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可溶性trem2在小胶质细胞中的功能研究

可溶性TREM2在小胶质细胞中的功能研究

作者：王婷婷厦门大学

学位级别：硕士

髓样细胞触发性受体-2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,trem2)是近年来发现与晚发型阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)相关的基因,其编码区R47H突变显著增加AD的发生风险。trem2作为一次跨膜免疫相关受体,在中... 详细信息

髓样细胞触发性受体-2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,trem2)是近年来发现与晚发型阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)相关的基因,其编码区R47H突变显著增加AD的发生风险。trem2作为一次跨膜免疫相关受体,在中枢神经系统中主要表达于小胶质细胞并参与炎症反应及吞噬功能。最新研究表明trem2与小胶质细胞凋亡及存活相关。但目前关于trem2在AD中的生理功能、以及突变加剧AD发生风险的分子机制尚未可知。trem2的胞外端可被ADAM 10酶切割产生可溶性trem2蛋白(soluble trem2,strem2)。研究表明,在AD的临床前阶段,strem2在脑脊液中的蛋白水平显著增加,并且与AD的脑脊液标志物——磷酸化Tau及总Tau蛋白的水平成正相关。这表明strem2可能调节着AD的发生及发展,但是目前对于strem2的的生理功能了解甚少。在本研究中,我们利用野生型及trem2敲除的原代小胶质细胞发现,strem2蛋白能够有效抑制两种小胶质细胞的凋亡,从而显著增加小胶质细胞的生存能力。我们的研究还发现strem2在小胶质细胞中显著增加IL-1β、IL-6及TNF-α等炎症因子的表达,并诱导小胶质细胞的活化状态。有趣的是,strem2的上述功能均不依赖于内源全长的trem2蛋白。我们的研究进一步表明,strem2在小胶质细胞中通过PI3K/Akt信号通路抑制小胶质细胞的凋亡,而通过NF-1kB信号通路促进炎症反应。与AD相关的trem2的R47H和R62H突变削弱strem2在炎症反应及细胞存活中的功能,表明这些突变损害了 strem2的生理功能。最后我们通过小鼠脑立体定位将strem2蛋白注射到海马区域发现,strem2显著增加大脑内炎症因子的表达并诱导小胶质细胞的活化。综上所述,我们的研究利用体内、体外系统首次揭示了 strem2的生理学功能,这些研究为靶向strem2的AD治疗提供了重要的理论依据。

关键词：阿尔茨海默病 trem2 strem2 小胶质细胞炎症凋亡

MicroRNA-3473b通过靶向trem2调控帕金森病中的自噬与炎症

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MicroRNA-3473b通过靶向TREM2调控帕金森病中的自噬与炎症

作者：吕钱坤南昌大学

学位级别：硕士

研究目的:探索microRNA-3473b(miR-3473b)与髓系细胞触发受体2(trem2)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发病中小胶质细胞的活化及自噬的调控作用及其作用机制,而后进一步明确miR-3473b与trem2之间是否存在直接调控关系,从而阐明miR-... 详细信息

