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trx-1在脓毒症内皮细胞铁死亡中的表达及作用研究

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Trx-1在脓毒症内皮细胞铁死亡中的表达及作用研究

作者：马大珍苏州大学

学位级别：硕士

目的脓毒症是宿主对感染的反应失调,可导致器官功能障碍。铁死亡以依赖于铁的活性氧(reactive oxygen species,ROS)累积和脂质过氧化为特征,最终导致细胞死亡。近年研究发现,硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,trx-1)不仅具有抗氧化作用,还被... 详细信息

目的脓毒症是宿主对感染的反应失调,可导致器官功能障碍。铁死亡以依赖于铁的活性氧(reactive oxygen species,ROS)累积和脂质过氧化为特征,最终导致细胞死亡。近年研究发现,硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,trx-1)不仅具有抗氧化作用,还被认为是一种抗炎分子,参与脓毒症的脂质过氧化过程。也有研究表明,脓毒症内皮细胞铁死亡与脂质过氧化有关。因此,本研究阐明trx-1是否通过参与脓毒症内皮细胞铁死亡从而减轻脓毒症。方法1.按照诊断标准,收集临床上诊断为脓毒症患儿和健康儿童的外周血。2.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定脓毒症患儿和健康儿童外周血中trx-1、白介素 1(interleukin-1 β,IL-1β)、白介素 6(IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrotic factor-a,TNF-a)、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。3.应用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)测定trx-lmRNA表达量。4.采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型,将动物随机分成3组:假手术组(sham组)、CLP组、铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)组。观察12小时后,取外周血制备血清,后续进行相关指标的检测。5.提取及培养小鼠原代内皮细胞。6.应用荧光探针技术测定内皮细胞内ROS及Fe2+的水平。7.采用试剂盒法测定内皮细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平。8.采用ELISA法检测CLP术后12小时各组小鼠外周血trx-1、ET-1及VEGF的表达9.数据分析:应用SPSS26.0软件进行统计分析,应用GraphPad Prism9.0软件进行图形绘制。结果1.脓毒症患儿trx-1、IL-1β、IL-6、TNF-a、ET-1、VEGF的表达水平显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(Ptrx-1的mRNA表达显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(P1预处理能够缓解这一过程,差异具有统计学意义(Ptrx-1、ET-1及VEGF含量升高,Fer-1组较CPL组降低,差异具有统计学意义(P1在脓毒症患儿外周血中高表达,trx-1可能成为诊断脓毒症的重要辅助检查指标。***-1通过脂质过氧化过程参与脓毒症内皮细胞铁死亡,可为脓毒症的诊疗方案提供新的理论依据。

关键词： trx-1 脓毒症铁死亡脂质过氧化

过表达trx-1通过调控Nrf2/HO-1通路影响帕金森病PC12细胞凋亡

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安徽医科大学学报 2020年第7期55卷 1079-1083页

作者：甘露周弟弥张磊陈琳南华大学附属第二医院神经内科衡阳421001

目的探讨过表达trx-1在帕金森病PC12细胞中通过调控Nrf2/HO-1通路对细胞凋亡的影响。方法用1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP^+)诱导PC12细胞建立帕金森病细胞模型。将pcDNA-htrx-1质粒转染至PC12细胞中,qRT-PCR检测trx-1 mRNA的表达。采用MT... 详细信息

目的探讨过表达trx-1在帕金森病PC12细胞中通过调控Nrf2/HO-1通路对细胞凋亡的影响。方法用1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP^+)诱导PC12细胞建立帕金森病细胞模型。将pcDNA-htrx-1质粒转染至PC12细胞中,qRT-PCR检测trx-1 mRNA的表达。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率以及细胞内活性氧水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素c(Cyt-c)、裂解Caspase-3(cleaved Caspase-3)和氧化应激相关蛋白Nrf2和HO-1的表达。结果trx-1在帕金森病PC12细胞中低表达;过表达trx-1能提高帕金森病PC12细胞活力,抑制细胞凋亡,并且能激活Nrf2/HO-1通路。结论过表达trx-1能通过激活Nrf2/HO-1通路进而抑制帕金森病PC12细胞的凋亡。

关键词： trx-1 帕金森疾病细胞凋亡 Nrf2/HO-1通路

trx-1和STAT-3在结直肠癌组织中的表达及相关性研究

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山西医科大学学报 2010年第7期41卷 594-598,664页

