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trx、trxR-1及TXNIP在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

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Trx、TrxR-1及TXNIP在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

作者：黄云霞宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的硫氧还蛋白系统在肿瘤的发生和进展过程中具有重要作用,而在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达尚未见报道。本文探讨了该系统中硫氧还蛋白(trx)、硫氧还蛋白还原酶1(trxR-1)及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)在DLBCL中的表达及临床意... 详细信息

目的硫氧还蛋白系统在肿瘤的发生和进展过程中具有重要作用,而在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达尚未见报道。本文探讨了该系统中硫氧还蛋白(trx)、硫氧还蛋白还原酶1(trxR-1)及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)在DLBCL中的表达及临床意义。方法1.通过TIMER数据库和GEPIA数据库分析trx、trxR-1及TXNIP的编码基因(TXN、TXNRD1及TXNIP)在包括DLBCL的多种肿瘤中的表达情况。2.为评估TXN、TXNRD1及TXNIP基因在DLBCL进展过程的潜在机制,在UALCAN数据库中分析TXN、TXNRD1及TXNIP的正相关基因,并通过R软件进行GO与KEGG通路富集分析。3.收集2017年1月～2021年6月甘肃省人民医院石蜡组织标本共80例,其中包含DLBCL60例为实验组,淋巴结反应性增生20例为对照组,通过免疫组织化学法测定两组中trx、trxR-1及TXNIP的表达水平,并分析trx、trxR-1及TXNIP的表达与DLBCL患者临床病理特征的关系。结果生物信息学分析结果显示,TXN、TXNRD1在包括DLBCL的多种肿瘤中呈显著高表达,而TXNIP则明显呈低表达;基于UALCAN数据库中基因的相关性分析研究,共获得与TXN、TXNRD1及TXNIP正相关的1046个基因,并通过GO及KEGG富集分析,发现这些基因主要与组蛋白修饰、大自噬和蛋白质酰化等生物学过程有关,可能是通过核质转运、有丝分裂和铁死亡等途径实现对上述生物学过程的调控作用。免疫组化结果显示,trx和trxR-1在DLBCL中的阳性表达率分别为68.33%(41/60)与76.67%(46/60),淋巴结反应性增生组织中trx和trxR-1的阳性表达率分别为25.00%(5/20)与35.00%(7/20),trx和trxR-1在DLBCL中的阳性率明显高于淋巴结反应性增生组(Ptrx和trxR-1在DLBCL中的表达水平与患者的临床分期、B症状、IPI评分有关(P0.05);TXNIP的表达仅与DLBCL患者的临床分期和IPI评分有关(Ptrx与trxR-1在DLBCL中明显呈高表达,提示trx与trxR-1可能参与了DLBCL的发生和发展过程。***与trxR-1的表达均与DLBCL患者的临床分期、B症状及IPI评分有关,提示trx与trxR-1的表达可能与患者预后不良相关。3.与淋巴结反应性增生组织相比,TXNIP在DLBCL中明显呈低表达,且TXNIP的表达与DLBCL患者的临床分期和IPI评分有关。

关键词： DLBCL trx trxR-1 TXNIP 免疫组化

trx单抗的制备及其在丙肝桥式双抗原夹心法中的初步应用

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TRX单抗的制备及其在丙肝桥式双抗原夹心法中的初步应用

作者：张公正郑州大学

学位级别：硕士

丙型肝炎是感染丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)引起的传染性疾病。全球估计约1.7亿人感染HCV，中国感染人数约有3700万。部分HCV感染者将发展成为慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌。因此，HCV的早期诊断显得尤为重要。HCV的实验室诊... 详细信息