研究目的:探索microRNA-3473b(miR-3473b)与髓系细胞触发受体2(trem2)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发病中小胶质细胞的活化及自噬的调控作用及其作用机制,而后进一步明确miR-3473b与trem2之间是否存在直接调控关系,从而阐明miR-3473b在PD发病中的作用。研究方法:以小胶质细胞系BV2细胞及C57BL/6小鼠为研究对象,以脂多糖(LPS)及1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)为造模药物。体外实验中,以0.5μg/ml及1μg/ml的LPS分别处理BV2细胞24小时得到神经炎症的体外细胞模型;体内实验中,连续五天以20mg/kg的MPTP腹腔注射C57BL/6小鼠得到亚急性PD小鼠模型。在神经炎症细胞模型中,首先使用实时定量PCR(RT-qPCR)及免疫印迹(Western Blot)的方法检测miR-3473b与trem2在LPS诱导的炎性活化中的表达改变,同时检测LPS诱导下相关炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的m RNA表达,并检测p-ULK1、ULK1、LC3B的蛋白表达。之后转染miR-3473b inhibitor抑制BV2细胞中miR-3473b的表达,并以1μg/ml的LPS处理该细胞24小时,随后应用免疫印迹及RT-qPCR法检测trem2、p-ULK1、ULK1、LC3B蛋白的表达与TNF-α、IL-1β的m RNA表达。在BV2细胞中转染trem2过表达质粒,后以1μg/ml的LPS处理该细胞24小时,通过免疫印迹及RT-qPCR法检测p-ULK1、ULK1蛋白的表达与TNF-α、IL-1β的m RNA表达。在BV2细胞中转染ULK1过表达质粒并以LPS处理,检测LC3B蛋白的表达。在Target Scan数据库中预测miR-3473b的靶基因与其靶点,通过双荧光素酶报告实验验证miR-3473b与trem2、ULK1之间是否存在直接调控关系。在亚急性PD模型中,通过免疫荧光实验检测IBA1(小胶质细胞)抗体,而后通过免疫印迹及RT-qPCR法检测miR-3473b、trem2、p-ULK1、ULK1、LC3B等。通过立体定向手术于小鼠右侧脑室安装套管,而后每天通过导管装置注射miR-3473b antagomir(20n M,共5μl),持续五天并于第三天开始腹腔注射MPTP。造模完成后以免疫荧光检测IBA1抗体,并通过免疫印迹及RT-qPCR法检测trem2、p-ULK1、ULK1、LC3B等的表达。研究结果:体外神经炎症模型中,免疫印迹及RT-qPCR的结果表明抑制BV2细胞内miR-3473b的表达显著地减少了LPS诱导的促炎因子TNF-α、IL-1β的表达,并促进了p-ULK1与LC3B蛋白的表达,增加了LC3II/I的比值,促进了自噬的发生。Target Scan数据库预测trem2与ULK1可能是miR-3473b的直接作用靶点,同时,过表达miR-3473b会抑制trem2与ULK1的表达,抑制miR-3473b则会促进trem2与ULK1的表达。双荧光素酶报告实验验证了trem2是miR-3473b的直接靶基因,而ULK1不是。细胞内过表达trem2会显著抑制促炎因子TNF-α、IL-1β的表达,同时会促进p-ULK1的表达。过表达ULK1则会显著提高LC3II/I的比值,促进自噬的发生。在体的亚急性PD模型中,免疫印迹、RT-qPCR及免疫荧光实验的结果表明MPTP显著地诱导了神经炎症的发生并促进了miR-3473b的表达,也抑制了中脑内小胶质细胞的自噬,减少了p-ULK1与LC3B蛋白的表达,减小了LC3II/I的比值。而通过在中脑黑质致密带注射miR-3473b antagomir可以有效地抑制miR-3473b的表达,从而减弱小胶质细胞的活化,并促进了trem2、p-ULK1与LC3B蛋白的表达,促进了自噬的发生。研究结论:抑制miR-3473b可以减弱LPS诱导的小胶质细胞的炎性活化并促进自噬;小胶质细胞内过表达trem2能够抑制LPS诱导的炎性活化并通过促进p-ULK1的表达促进自噬的发生;trem2是miR-3473b的直接靶基因,miR-3473b可直接靶向调控trem2调控小胶质细胞的活化与自噬;外源性递送miR-3473b antagomir抑制脑内的miR-3473b可有效减弱MPTP诱导的小胶质细胞炎症反应并通过促进trem2/p-ULK1的表达增强自噬。

关键词：帕金森病小胶质细胞 microRNA-3473b trem2 神经炎症

巨噬细胞通过trem2/DAP12/SYK信号通路调控肥胖的研究

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巨噬细胞通过TREM2/DAP12/SYK信号通路调控肥胖的研究