作者：牛桂军陈卓琳李西融唐澄海广西壮族自治区南溪山医院消化内科桂林541002

目的检测人结直肠癌组织中trx-1和STAT-3的表达,探讨二者之间的相关性。方法用免疫组织化学法分别检测60例结直肠癌和22例远癌正常大肠黏膜中trx-1和STAT-3的表达情况,并结合临床资料,对其进行分析。结果 trx-1和STAT-3均定位于细胞质... 详细信息

目的检测人结直肠癌组织中trx-1和STAT-3的表达,探讨二者之间的相关性。方法用免疫组织化学法分别检测60例结直肠癌和22例远癌正常大肠黏膜中trx-1和STAT-3的表达情况,并结合临床资料,对其进行分析。结果 trx-1和STAT-3均定位于细胞质和细胞核,trx-1在结直肠癌与正常大肠黏膜组织阳性率分别为78.33%与31.82%(免疫组化染色平均评分分别为4.03±1.92和1.42±1.20),二者间差异有统计学意义(P1);STAT-3在结直肠癌与正常大肠黏膜组织的阳性率分别为65.00%与27.27%(免疫组化染色平均评分分别为3.34±1.81和1.26±1.19),二者间差异有统计学意义(P1)。trx-1与STAT-3在低分化癌中比高分化者表达增强;二者的表达与淋巴结转移和TNM分级密切相关(P1)。trx-1和STAT-3在结直肠癌中的表达呈正相关(r=0.964,P1)。结论 trx-1和STAT-3在结直肠癌组织中过度表达,并与其发生发展有关,二者可能参与了结直肠癌恶化的调控。

关键词：结直肠癌 trx-1 STAT-3 蛋白表达

trx-1在肝细胞肝癌中的表达与临床病理特征及预后的相关性分析

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临床研究 2016年第7期24卷 8-9页

作者：冯稳张冰马艳英周进学 450003 河南省郑州大学附属肿瘤医院病理科 450003 河南省郑州大学附属肿瘤医院肝胆胰外科

目的分析trx-1在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达与临床病理特征及预后的相关性.方法选取59例HCC患者作为观察对象,收集患者的HCC组织、癌旁组织活检标本,应用免疫组化法(SP法)检测所有标本的trx-1表达水平,探讨trx-... 详细信息

目的分析trx-1在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达与临床病理特征及预后的相关性.方法选取59例HCC患者作为观察对象,收集患者的HCC组织、癌旁组织活检标本,应用免疫组化法(SP法)检测所有标本的trx-1表达水平,探讨trx-1表达与HCC临床病理特征、预后的关系.结果 59例HCC患者中,HCC组织的trx-1表达率为67.80％,癌旁组织的trx-1表达率为15.25％;两组数据具有显著性差异(P＜0.05);trx-1与HCC患者的年龄、病理分级、病灶直径具有相关性(P＜0.05),与性别、是否患有乙肝、肝硬化无相关性(P＞0.05).结论 trx-1在HCC中的表达具有特异性,表达水平显著高于癌旁组织,与年龄、病理分级、病灶直径具有相关性,为临床诊断HCC、评估疗效及预后而提供依据.

关键词：肝细胞肝癌 trx-1 临床病理特征预后

trx-1在脓毒症小鼠内皮细胞铁死亡中的表达

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中国血液流变学杂志 2023年第1期33卷 6-10页

作者：刘锋马大珍刘茜杨梅刘楠朱国际苏州大学附属儿童医院江苏苏州215003

目的研究脓毒症小鼠血管内皮细胞是否存在铁死亡以及硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,trx-1)在这一过程中的表达。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型。将动物随机分成3组:假手术组(Sham组)、CLP... 详细信息

目的研究脓毒症小鼠血管内皮细胞是否存在铁死亡以及硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,trx-1)在这一过程中的表达。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型。将动物随机分成3组:假手术组(Sham组)、CLP组、铁死亡抑制剂组(Fer-1组)。观察12h后,取外周血制备血清,采用ELISA法检测各组小鼠外周血中trx-1、血管内皮生长因子(VEGF)及内皮素-1(ET-1)的表达。提取及培养小鼠原代内皮细胞,应用荧光探针技术测定内皮细胞内Fe^(2+)及ROS的水平,试剂盒法测定内皮细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平。结果与Sham组相比,CLP组内皮细胞内GSH含量降低,Fe^(2+)、ROS、MDA含量升高,Fer-1预处理能够缓解这一过程;与Sham组相比,CLP组trx-1、ET-1及VEGF含量升高,Fer-1组较CLP组降低。结论脓毒症小鼠内皮细胞存在铁死亡,trx-1在脓毒症铁死亡中高表达。