丙型肝炎是感染丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)引起的传染性疾病。全球估计约1.7亿人感染HCV，中国感染人数约有3700万。部分HCV感染者将发展成为慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌。因此，HCV的早期诊断显得尤为重要。HCV的实验室诊断方法主要有：抗-HCV检测、HCVAg检测、重组免疫印迹分析(RIBA)、HCV RNA检测等。其中，抗HCV检测试剂应用最为广泛。目前主流的第三代抗HCV检测试剂均采用间接ELISA，而间接ELISA普遍存在假阳性和漏检的问题。与常规抗-HCV检测方法相比，双抗原夹心ELISA法可大大提高检测的特异性和敏感性。不但能检测到IgG抗体，而且还能够检测到早期出现的IgM抗体。然而双抗原夹心ELISA试剂迄今尚未研制成功。其原因在于HCV抗原经酶标记后，形成空间位阻，阻碍了抗体与抗原的结合。因此，直接标记抗原用于建立双抗原夹心ELISA不容易成功。硫氧还蛋白(thioredoxins，trx)是分子量为12kDa的小分子蛋白质，可在大肠杆菌中高度表达并具有高度亲水性，能为丙肝抗原可溶性表达提供所必需的信号。据此制备出HCVAg-trx融合蛋白，若再以trx作为桥蛋白，制备桥蛋白的单克隆抗体，用辣根过氧化物酶(HRP)标记。则由于桥蛋白及单抗的存在，标记的酶将不再阻碍抗原抗体的结合，能够较好地解决位阻的问题。目的本课题针对现有丙型肝炎诊断试剂的缺陷，通过表达、纯化trx(桥蛋白);制备trx(桥蛋白)单克隆抗体，进行生物学鉴定。用辣根过氧化物酶(HRP)标记，为研制丙肝双抗原夹心ELISA试剂奠定基础。方法***的表达、纯化将含有trx基因的大肠杆菌经IPTG诱导表达4小时，收集菌体，冰浴下超声破菌，用亲和层析法纯化目的蛋白，12％SDS-PAGE鉴定。2．杂交瘤细胞株的研制以纯化trx为抗原免疫8周龄的雌性BALB／c小鼠，三次免疫后，取免疫鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞以6:1的比例融合。在HAT选择培养基中选择培养，用间接ELISA法筛选阳性细胞，有限稀释法克隆和亚克隆，筛选出单克隆细胞株。3．单克隆抗体的制备腹腔接种杂交瘤细胞，7-10天后采集腹水，并用正辛酸法以及离子层析纯化，10％SDS-PAGE鉴定。4．杂交瘤细胞及单克隆抗体的鉴定用秋水仙素阻抑法使细胞阻滞于分裂中期，显微镜下观察，染色体计数，对杂交瘤细胞株进行染色体分析;采用间接ELISA测定单抗腹水效价、单抗相对亲和力;采用间接ELISA和双向免疫扩散法鉴定免疫球蛋白类型及亚类;以改良过碘酸钠法制备酶标抗体并作偶联物免疫活性的测定;以阻断抑制法作trx单抗识别抗原表位的测定。***单抗与丙肝融合抗原(HCVAg-trx)反应测定以间接ELISA法和Western blotting鉴定单克隆抗体与丙肝融合抗原(HCVAg-trx)的特异性反应。结果***的表达、纯化结果12％SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到了高表达，分离效果较好，纯度达到95％。2．杂交瘤细胞株的研制获得2株能稳定分泌抗trx单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为2E8、5D6。3．单克隆抗体的制备经紫外分光光度计测定计算，2E8、5D6单抗的浓度分别为1.55mg／mL、0.839 mg／mL。10％SDS-PAGE结果显示：纯化单抗样品在分子量约为150KD的位置出现有明显的电泳条带，为目的条带，纯度达到80％。4．杂交瘤细胞及单克隆抗体的鉴定(1)2E8、5D6的染色体平均条数分别为98、102，符合杂交瘤细胞染色体数约等于小鼠脾细胞和SP2／0骨髓瘤细胞染色体条数之和的理论值，由此证明所制备的细胞为杂交瘤细胞。(2)两株单抗腹水的效价均为1:10～7;相对亲和力分析表明：5D6的相对亲和力高于2E8。(3)两株单抗均为IgG类，IgG1亚类。(4)2E8酶标抗体的免疫活性达到1:100×2～5，5D6酶标抗体达1:100×2～6。(5)2E8和5D6两株单抗相互阻断，证明两者识别的抗原表位显著相关。***单抗与重组丙肝抗原(HCVAg-trx)反应两株单抗均能与trx及HCVAg-trx发生特异性结合，而不与无关蛋白IFN-γ

关键词： trx 单克隆抗体丙型肝炎病毒 ELISA

FGF-2和trx在非小细胞肺癌中的表达及临床病理学意义

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中国现代医学杂志 2010年第10期20卷 1461-1465页