作者：王松吉林大学

学位级别：硕士

随着经济水平的发展和生活水平的提高,超重与肥胖的现象越来越明显。《中国居民营养与慢性病状况报告（2020年）》显示,我国超过一半成人超重/肥胖,6-17岁、6岁以下儿童和青少年超重/肥胖率分别达到19.0%和10.4%。肥胖与许多并发症发生... 详细信息

随着经济水平的发展和生活水平的提高,超重与肥胖的现象越来越明显。《中国居民营养与慢性病状况报告（2020年）》显示,我国超过一半成人超重/肥胖,6-17岁、6岁以下儿童和青少年超重/肥胖率分别达到19.0%和10.4%。肥胖与许多并发症发生有关,包括2型糖尿病、心血管疾病、脂肪肝、胰腺炎、阻塞性睡眠呼吸暂停和多种癌症,已成为全球卫生领域的一个重点问题。本研究通过转录组分析结合单细胞分析的方式,分析健康和不同程度肥胖样本脂肪组织微环境中细胞组成及相应基因调控网络变化规律。对转录组基因共表达网络进行子网划分,发现一个与BMI高度相关的基因模块,该模块参与T细胞活化、白细胞趋化性、淋巴细胞增殖调节等多种免疫调控相关生物过程,包括SYK、CD86、CSF1R、HCK、TYROBP（DAP12）、LAPTM5等16个关键基因。将关键基因表达情况映射到单细胞水平,结果显示该系列关键基因均主要表达于巨噬细胞,提示调控肥胖的主要细胞可能是巨噬细胞。以巨噬细胞为研究对象,从基因调控网络角度表征细胞调控功能特异性,鉴定得到11个巨噬细胞亚型。根据其在不同BMI人群中的分布,识别出一类健康人群特异性细胞亚型C10,一类中度肥胖人群特异性细胞亚型C6以及一类重度肥胖人群特异性细胞亚型C4。这三类细胞既具有调控巨噬细胞增殖分化的共性,又随肥胖程度不同呈现出各自的特性。对三类特异性巨噬细胞亚型中trem2表达和DAP12信号通路的富集程度进行评估,结果发现DAP12-SYK信号通路呈现显著的差异性富集,DAP12及其下游信号通路在C4和C6细胞中呈抑制状态,C10细胞中呈激活状态,提示随着肥胖程度的增加,巨噬细胞中DAP12信号通路受到抑制,进而促使巨噬细胞丧失对脂肪细胞的监控,诱导肥胖的产生。trem2-DAP12-SYK通路可能成为肥胖调控的重要靶点。高脂饮食喂养建立肥胖动物模型,根据生物信息学分析结果从天然药物数据库筛选没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate,EGCG）和丹参水提物（Salvia miltiorrhiza aqueous extract,SMAE）作为治疗药物,灌胃治疗5 w后,检测小鼠体重脂重、血脂四项、游离脂肪酸含量、肝脏组织和脂肪组织的脂肪积累以及trem2-DAP12-SYK信号通路蛋白表达水平。结果显示,模型小鼠的体重、脂重、血脂、肝脏和皮下脂肪组织相应指标均显著升高,药物治疗后肥胖表型得到明显改善,表现出显著治疗肥胖效果。免疫组织化学染色检测trem2-DAP12-SYK通路蛋白在肥胖和药物治疗环境下表达变化,结果可见,模型组肝脏与脂肪组织的trem2较正常组小鼠表达量显著增加,但是trem2下游DAP12以及p-SYK表达量较正常组却显著降低;药物治疗组逆转了DAP12-SYK信号通路在肥胖小鼠中的低表达,DAP12和p-SYK表达水平均显著增加。在体实验表明肥胖形成以及治疗过程中,trem2-DAP12-SYK通路受到调控发生显著性变化。持续肥胖组织微环境会抑制DAP12-SYK通路蛋白的表达,使巨噬细胞丧失对脂肪细胞的调控作用,在此基础上激活DAP12-SYK可减轻高脂饮食诱导的小鼠肥胖,DAP12-SYK信号通路可能成为改善肥胖的重要靶点。其中trem2表达趋势与下游DAP12-SYK通路不完全一致,推测trem2活化后激活了下游多条信号通路,而非单一DAP12-SYK变化。为进一步探讨巨噬细胞trem2-DAP12-SYK通路对脂肪代谢的调控作用,本研究建立油酸诱导的HepG2高脂模型与巨噬细胞共培养体系,检测激活/抑制巨噬细胞DAP12-SYK通路后,模型细胞脂肪蓄积变化,通过对trem2-DAP12-SYK通路蛋白的调控,探究该通路在肥胖发生发展中的作用。实验结果可见,以EGCG与SMAE激活巨噬细胞,trem2、DAP12、p-SYK较正常组均显著上调,表明该通路已被激活。检测该巨噬细胞对HepG2高脂模型内脂肪蓄积的作用,可见模型细胞内脂质与甘油三酯含量显著降低,有效缓解肥胖的发展。使用SYK拮抗剂干预两种药物对巨噬细胞的激活作用后,高脂HepG2模型内甘油三酯含量以及脂质蓄积较模型组均无显著性差异,即拮抗DAP12-SYK通路抑制了巨噬细胞对高脂模型的治疗作用,进一步证实了DAP12-SYK通路在调控肥胖发生发展中的重要作用。值得关注的是,以油酸刺激的巨噬细胞trem2-DAP12-SYK通路蛋白也全部表达上调,但比较其与各治疗组间完整信号通路蛋白变化趋势,发现油酸组trem2上调最为显著,下游DAP12上调程度与两药物治疗组的差距缩小,p-SYK表达水平三组上调程度相当。采取流式细胞术检测通路下游细胞内Ca2+含量变化,结果显示,油酸组较正常组无显著