关键词： trx-1 脓毒症内皮细胞铁死亡

血清硫氧还蛋白-1水平与幽门螺杆菌感染及胃黏膜病理改变的相关性研究

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中国全科医学 2012年第26期15卷 3015-3017页

作者：郁海静丁士刚张静杨雪玲刘琳娜王晔北京大学第三医院消化科北京市100191

目的探讨血清硫氧还蛋白(trx-1)水平与幽门螺杆菌(***)感染及胃黏膜病理改变的关系,进一步明确其临床意义。方法选择2009年4—7月于北京大学第三医院进行胃镜检查的患者116例,于胃镜检查前抽血检测血清trx-1水平,同时检测血清***抗体。... 详细信息

目的探讨血清硫氧还蛋白(trx-1)水平与幽门螺杆菌(***)感染及胃黏膜病理改变的关系,进一步明确其临床意义。方法选择2009年4—7月于北京大学第三医院进行胃镜检查的患者116例,于胃镜检查前抽血检测血清trx-1水平,同时检测血清***抗体。检测方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法。所有患者进行胃镜检查时于胃窦和胃体分别钳取至少一块组织进行病理组织学HE染色及Warthin-Starry染色。结果***阳性患者血清trx-1水平(9.45 ng/ml)高于***阴性患者(8.99 ng/ml),但差异无统计学意义(U=1 488.000,P=0.775)。慢性浅表性胃炎(CSG)患者血清trx-1水平(8.98 ng/ml)低于慢性萎缩性胃炎(CAG)患者(10.40 ng/ml),但差异无统计学意义(u=1 068.000,P=0.641)。无论在CSG还是CAG患者,***感染与否对血清trx-1水平影响间差异均无统计学意义(P值分别为0.475和0.423)。男性患者血清trx-1水平(8.24ng/ml)低于女性患者(10.27 ng/ml),差异有统计学意义(P=0.044)。结论 ***感染与否对血清trx-1水平无影响,在胃黏膜不同炎性状态下,以及不同炎性状态下***感染与否,血清trx-1水平没有差异,性别对血清trx-1水平可能有影响。

关键词：幽门螺杆菌 trx-1 慢性浅表性胃炎慢性萎缩性胃炎性别

硫氧还蛋白T100磷酸化对trx-TXNIP互作能力的影响

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硫氧还蛋白T100磷酸化对Trx-TXNIP互作能力的影响

作者：张小骥武汉工程大学

学位级别：硕士

硫氧还蛋白(Thioredoxin,trx/TXN)是一种广泛存在于细胞内、大小约为12KD的蛋白,它含有二硫键活性中心Cys-Gly-Pro-Cys。trx在细胞内信号转导以及氧化应激导致的细胞凋亡中都起着很重要的作用。trx在肿瘤细胞中的表达量会异常增高,这会... 详细信息