作者：刘玮邓征浩周建华李婷傅春燕高振芹陈晨中南大学湘雅医学院病理学系湖南长沙410078

目的探讨成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)和硫氧还蛋白(trx)在非小细胞肺癌(NSCL)组织中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SP法分析76例非小细胞肺癌组织、15例非肺癌肺组织中FGF-2和trx蛋白的表达水平。采用Western印迹、RT-PCR方... 详细信息

目的探讨成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)和硫氧还蛋白(trx)在非小细胞肺癌(NSCL)组织中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SP法分析76例非小细胞肺癌组织、15例非肺癌肺组织中FGF-2和trx蛋白的表达水平。采用Western印迹、RT-PCR方法检测外源性FGF-2对人肺腺癌细胞株A549中trx蛋白及mRNA表达水平的影响。结果非小细胞肺癌组织中FGF-2和trx阳性率分别为65.8%(50/76)和72.3%(55/76),显著高于非肺癌肺组织(Ptrx阳性表达与淋巴结转移、临床分期密切相关(P0.05)。两者表达在NSCLC中呈正相关(Ptrx蛋白和mRNA的表达。结论 FGF-2和trx在非小细胞肺癌发生与发展中具有重要作用,FGF-2可能通过trx促进肺癌的发生与发展。

关键词： FGF-2 trx 非小细胞肺癌 A549细胞

弥漫大B细胞淋巴瘤中trx、trxR-1及TXNIP的表达及临床意义

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临床与实验病理学杂志 2022年第4期38卷 443-447页

作者：黄云霞时杜娟蒙玉娜马淑萍党春艳李红玲宁夏医科大学银川750000 甘肃省人民医院肿瘤内科兰州730000

目的探讨硫氧还蛋白(trx)、硫氧还蛋白还原酶1(trxR-1)及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测60例DLBCL和20例淋巴结反应性增生组织中trx、... 详细信息

目的探讨硫氧还蛋白(trx)、硫氧还蛋白还原酶1(trxR-1)及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测60例DLBCL和20例淋巴结反应性增生组织中trx、trxR-1及TXNIP的表达,并分析三者表达与DLBCL临床病理特征的关系。结果DLBCL中trx和trxR-1的阳性率分别为68.33%和76.67%,淋巴结反应性增生组织中trx和trxR-1的阳性率分别为25.00%、35.00%,DLBCL中trx和trxR-1的阳性率均明显高于淋巴结反应性增生组织,差异有统计学意义(Ptrx、trxR-1和TXNIP的表达与临床分期、IPI评分有关(P0.05)。ROC结果显示,trx、trxR-1单项检测曲线下面积(AUC)分别为0.717与0.708,而两者联合检测AUC为0.767,高于单独检测。结论trx、trxR-1及TXNIP表达异常可能与DLBCL发生、发展有关,联合检测trx和trxR-1表达可为DLBCL的诊断提供参考价值。

关键词：淋巴瘤弥漫大B细胞淋巴瘤 trx trxR-1 TXNIP 免疫组织化学

糖尿病大鼠肾组织Nrf2、trx的表达及金属硫蛋白对其干预作用的研究

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糖尿病大鼠肾组织Nrf2、Trx的表达及金属硫蛋白对其干预作用的研究

作者：陈洁河北医科大学

学位级别：硕士

目的：本课题拟建立1型糖尿病大鼠模型，测定大鼠肾组织中氧化应激指标丙二醛（MDA）含量及总抗氧化能力（T-AOC）活性，应用免疫组织化学、反转录PCR等方法检测肾组织的Nrf2、trx表达情况，并给予金属硫蛋白（metallothionein,MT)干预... 详细信息