关键词：肥胖巨噬细胞免疫调控 trem2 DAP12

Aβ通过trem2调节小胶质细胞功能的研究及trem2靶点药物筛选

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Aβ通过TREM2调节小胶质细胞功能的研究及TREM2靶点药物筛选

作者：王大新厦门大学

学位级别：硕士

2 型髓系细胞触发受体(Triggering receptor expressed on myeloid cells 2,trem2)是一种先天免疫受体蛋白,其在中枢神经系统中主要由小胶质细胞表达。trem2上的突变与阿尔兹海默症(Alzheimer’s Disease,AD)的发生密切相关,其中R47H突... 详细信息

2 型髓系细胞触发受体(Triggering receptor expressed on myeloid cells 2,trem2)是一种先天免疫受体蛋白,其在中枢神经系统中主要由小胶质细胞表达。trem2上的突变与阿尔兹海默症(Alzheimer’s Disease,AD)的发生密切相关,其中R47H突变能显著增加AD发生的风险。trem2作为一个细胞表面受体,已经有多个trem2配体被发现,包括磷脂(phospholipids)和载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)。但是目前报道trem2与AD相关配体的研究还很少,相关功能性配体尚有待于发现。在本研究中,我们利用真核细胞表达系统表达并纯化trem2蛋白,结合蛋白固相结合(Solid Phase Binding)、免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)及表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)等技术,发现β-淀粉样蛋白寡聚体(Beta-Amyloid Oligomer,oAβ)能够特异性结合trem2。为了进一步探究Aβ寡聚体与trem2的相互作用是否能够激活trem2的下游信号通路,我们利用trem2过表达的报告基因细胞,发现Aβ寡聚体可以特异性地激活trem2依赖的报告基因活性,并且Aβ寡聚体的这种作用可以被trem2的抗体所阻断。Aβ寡聚体处理小鼠原代小胶质细胞后,通过检测trem2下游的磷酸化脾酪氨酸激酶(p-Syk)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的水平,发现Aβ寡聚体对p-Syk和p-Akt的调控作用依赖于trem2。进一步研究表明,Aβ寡聚体促进小胶质细胞向其迁移,且这种作用是依赖于trem2的表达。为了探究两者相互作用的生理功能,我们通过脑立体定位注射Aβ寡聚体至小鼠大脑的海马区,并通过免疫染色分析注射点周围的小胶质细胞数目。我们的研究发现,比起trem2基因敲除的小鼠,Aβ在野生型小鼠中能够诱导更多的小胶质细胞聚集在Aβ周围。此外,我们还通过SPR技术筛选与trem2结合的化合物,我们成功筛选出一种名叫E1的化合物与trem2存在较强的相互作用,但是其对trem2的信号通路及其功能的影响还有待进一步研究。通常认为Aβ与AD的进程密切相关,由Aβ形成的老年斑是AD的主要病理特征,而小胶质细胞作为体内的免疫细胞,对于Aβ的清除至关重要。我们发现Aβ能够与小胶质细胞上的trem2发生相互作用,并且能激活trem2的下游信号通路,更为重要的是,Aβ可以通过trem2诱导小胶质细胞向其聚集。我们的研究关联了 AD的主要病理成分Aβ与AD的一个风险基因——trem2。为防治AD提供了新的潜在药物靶点。