硫氧还蛋白(Thioredoxin,trx/TXN)是一种广泛存在于细胞内、大小约为12KD的蛋白,它含有二硫键活性中心Cys-Gly-Pro-Cys。trx在细胞内信号转导以及氧化应激导致的细胞凋亡中都起着很重要的作用。trx在肿瘤细胞中的表达量会异常增高,这会促进细胞增殖,使肿瘤细胞对抗肿瘤药物表现出耐药性。trx第100位苏氨酸的磷酸化受到抑制或突变会导致肝癌细胞HepG2对顺铂和阿霉素的耐药性下降,但其作用机理目前尚不清楚。硫氧还蛋白结合蛋白(Thioredoxin Interacting Protein,TXNIP/TBP-2)是trx的内源性抑制物,能与氧化型trx结合抑制其活性,减少trx与其他胞内物质结合,从而影响细胞内信号。在肿瘤细胞中TXNIP的表达量减少或缺失,导致对trx的抑制作用减弱。trx的磷酸化是否会影响trx-TXNIP的结合能力,目前未见到相关报道,若trx无法磷酸化会使trx更多的与TXNIP结合,则trx活性降低,这将会有助于抗癌药物发挥药效。为此进行了如下研究:1)构建了真核表达载体pEGFP-c1-6His-trx以及pEGFP-c1-6His-mtrx,突变型的mtrx-1指的是trx-1第100位苏氨酸发生了突变,变成了丙氨酸,从而无法磷酸化。通过瞬时转染将两种质粒分别转染进入Hela细胞中,成功表达出了含trx-1的融合蛋白。2)通过摸索电穿孔转染条件中的电压、脉冲时间、质粒浓度、电击次数,用以确定最佳转染条件,使pEGFP-c1-6His-trx以及pEGFP-c1-6His-mtrx能在Hela细胞中高效表达。3)研究转染了两种质粒的细胞总蛋白中trx-1与TXNIP的含量以及相互作用能力的强弱。4)提取两种细胞核蛋白,将trx-1作为目的蛋白通过免疫共沉淀,比较两种细胞在核内的trx-1与TXNIP相互作用能力的变化。5)用一定浓度的H2O2刺激两种细胞并提取细胞核蛋白,比较核内trx-1与TXNIP相互作用能力的变化。6)加入磷酸酶抑制剂U0126(MEK1/2抑制剂),抑制细胞内蛋白磷酸化,比较核内trx-1与TXNIP相互作用能力的变化。以上实验可以得到以下结论:转染了pEGFP-c1-6His-trx的野生型细胞与转染了pEGFP-c1-6His-mtrx的突变型细胞中,在细胞总蛋白中,还原型的trx-1含量高于氧化型的trx-1。TXNIP只与氧化态trx-1结合,且氧化态trx-1含量越高,结合的TXNIP越多。由于trx-1的突变,导致trx-1更多的以无活性的氧化态存在,且突变型中氧化态trx-1与TXNIP的结合能力弱于野生型中trx-1与TXNIP的结合能力。在野生型与突变型的核蛋白中,trx-1的含量基本相同,而突变型中TXNIP的含量高于野生型。且突变型细胞核蛋白中氧化态trx-1高于野生型。加入了H2O2后,野生型细胞核蛋白内还原形态的trx-1多余突变型。由于磷酸化抑制剂的作用,野生型和突变型细胞核蛋白中trx-1-TXNIP的相互作用区别不明显。

关键词： trx-1 TXNIP 磷酸化免疫共沉淀

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硫氧还蛋白-1在胃癌中表达及意义

中国卫生检验杂志 2011年第10期21卷 2460-2462页

作者：吴怡春禇美芬郭剑民徐笑红浙江医学高等专科学校杭州310053 浙江省肿瘤医院杭州310022

目的:探讨trx-1基因表达水平与胃癌临床病理特征的关系。方法:利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测23例胃癌及相应癌旁组织中trx-1基因的表达情况并将结果与临床资料进行统计分析。结果:trx-1在23例胃癌组织中相对表达量(1.15±0.62)明... 详细信息

目的:探讨trx-1基因表达水平与胃癌临床病理特征的关系。方法:利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测23例胃癌及相应癌旁组织中trx-1基因的表达情况并将结果与临床资料进行统计分析。结果:trx-1在23例胃癌组织中相对表达量(1.15±0.62)明显高于癌旁组织(0.80±0.20)(P1)。胃癌组织中trx-1 mRNA表达量与性别、分化程度、肿瘤大小无关,其在Ⅲ期胃癌中的表达量相对于Ⅰ、Ⅱ期胃癌以及在淋巴结转移的患者中表达量比未转移的患者略有增强趋势,但无统计学差异。结论:trx-1在胃癌中高表达,参与了胃癌的发生发展过程。

关键词： trx-1 胃癌

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硒多糖抗肝细胞癌效应与硫氧还蛋白1的关系

中国老年学杂志 2020年第13期40卷 2870-2872页

作者：张宁邱佳张安龑宫路路遵义医药高等专科学校贵州遵义563000 遵义医科大学第二附属医院

目的探讨硒多糖抗肝细胞癌(HCC)效应与硫氧还蛋白(trx)-1的关系。方法设置0、50、100、200和400μg/ml共计5组浓度梯度,利用MTT细胞毒活性检测法在细胞水平研究硒多糖对HepG2细胞活力的影响;在分子水平,使用Western印迹检测硒多糖对HepG... 详细信息

目的探讨硒多糖抗肝细胞癌(HCC)效应与硫氧还蛋白(trx)-1的关系。方法设置0、50、100、200和400μg/ml共计5组浓度梯度,利用MTT细胞毒活性检测法在细胞水平研究硒多糖对HepG2细胞活力的影响;在分子水平,使用Western印迹检测硒多糖对HepG2细胞内trx-1表达的影响,并进一步检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达。结果硒多糖200μg/ml、400μg/ml组的细胞活力较其他浓度显著下降(Ptrx-1表达量显著降低(Ptrx-1的表达诱导HepG2细胞发生凋亡从而抑制HepG2细胞的生长。

关键词：肝细胞癌硒多糖 trx-1 细胞凋亡