目的：本课题拟建立1型糖尿病大鼠模型，测定大鼠肾组织中氧化应激指标丙二醛（MDA）含量及总抗氧化能力（T-AOC）活性，应用免疫组织化学、反转录PCR等方法检测肾组织的Nrf2、trx表达情况，并给予金属硫蛋白（metallothionein,MT)干预，探讨糖尿病大鼠肾脏是否存在氧化应激状态及金属硫蛋白的干预效果，以其延缓肾损伤的发生发展。为人类糖尿病肾脏损伤的防治提供试验性的理论依据。糖尿病时机体处于氧化应激状态，其脂质过氧化产物增多，细胞抗氧化能力下降。Nrf2-ARE通路是机体最重要的抗氧化应激通路之一。核因子EF-E2相关因子（Nrf2）在受到活性氧(ROS)的刺激时通过与ARE作用元件相结合，启动下游保护性基因蛋白转录，其中包括硫氧还蛋白（trx）、醌氧化还原酶（NQO1）、血红素氧合酶1(heine oxygen ase1，HO-1)等，提高机体抗氧化能力，减少氧化应激损伤。方法：选择SPF级雄性大鼠48只，体重约180～220g，（购自河北医科大学动物中心），先适应性喂养1周后，空腹12小时，随机分为正常对照组(NC组，n=12)、糖尿病模型组(DM组，n=12)、糖尿病金属硫蛋白高剂量治疗组(MTH组，n=12)、糖尿病金属硫蛋白低剂量治疗组(MTL组，n=12)。其中DM组、MTH组、MTL组大鼠给予腹腔注射链脲佐菌素(65mg/k g)制备糖尿病大鼠模型, NC组则给予等量的柠檬酸缓冲液。72h后检测血糖，血糖≥16.7mmol/L视为糖尿病模型制备成功。MTH组大鼠给予0.5mg／k g MT灌胃，MTL组大鼠给予0.1mg／k g MT灌胃，NC组、DM组每天给予等量的生理盐水灌胃。分别于造模成功后6周、12周末，每组任取6只大鼠，测定24h尿蛋白(24hUP)、血肌酐、尿素氮。并收集肾组织标本，制作组织切片，在显微镜下观察苏木素伊红（HE）染色及糖原染色（PAS）的大鼠肾组织病理变化，检测肾脏丙二醛(MDA)含量、T-AOC活性，免疫组化方法检测Nrf2、trx的表达，RT-PCR法检测Nrf2、trxmRNA表达。实验所得数据用均数±标准差(x±S)表示，应用SPSS19.0统计分析软件对数据进行单因素方差分析，不满足正态性和方差齐性的数据资料采用非参数检验，以ptrx表达

关键词：糖尿病肾病金属硫蛋白氧化应激 Nrf2 trx

长期耐力运动对衰老大鼠骨骼肌细胞凋亡及trx系统的影响

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长期耐力运动对衰老大鼠骨骼肌细胞凋亡及Trx系统的影响

作者：鲍粉苗太原理工大学

学位级别：硕士

研究目的:骨骼肌是决定人体运动能力最重要的器官。骨骼肌衰减症会导致骨骼肌力量衰减及功能逐渐降低,严重威胁老年个体的身心健康。而运动能延缓骨骼肌衰老。因此,本研究采用动物实验法,探讨增龄过程中耐力运动对大鼠腓肠肌指数、凋亡... 详细信息