关键词： trem2 β-淀粉样蛋白小胶质细胞

小鼠trem2基因过表达和shRNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

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小鼠TREM2基因过表达和shRNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

作者：冉江霞广西医科大学

学位级别：硕士

目的构建小鼠髓样细胞触发受体-2(The triggering receptor expressed on myeloid cells-2,trem2)基因过表达和短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰慢病毒载体,并通过对小鼠BV2小胶质细胞感染进行鉴定。方法1.小鼠trem2基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定采用聚合酶链反应(PCR)扩增trem2基因片段,将扩增产物连接至经Age I酶切后的线性化GV358载体,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,经PCR方法鉴定正确后行DNA测序比对分析。将测序正确的重组慢病毒质粒和包装质粒共转染至293T细胞进行包装并用荧光法行滴度测定。将成功包装的过表达慢病毒感染小鼠BV2小胶质细胞,Q-PCR检测感染后细胞中trem2 mRNA的表达水平。2.小鼠trem2 shRNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定针对小鼠trem2基因设计合成3对shRNA序列,将其分别连接至经双酶切后的线性化GV248载体,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,筛选出阳性克隆后通过DNA测序进行鉴定。将测序正确的重组慢病毒质粒和包装辅助质粒共转染至293T细胞进行包装并用荧光法行滴度测定。将成功包装的3种shRNA干扰慢病毒载体分别感染小鼠BV2小胶质细胞,通过Q-PCR和Western blotting分别检测感染后各组细胞中trem2 mRNA和蛋白的表达水平。结果1.小鼠trem2基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定通过PCR成功获得trem2基因片段并连接至线性化GV358载体上,通过PCR及DNA测序鉴定均证实重组慢病毒载体携带有正确的trem2基因。在293T细胞中包装获得慢病毒并用荧光法测定其滴度为2.0×10 TU/mL。重组慢病毒载体感染小鼠BV2小胶质细胞后,Q-PCR检测结果显示,与空白对照组和阴性对照慢病毒感染组相比,过表达慢病毒感染组细胞中T REM2基因mRNA的表达水平显著升高(p2.小鼠trem2 shRNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定测序证实3种trem2基因shRNA干扰慢病毒载体均构建成功。在293T细胞中包装获得慢病毒并用荧光法测定病毒滴度分别为4×10 TU/mL、4×10 TU/mL和5×10 TU/mL。重组慢病毒载体感染小鼠BV2小胶质细胞后,Q-PCR和Western blotting检测结果显示,与空白对照组和阴性对照慢病毒感染组相比,3种trem2基因shRNA干扰慢病毒感染组细胞中TRE M2基因mRNA和蛋白的表达水平均下调(p248-shRNA-TR EM2-2感染组的沉默效率最佳,沉默效率达79.7%。结论我们利用慢病毒载体介导基因过表达以及RNA干扰的方法成功构建了小鼠trem2基因过表达和shRNA干扰慢病毒载体,并在小鼠BV2小胶质细胞中进行鉴定,为揭示trem2基因参与晚发型阿尔茨海默病(late-onse t Alzheimer’s disease,LOAD)发生发展的作用机制奠定了实验基础。

