CD28i分子可能参与了4-1BBL逆向信号的传导。

关键词： 4-1BBL 逆向信号 U937细胞株 NF-κB CD28同型异构体

维生素D3诱导的u937细胞中CD14表达的实验研究

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 155-158页

作者：孙航吴传新龚建平刘海忠李旭宏游海波陈先锋重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400010 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科重庆400010

　目的: 探讨维生素D3诱导u937细胞上CD14蛋白的表达及其对内毒素 (LPS)刺激的反应性。方法: 用0. 1μmol/LVitD3与u937细胞共同培养 24h诱导CD14基因的表达, 并观察u937细胞对不同浓度的LPS刺激不同时间的反应性。结果: VitD3能稳定诱... 详细信息

　目的: 探讨维生素D3诱导u937细胞上CD14蛋白的表达及其对内毒素 (LPS)刺激的反应性。方法: 用0. 1μmol/LVitD3与u937细胞共同培养 24h诱导CD14基因的表达, 并观察u937细胞对不同浓度的LPS刺激不同时间的反应性。结果: VitD3能稳定诱导u937细胞表达CD14mRNA和CD14蛋白。经VitD3诱导的u937细胞对LPS刺激的敏感性显著增强, 表现为低浓度LPS刺激即能诱导该细胞核中NF -κB激活, 促进TNF- αmRNA的转录和表达, 并将表达的TNF α释放入培养上清中。结论: VitD3能诱导u937细胞中CD14基因和蛋白的表达, 并增加其对LPS刺激的反应性。

关键词：维生素D3 U937细胞株脂多糖 CD14

高效液湘色谱检测高密度脂蛋白转运荷脂巨噬细胞内胆固醇的生物学活性

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中国现代医学杂志 2008年第14期18卷 2013-2015,2036页

作者：叶延平王佐尹小波莫中成李良李霞李媛彬张青海易光辉南华大学公共卫生学院湖南衡阳421001 南华大学心血管病研究所湖南衡阳421001 南华大学生理教研室湖南衡阳421001

目的应用u937泡沫细胞模型建立一种新的检测高密度脂蛋白(HDL)外运细胞内胆固醇生物学活性的方法。方法将u937细胞与100μg/mL氧化低密度脂蛋白孵育36h后,分别用不同浓度高密度脂蛋白处理24h,应用高效液相色谱(HPLC)检测细胞内胆固醇和... 详细信息

目的应用u937泡沫细胞模型建立一种新的检测高密度脂蛋白(HDL)外运细胞内胆固醇生物学活性的方法。方法将u937细胞与100μg/mL氧化低密度脂蛋白孵育36h后,分别用不同浓度高密度脂蛋白处理24h,应用高效液相色谱(HPLC)检测细胞内胆固醇和胆固醇酯含量。结果经氧化低密度脂蛋白处理后的u937细胞,HPLC检测细胞内总胆固醇增加,胆固醇酯含量大于胆固醇含量;经高密度脂蛋白处理后,细胞内胆固醇含量减少,不同厂家及不同批次的高密度脂蛋白外运胆固醇的生物学活性有所不同。结论经氧化低密度脂蛋白处理后的u937细胞可以作为检测高密度脂蛋白外运胆固醇生物学活性的方法。

关键词： U937细胞株泡沫细胞高密度脂蛋白胆固醇流出

川芎嗪联合阿糖胞苷对人白血病u937细胞的增殖、凋亡影响及相关机制的研究

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滨州医学院学报 2016年第1期39卷 5-8页

作者：唐慎华贾秀红李娜王建勇滨州医学院附属医院儿科滨州256603

目的探讨川芎嗪(TMP)联合阿糖胞苷(Ara-c)对白血病细胞株u937增殖、凋亡的影响及相关机制的研究,为临床寻找有效的化疗增敏剂提供实验依据和理论基础。方法实验分为对照组、TMP组、Ara-c组及TMP联合Ara-c组。应用CCK-8法检测各组细胞的... 详细信息

目的探讨川芎嗪(TMP)联合阿糖胞苷(Ara-c)对白血病细胞株u937增殖、凋亡的影响及相关机制的研究,为临床寻找有效的化疗增敏剂提供实验依据和理论基础。方法实验分为对照组、TMP组、Ara-c组及TMP联合Ara-c组。应用CCK-8法检测各组细胞的增值抑制率;流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率;蛋白质印迹方法检测各组细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达情况。结果 TMP(0.5mg·ml-1)组与Ara-c(0.02,0.04,0.08,0.16μg·ml-1)组联合作用后,u937细胞的增殖抑制率明显高于相同浓度下Ara-c组,差异有统计学意义(t=5.38,t=8.23,t=14.61,t=17.31,P均细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,从而提高u937细胞对Ara-c的化疗敏感性,其机制可能与下调抑凋亡蛋白Bcl-2表达,上调促凋亡蛋白Bax表达有关。

关键词： U937细胞株川芎嗪阿糖胞苷细胞增殖细胞凋亡 Bcl-2 Bax

曲古抑菌素对肿瘤坏死因子α诱导u937细胞IκB-α蛋白降解的影响

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中国医院药学杂志 2007年第3期27卷 285-288页

作者：崔国惠陈卫华陈燕华中科技大学同济医学院附属协和医院湖北武汉430022

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别或联合作用于人类单核细胞白血病细胞株u937细胞前后,IκB-α蛋白的表达变化及其在NF-κB激活过程中的作用。方法:分别将TSA、TNF-α单独... 详细信息

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别或联合作用于人类单核细胞白血病细胞株u937细胞前后,IκB-α蛋白的表达变化及其在NF-κB激活过程中的作用。方法:分别将TSA、TNF-α单独或联合作用于u937细胞,用免疫印迹法及荧光显微镜检测NF-κB/P65蛋白在该细胞中的表达及定位的变化;流式细胞术和免疫印迹法分析IκB-α蛋白表达的变化。结果:①荧光显微镜观察:分别作用45min后,NF-κB/P65蛋白分布于对照组及TSA处理组的细胞浆;而TNF-α处理组胞浆、胞核中均可见P65蛋白分布;TSA+TNF-α联合处理组仅胞浆表达P65蛋白。免疫印迹结果同样证实,作用相同时间后,TNF-α处理组细胞核表达P65蛋白,TSA+TNF-α联合处理组细胞核内P65蛋白表达较前者明显减少;②流式细胞术结果表明,经相同时间处理后,TSA+TNF-α联合处理组的IκB-α蛋白平均荧光强度较TNF-α处理组明显增高(P细胞IκB-α蛋白表达较对照组明显降低,TSA+TNF-α联合处理组细胞IκB-α的表达较前者明显增高,但在作用2h后二者IκB-α蛋白表达差异无显著性。结论:TSA能部分抑制TNF-α诱导的u937细胞IκB-α的降解,从而抑制NF-κB的激活。TSA有可能通过影响NF-κB信号途径发挥抗肿瘤作用。

关键词： TSA 肿瘤坏死因子α NF-κB/p65 IκB-α U937细胞株