研究目的:骨骼肌是决定人体运动能力最重要的器官。骨骼肌衰减症会导致骨骼肌力量衰减及功能逐渐降低,严重威胁老年个体的身心健康。而运动能延缓骨骼肌衰老。因此,本研究采用动物实验法,探讨增龄过程中耐力运动对大鼠腓肠肌指数、凋亡相关蛋白和trx系统的影响,为体育运动防治骨骼肌衰减症提供理论依据。研究方法:选取健康青年(3月龄)、中年(9月龄)、老年(18月龄)雄性Spraque Dawley大鼠随机分为:青年对照组(YC)、青年运动组(YE)、中年对照组(MC)、中年运动组(ME)、老年对照组(OC)和老年运动组(OE),每组6只。青年对照组、中年对照组和老年对照组大鼠不进行运动干预,青年运动组、中年运动组和老年运动组大鼠熟悉运动跑台后,进行速度为15 m/min,每天45min,坡度为0°的跑台运动,每周运动5天,为期10周。负荷强度对21月龄大鼠来说相当于60%～75%VO。干预结束后测定大鼠的体重、右侧腓肠肌质量、腓肠肌指数、抓力和耐力。采用TUNEL测定骨骼肌细胞凋亡的情况。采用胰岛素还原法测定骨骼肌组织中的trx活性。采用试剂盒检测骨骼肌组织中的TR活性。通过Western Blot方法测定骨骼肌组织中Bax、Bcl-2、trx1、trx2、TR1、TR2、TXNIP的蛋白表达。通过real-time PCR法检测骨骼肌组织中trx1、trx2、TR1、TR2、TXNIP的基因水平。使用SPSS 26.0和Graph Pad prism 8.0进行统计分析和图表绘制。研究结果:(1)大鼠体重、腓肠肌指数结果:(1)随着年龄增加,大鼠体重升高;耐力运动后ME组与MC组相比大鼠体重显著降低(Ptrx系统结果:(1)trx活性,随着年龄增加,大鼠骨骼肌trx活性降低;耐力运动后YE组与YC组相比、ME组与MC组相比、OE组与OC组相比大鼠骨骼肌trx活性显著升高(Ptrx系统蛋白表达,随着年龄增加,大鼠骨骼肌trx1、trx2、TR1、TR2蛋白表达降低;耐力运动后YE组与YC组相比、ME组与MC组相比、OE组与OC组相比大鼠骨骼肌trx1、trx2、TR1、TR2蛋白表达显著升高。(4)trx系统基因水平,随着年龄增加,大鼠骨骼肌trx1、trx2、TR1、TR2 m RNA水平无显著性差异;耐力运动后YE组与YC组相比、ME组与MC组相比、OE组与OC组相比大鼠骨骼肌trx1、trx2、TR1、TR2m RNA水平显著升高。(5)大鼠骨骼肌TXNIP结果:(1)TXNIP蛋白表达,随着年龄增加,大鼠骨骼肌TXNIP蛋白表达升高;耐力运动后YE组与YC组相比、ME组与MC组相比、OE组与OC组相比大鼠骨骼肌TXNIP蛋白表达显著降低(P<0.01)。(2)TXNIP基因水平,随着年龄增加,大鼠骨骼肌TXNIP m RNA水平无显著性差异;耐力运动后YE组与YC组相比、OE组与OC组相比大鼠骨骼肌TXNIP m RNA水平显著下降(P<0.01),ME组与MC组相比大鼠骨骼肌TXNIP m RNA水平显著下降(P<0.05)。研究结论:(1)随着年龄的增加,衰老大鼠骨骼肌质量下降,抓力和耐力降低,细胞凋亡明显增加。10周耐力运动能缓减衰老大鼠骨骼肌质量及力量下降,缓减衰老骨骼肌细胞凋亡。(2)随着年龄的增

关键词：骨骼肌衰减症耐力运动凋亡 trx TXNIP

FGF-2和trx在非小细胞肺癌中的表达及临床病理学意义

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FGF-2和TRX在非小细胞肺癌中的表达及临床病理学意义

作者：刘玮中南大学

学位级别：硕士

背景与目的：当前,肺癌已经成为发病率和死亡率极高的恶性肿瘤之一。全球肺癌的发病人数每年以22%的速度上升,新增肺癌患者达140万人,其中约80～85%为非小细胞性肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。许多研究显示FGF-2,即碱性成... 详细信息

背景与目的：当前,肺癌已经成为发病率和死亡率极高的恶性肿瘤之一。全球肺癌的发病人数每年以22%的速度上升,新增肺癌患者达140万人,其中约80～85%为非小细胞性肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。许多研究显示FGF-2,即碱性成纤维细胞生长因子(Basic Fibroblast Growth Factor, bFGF)在多种肿瘤组织中能抑制瘤细胞凋亡。前期对小细胞性肺癌凋亡抑制机制的研究表明,FGF-2能显著上调凋亡抑制作用最强的Survivin蛋白表达,且trx可能参与了FGF-2抑制小细胞性肺癌凋亡作用。硫氧还蛋白(Thioredoxin,trx)是一个分布广泛的氧化还原蛋白。研究表明：trx可以抑制肿瘤细胞凋亡。FGF-2是否存在另一途径即通过诱导非小细胞肺癌中trx的表达来达到抑制肿瘤细胞凋亡的,目前国内外尚未见报道。在NSCLC组织中FGF-2和trx的表达是否有相关性以及FGF-2和trx在非小细胞肺癌组织中表达的临床意义等目前国内外也未见文献报道。本研究拟采用免疫组织化学方法(S-P法)检测NSCLC中FGF-2和trx的表达特征,探讨FGF-2和trx两者与非小细胞肺癌的发生、发展和侵袭转移的相关性;采用Western blot、RT-PCR检测外源性FGF-2对人肺腺癌细胞株A549中trx蛋白及mRNA表达水平的影响,进一步从分子水平上来探讨它们之间的相互关系。材料和方法：(1)应用免疫组织化学SP法分析76例非小细胞肺癌组织、15例非肺癌肺组织中FGF-2和trx蛋白的表达水平。(2)体外培养人肺腺癌细胞株A549,采用Western blot、RT-PCR检测外源性FGF-2对人肺腺癌细胞株A549中trx蛋白及mRNA表达水平。结果：(1)FGF-2蛋白阳性信号主要定位于癌细胞胞浆,在76例NSCLC组织中,50例表达阳性,阳性率为65.8%(50/76);15例非肺癌肺组织中2例表达阳性,阳性表达率为13.3%(2/15);两者差异有显著性(Ptrx阳性信号主要定位于癌细胞胞浆,在76例NSCLC组织中,55例trx蛋白表达阳性,阳性率为72.3%(55/76);15例非肺癌肺组织中有4例trx蛋白表达阳性,阳性表达率为26.7%(4/15);两者比较差异显著(Ptrx在有淋巴结转移组阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(Ptrx的表达与NSCLC的病理分型、年龄、性别无关。(3)76例非小细胞肺癌中FGF-2与trx同时阳性表达者45例,FGF-2阳性而trx阴性者5例,FGF-2阴性而trx阳性者10例,二者均阴性者16例, FGF-2与trx表达呈正相关(Ptrx mRNA有一定的基础表达。经75ng/ml FGF-2处理4h后,RT-PCR结果显示,与对照组比较,FGF-2刺激组trx的表达增加(Ptrx蛋白有一定的基础表达。经75ng/ml FGF-2处理4h后,Western blot结果显示,与对照组比较,FGF-2刺激组trx的表达增加(Ptrx在非小细胞肺癌发生发展中具有重要作用。(2)FGF-2可能通过trx促进肺癌的发生、发展。