关键词： trem2 过表达 RNA干扰慢病毒载体 BV2小胶质细胞

桥本甲状腺炎患者外周血中trem2的表达及意义

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桥本甲状腺炎患者外周血中TREM2的表达及意义

作者：黄园园济宁医学院

学位级别：硕士

目的:桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)是自身免疫性甲状腺疾病(Autoimmune Thyroid Disease,AITD)之一,随着甲状腺病变的发展,绝大多数HT的终末结局均为甲状腺分泌激素功能减弱。HT发病的最主要原因是自身免疫性因素,许多基... 详细信息

目的:桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)是自身免疫性甲状腺疾病(Autoimmune Thyroid Disease,AITD)之一,随着甲状腺病变的发展,绝大多数HT的终末结局均为甲状腺分泌激素功能减弱。HT发病的最主要原因是自身免疫性因素,许多基础及临床研究证实,多种类型的细胞因子同时作用于HT的疾病发生发展的过程。本实验主要研究对象是首诊为桥本甲状腺炎的患者,通过测定其外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中髓样细胞触发受体2(Triggering receptor expressed on myeloid cells2;trem2)的比例,探索trem2在HT疾病进展中的意义,为HT的疾病进展机制理论体系提供新的研究方向。方法:本研究共分实验组及对照组。实验组(HT组):2018.01.01018.12.31之间,济宁医学院附属医院内分泌科门诊的患者,首次诊断为HT且符合纳入条件的患者,共60人,其中男性2人,女性58人。对照组(HC组):同时期于济宁医学院附属医院体检中心健康查体的健康人40人,包括男性3人,女性37人,其年龄、性别与实验组无较大差异,且未患有自身免疫性疾病、半年内无感染性疾病患病史。HT组和HC组严格按照纳入、排除标准进行选择。早8点空腹条件下,抽取实验组、对照组外周静脉血4ml,分为2管保存,每管2ml,备用。取其中一管,通过化学发光免疫分析法测定患者FT3、FT4、TSH、TPOAb及TgAb的浓度。另一管静脉血通过离心机以1000r/min的转速离心,分离出上层血清及下层血细胞。吸出的上层血清,应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-17、IFN-γ的表达量。下层血细胞采用流式细胞技术测定trem2在外周血PBMC中的水平。结果:HT组外周血中trem2比例较HC组显著降低(Ptrem2水平与血清IL-17、IFN-γ、TPOAb、TgAb均呈明显的负相关性(r=-0.315,P259,P=0.017;r=-0.232,P=0.021;r=-0.219,P=0.028)。结论:本次实验测定的HT患者PBMC中trem2的量较HC组显著降低,而IFN-γ、IL-17、TPOAb、TgAb的比例均较健康对照组明显升高,且HT患者trem2水平与IFN-γ、TPOAb、TgAb均现出呈较强的负相关性,提示trem2可能通过影响IFN-γ、IL-17等因子的分泌,干预HT的疾病进展过程。本研究为我们探索HT的疾病进展理论体系提供了新的方向,为临床医生提供了不同的治疗方向和位点。

关键词：桥本甲状腺炎 IL-17 IFN-γ trem2

阿尔茨海默病中trem2基因对NLRP3介导神经炎症作用的研究

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阿尔茨海默病中TREM2基因对NLRP3介导神经炎症作用的研究

作者：李均朝广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)中,trem2基因对NLRP3介导神经炎症的的作用及相关分子机制。方法:体内实验方面,使用30只APP/PS1小鼠随机分配至三个组。分别可将其分为:空白对照组、阴性对照组和模型组。7月龄雄性C57BL... 详细信息

