检索结果-南通市图书馆

中国病原生物学杂志 2019年第12期14卷 1423-1428页

作者：欧阳任辉罗波李想刘美辰周必英遵义医科大学寄生虫学教研室贵州遵义563000 贵州省第二人民医院医学检验科

目的制备猪带绦虫ts14-3-3.6蛋白多克隆抗体,并检测ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫及囊尾蚴阶段的表达情况。方法合成ts14-3-3.6基因全长,然后克隆至pCznI原核表达质粒,转化至大肠埃希菌ArctieEx-press中并诱导表达,采用SDS-PAGE和Wester... 详细信息

目的制备猪带绦虫ts14-3-3.6蛋白多克隆抗体,并检测ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫及囊尾蚴阶段的表达情况。方法合成ts14-3-3.6基因全长,然后克隆至pCznI原核表达质粒,转化至大肠埃希菌ArctieEx-press中并诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析,通过Ni柱亲和纯化获得ts14-3-3.6重组蛋白。将该重组蛋白免疫新西兰兔,制备抗ts14-3-3.6多克隆抗体,以此为一抗采用Western blot检测ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴阶段的表达。结果pCznI一ts14-3-3.6重组表达质粒构建成功,诱导表达的ts14-3-3.6重组蛋白存在于包涵体中,相对分子质量约29.43X102。Western blot检测纯化带有His标签的ts14-3-3.6重组蛋白能被His标签抗体识别;用该蛋白免疫新西兰兔获得效价为1:512000的多克隆抗体;分别以提取的猪带绦虫成虫和囊尾蚴总蛋白为抗原进行Westernblot,均出现与ts14-3-3.6多克隆抗体、囊虫病人血清及囊虫病猪血清反应条带,即均有该蛋白的表达。结论成功制备猪带绦虫ts14-3-3.6重组蛋白并获得较高纯度的特异性高效价多克隆抗体。ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴阶段均有表达。

关键词：猪带绦虫 ts14-3-3.6蛋白多克隆抗体制备表达

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