关键词： FGF-2 trx 非小细胞肺癌

HPV16 E6介导trx激活NF-κB信号通路上调肺癌细胞中GLUT1的表达

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HPV16 E6介导TRX激活NF-κB信号通路上调肺癌细胞中GLUT1的表达

作者：高子娱中国医科大学

学位级别：硕士

目的:人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是一种小DNA病毒,其感染可以引起人类多种疾病,然而,一过性的HPV感染并不能导致肿瘤的发生,因为大多数HPV感染的患者均经过短暂的上皮细胞异常改变后自愈,因此,长期持续性的高危型HPV感染... 详细信息

目的:人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是一种小DNA病毒,其感染可以引起人类多种疾病,然而,一过性的HPV感染并不能导致肿瘤的发生,因为大多数HPV感染的患者均经过短暂的上皮细胞异常改变后自愈,因此,长期持续性的高危型HPV感染可能是肿瘤发生的始动因素,其中以高危型HPV16病毒感染最为常见,HPV16中的E6和E7蛋白是肺癌发生发展中的主要致癌基因,E6蛋白对抑癌基因p53有抑制作用,而E7蛋白对抑癌基因pRb起抑制作用。然而HPV16所致肺癌的机制尚不清楚。有报道称,硫氧还蛋白(thioredoxin,trx)与抑癌基因p53之间存在着调控关系。trx可以调控NF-ΚB的活性,在呼吸道上皮细胞中trx可以诱导p65的去亚硝基化,进而激活NF-ΚB信号通路。另有报道,在包皮上皮细胞中,HPV16E6对NF-ΚB信号通路有激活作用。NF-κB信号通路的激活与肿瘤的发展有密切关联。近来有报道,NF-ΚB信号通路的激活可以通过促进葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)的膜定位来促进瓦博格效应,进而促进肿瘤的发展。HPV对NF-ΚB的激活是否通过trx目前还不清楚,我们的前期研究已经证实在非小细胞肺癌中HPV16的感染能使GLUT1的表达增高,但是具体机制尚不清楚。我们的研究目的是揭示E6、E7、trx、p65、GLUT1在肺癌细胞中的调控关系,为非小细胞肺癌的早期诊断和治疗提供新的策略。研究方法:本研究中,我们双向调控E6、E7、trx,使用Western blot检测trx、p65、GLUT1的蛋白表达变化;在肺腺癌细胞系A549中,下调p65,检测GLUT1的蛋白表达。利用免疫荧光检测p65在细胞中的分布与E6,trx的关系。结果:在H1299细胞系中过表达E6,明显上调trx的蛋白表达,进而上调p65、glut1的表达;在A549和SK细胞系中抑制E6,明显下调trx的蛋白表达,进而使p65,GLUT1的表达下降;在H1299细胞系中过表达E7或在A549、SK细胞系中抑制E7,trx的表达均不受影响,而GLUT1的蛋白表达水平会受E7的影响,E7上调,GLUT1的表达也会增加,E7受抑制,GLUT1的表达也会下降;在H1299细胞系过表达trx明显上调p65的蛋白表达;在A549或SK细胞系中抑制trx的表达,明显下调p65、GLUT1的蛋白表达。在A549细胞系中下调p65的表达,GLUT1的蛋白表达明显下降。另外在H1299细胞系中分别上调E6与trx的表达,可以观察到p65的核内表达增加。结论:HPV 16 E6/E7只有长期持续性感染才能上调GLUT1的表达进而在HPV相关性肺癌细胞中发挥主要作用。E6上调肺癌细胞中glut1的表达可能是通过上调trx进而促进p65的入核而增加GLUT1的转录而实现的。而E7虽能促进GLUT1的表达,但其机制与E6不同,具体机制有待后续研究。