目的:探讨在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)中,trem2基因对NLRP3介导神经炎症的的作用及相关分子机制。方法:体内实验方面,使用30只APP/PS1小鼠随机分配至三个组。分别可将其分为:空白对照组、阴性对照组和模型组。7月龄雄性C57BL/6J小鼠取10只作为正常组野生型(WT)对比对照。使用Morris水迷宫行为学测试、Western blot和RT-q PCR法,观察小鼠学习记忆能力以及脑内海马区NLRP3蛋白和IL-1βm RNA变化情况,从整体水平阐述trem2基因对NLRP3表达的影响。体外实验方面,本实验使用Aβ处理BV-2细胞,且用慢病毒转染技术建立AD细胞模型和trem2敲减细胞模型,并用TLR4抑制剂TAK242进行干预。探讨trem2基因是否能通过负调节TLR4来影响NLRP3炎性小体的激活。结果:动物实验结果表明,敲减trem2基因的APP/PS1小鼠表现出更差的学习记忆能力。这些小鼠脑内的NLRP3表达量显著上调,神经炎症也更严重。细胞实验揭示了在AD细胞模型中,trem2基因敲减的BV-2细胞导致NLRP3炎症小体的表达明显上调,相关的炎症因子IL-1β和IL-18分泌显著升高。而TAK242可减弱这种趋势。结论:本研究围绕AD中trem2基因对TLR4/NLRP3轴的影响,揭示了trem2基因在NLRP3炎症小体介导的神经炎性反应中的作用。本研究为AD神经炎症进程中trem2基因的作用提供了基本的理论依据。或可为缓解AD神经炎症和治疗AD提供新的基础,临床治疗药物的甄选提供新的策略。

关键词：阿尔茨海默病神经炎症 trem2 NLRP3

Research progress of trem2 in Alzheimer disease

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中国药理学与毒理学杂志 2017年第10期31卷 955-955页

作者： Yu-bao CHEN Xiao-yu XU College of Pharmaceutical Sciences & Chinese Medicine Southwest UniversityChongqing Key Laboratory of New Drug Screening from Traditional Chinese MedicinePharmacology of Chinese Materia Medica-the Key Discipline Constructed by the State Administration of Traditional Chinese Medicine

Alzheimer disease(AD)is a common neurodegenerative disease in the elderly,but nowadays the pathogenesis of AD is *** cell 2 trigger receptor(trem2)is one of the most famous and most common rare mutations in neurodegenerative disease research,and its functional site mutation can significantly increase the incidence of *** this paper,we summary the structure,localization,and function and related signaling pathways of trem2,review the latest epidemiological findings of trem2 associated with the pathogenesis of AD,and speculate on the possible role of trem2 in the progression of this disease,as well as the expression of trem2 and the role of soluble trem2 in AD brain are further *** on the potential protective effect of trem2 in the pathogenesis of AD,Therefore,targeting trem2 may provide new opportunities and a reference for AD *** the trem2 variant appears to be widely involved in neurodegenerative diseases,there is an urgent need to further study the function of trem2 in the brain and to find its ligands involved in trem2-mediated signaling transduction and its specific role in AD pathogenesis.

关键词： Alzheimer disease trem2 Aβ genetics inflammation phagocytosis

反常性痤疮患者的证候特征分析及trem2、CD68、CD163的表达

维普期刊数据库

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反常性痤疮患者的证候特征分析及TREM2、CD68、CD163的表达

作者：谭睿湖北中医药大学

学位级别：硕士

目的本研究通过收集反常性痤疮(Acne Inversa)患者的一般情况、饮食及生活习惯,初步探讨其中医证候规律,并采用免疫组织化学技术检测受体 trem2(Trigger receptor-2 expressed on myeloid cells)、CD68+及CD163+在皮损中的表达情况,探... 详细信息

目的本研究通过收集反常性痤疮(Acne Inversa)患者的一般情况、饮食及生活习惯,初步探讨其中医证候规律,并采用免疫组织化学技术检测受体 trem2(Trigger receptor-2 expressed on myeloid cells)、CD68+及CD163+在皮损中的表达情况,探讨炎症相关巨噬细胞在AI中的表达情况,巨噬细胞极化与AI发病的相关性,进一步阐述其发病机制,为临床上防治AI提供一定的理论依据。方法共纳入2021年2月至2023年2月在武汉市第一医院医院皮肤科曾宪玉教授门诊就诊或皮肤二病区住院诊断为AI的患者40例,另纳入正常健康青年40例为对照组;其中22例AI患者手术治疗并行组织病理检测,同时收集非炎症、非恶性肿瘤皮肤外科手术8例患者皮瓣多余组织块作为正常对照组。采用问卷调查收集AI患者及正常对照组一般情况及生活习惯,包括性别、年龄、身高、体重、皮损分级及分布、饮食习惯、饮用牛奶史、吸烟史、熬夜习惯、运动习惯、家族史以及中医症状信息等,参考《肥胖症中医诊疗方案专家共识》证候标准,并参照导师曾宪玉教授的临床经验进行辨证对辨证分型。采用免疫组织化学方法检测AI及正常对照组皮损中受体trem2、CD68+及CD163+的表达情况,采用Image Pro plus 6.0软件分析AI及正常对照组皮损中受体trem2、CD68+及CD163+的Iod值表达情况,并应用SPSS26.0进行统计学分析trem2、CD68+及CD163+的表达差异及相关性。结果1.临床特征:反常性痤疮患者患者年龄主要在18岁～30岁之间,平均年龄为26.45±8.1112岁。男性35例,占比88%,女性5例,占比12%,男女比例为7:1,AI患者BMI平均值为27.431±4.2305,明显高于正常对照人群,属于肥胖范畴。2.中医证候:本次纳入的40例AI患者根据《肥胖症中医诊疗方案专家共识》可分为肝胃湿热和脾虚痰湿两证,AI组与健康对照组之间在面部皮肤状态(p=0.032)、查形体(p22例(55%)、其次是Ⅱ级12例(30%)、较少达到Ⅲ级6例(15%),皮损最易累及腋下(24例,占比24.24%),其次为面部(22例,占比22.22%)、头部(18例,占比18.18%)较少累积乳房下(1例,占比1.01%)及会阴(1例,占比1.01%)。患者的病情在喜食肥甘厚味(p=0.017)、喜食甜食(p=0.007)、饮用奶制品(≥3年)(p=0.044)、吸烟史(p=0.003)、运动习惯(p=0.008)方面具有统计学意义,而在熬夜习惯(p=0.017)方面,两组差异不具有统计学意义。*** pro plus软件分析免疫组化结果分析:AI组的trem2受体(ptrem2与CD68呈正相关(r=0.227,ptrem2 与 CD163 呈负相关(r=-0.982,ptrem2与CD68+巨噬细胞共表达。结论反常性痤疮在我国好发于青少年男性,男女比例严重不均,AI患者BMI值大多属于肥胖类型,皮损最易累及于腋下,其次是面部,该类型患者大多喜食肥甘厚味、喜食甜食、饮用牛奶、熬夜、抽烟、缺少运动等生活习惯,中医证候方面,AI与正常青年在面部皮肤状态、查形、辨寒热、问口、寒热饮、问大便、腹证、辨舌方面存在差异,且AI患者大多以湿从热化的肝胃湿热证表现居多,少部分患者证候体现为脾虚痰湿证。皮损病理分析大致表现为炎性肉芽肿改变,trem2受体与CD68+在AI患者皮损中高度表达,呈正相关,且在免疫荧光中共定位表达;而CD163+在AI患者表达不具有统计学意义,与trem2呈负相关,不与trem2共表达。

关键词：反常性痤疮化脓性汗腺炎生活习惯 trem2 CD68+ CD163+