关键词： E6 E7 trx p65 GLUT1 NSCLC

乌司他丁对CLP大鼠心肌组织中trx和ASK1表达的影响

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乌司他丁对CLP大鼠心肌组织中TRX和ASK1表达的影响

作者：邱梓峰佳木斯大学

学位级别：硕士

目的:构建CLP脓毒症大鼠模型,观察乌司他丁干预对模型大鼠血清炎性因子表达水平的影响及其与心肌组织trx和ASK1相互作用的关系,以及是否能够对大鼠心肌细胞凋亡和心肌损伤产生影响。方法:以随机数字表法将32只SD大鼠分为四组:正常对照... 详细信息

目的:构建CLP脓毒症大鼠模型,观察乌司他丁干预对模型大鼠血清炎性因子表达水平的影响及其与心肌组织trx和ASK1相互作用的关系,以及是否能够对大鼠心肌细胞凋亡和心肌损伤产生影响。方法:以随机数字表法将32只SD大鼠分为四组:正常对照组、假手术组、CLP脓毒大鼠组、乌司他丁组,其中CLP模型组及乌司他丁组均为CLP术所构建的脓毒症模型大鼠,假手术组仅施加麻醉及盲肠暴露,正常对照组进行正常的饮食照护。通过尾压法和心率监护仪测量不同时间点大鼠的血压及心率,通过ELISA检测大鼠血清学相关因子TNF-α、IL6、c Tn I、CK-MB的表达,通过CO-IP技术分析trx和ASK1的作用关系,最后,通过制取大鼠心肌组织的石蜡切片并予以HE染色观察不同组别大鼠心肌细胞的病理学变化。结果:1.一般资料对比:术前四组大鼠的体重、日龄、体温、呼吸、心率、血压的一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.血流动力学指标的测试结果:心率变化情况:较于其他三组大鼠,CLP模型组大鼠的心率在术后6h开始明显上升(P0.05)。收缩压变化情况:较于其他三组大鼠,CLP模型组大鼠的收缩压在术后12h开始明显下降(P0.05)。3.血清学指标检测结果:相比与其他三组,CLP模型组大鼠血中的TNF-a、IL-6、c Tn I、CK-MB等四个指标均明显上升(P0.05)。***-IP实验结果:相比于其他三组,CLP组大鼠心肌细胞中trx与ASK1的复合体相对表达量明显减少(P0.05)。5.大鼠心肌细胞形态学观察结果:正常对照组大鼠心肌细胞排列整齐,核居中,无变性坏死,心肌横纹清晰,未见炎症细胞浸润;假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,核居中,无变性坏死,心肌横纹清晰,未见炎症细胞浸润;CLP模型组大鼠心肌细胞排列紊乱,肌纤维断裂严重,核固缩,凝固性坏死,心肌横纹模糊不清,间质扩大,中、重度间质炎症浸润;乌司他丁组大鼠心肌细胞排列欠整齐,水肿、脂肪变性,偶见颗粒样变性,心肌横纹较清晰,轻度间质炎症。结论:乌司他丁可能通过下调CLP大鼠血中TNF-α、IL-6的释放而抑制炎症反应的发展,进而增强心肌细胞中trx与ASK1的结合发挥抗心肌细胞凋亡,抑制心肌损伤的作用。

关键词：乌司他丁 CLP 脓毒症 trx ASK1