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tim-3对人Jurkat T细胞NFAT信号通路的调控

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免疫学杂志 2019年第1期35卷 77-83页

作者：吴培刘军张放王柏秋辉源生物科技(上海)有限公司上海201201 复旦大学生命科学学院上海200433

目的利用基因过表达技术来研究关键免疫检查点tim-3对人T淋巴细胞NFAT信号通路的调控作用。方法将NFAT-RE-Nluc、tim-3基因编码序列制备成相应的慢病毒质粒,通过Fugene HD转染或者慢病毒介导的基因过表达技术,将NFAT-RE-Nluc和tim-3基... 详细信息

目的利用基因过表达技术来研究关键免疫检查点tim-3对人T淋巴细胞NFAT信号通路的调控作用。方法将NFAT-RE-Nluc、tim-3基因编码序列制备成相应的慢病毒质粒,通过Fugene HD转染或者慢病毒介导的基因过表达技术,将NFAT-RE-Nluc和tim-3基因编码序列导入到Jurkat T细胞中,通过萤光素酶报告基因检测系统检测细胞中的荧光信号强度。结果tim-3和NFAT-RE-Nluc成功在人T淋巴细胞中表达,并且tim-3成功定位到细胞膜上。tim-3能够直接激活人T淋巴细胞的NFAT信号通路,诱导NFAT-RE-Nluc荧光素酶的表达。同时在Jurkat T细胞中,tim-3也能够增强CD3抗体激活NFAT信号通路,诱导CD69的表达以及IL-2分泌的能力。结论成功构建了稳定表达tim-3及NFAT-RE-Nluc报告基因的NFAT-RENluc tim-3细胞株,为深入研究tim-3与其配体Galectin-9或CEACAM1之间的相互作用,及筛选阻断tim-3-Galectin-9-CEACAM1的更有效的新型免疫检查点药物提供了重要的基础。

关键词： tim-3 NFAT-RE-Nluc 免疫检查点基因过表达慢病毒

细粒棘球蚴感染小鼠早期阶段tim-3表达的初步分析

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中国免疫学杂志 2014年第12期30卷 1616-1621,1626页

作者：徐芳洁印双红侯隽方海瑞蒋红群吴向未陈雪玲石河子大学医学院免疫学教研室石河子832002 铜仁学院材料与化学工程学院铜仁554300 石河子大学第一附属医院肝胆外科石河子832002

目的:了解tim-3作为一个新型促炎因子,在细粒棘球蚴感染小鼠的早期阶段的表达水平。方法:原头蚴感染BALB/c小鼠后1、5、9、13天,取其腹腔巨噬细胞和脾细胞。采用流式细胞术(FCM)检测各时间点腹腔巨噬细胞、脾巨噬细胞、脾CD3+细胞tim-3... 详细信息

目的:了解tim-3作为一个新型促炎因子,在细粒棘球蚴感染小鼠的早期阶段的表达水平。方法:原头蚴感染BALB/c小鼠后1、5、9、13天,取其腹腔巨噬细胞和脾细胞。采用流式细胞术(FCM)检测各时间点腹腔巨噬细胞、脾巨噬细胞、脾CD3+细胞tim-3的表达水平。采用qRT-PCR法检测各时间点TLR4的mRNA水平。结果:细粒棘球蚴组与对照组小鼠CD3+脾细胞tim-3表达无明显差别;小鼠脾脏巨噬细胞(9、13天)、腹腔巨噬细胞(5、9、13天)表面tim-3表达水平较对照组有升高,与对照组有显著差异(Ptim-3的表达升高,并可能通过下调TLR4的表达,抑制了巨噬细胞功能,从而抑制宿主的免疫杀伤,产生了免疫逃避作用。

关键词：细粒棘球蚴 tim-3 TLR4 巨噬细胞

重组人可溶性tim-3原核表达载体的构建及其重组蛋白的优化表达

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华中科技大学学报（医学版） 2017年第3期46卷 276-280,290页

作者：白少云卿吉琳刘振谭源福陈治中广西医科大学第一附属医院神经外科南宁530021 广西壮族自治区人民医院妇产科南宁530021 广西壮族自治区人民医院检验科南宁530021

目的构建人可溶性tim-3(stim-3)的重组质粒表达载体pET28a-stim-3-EGFP,在大肠埃希菌中进行诱导表达并对其表达条件进行优化。方法取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增tim-3基因胞外段序列,克隆入已构建的表达载体pET28a-EGFP中,鉴定阳... 详细信息

目的构建人可溶性tim-3(stim-3)的重组质粒表达载体pET28a-stim-3-EGFP,在大肠埃希菌中进行诱导表达并对其表达条件进行优化。方法取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增tim-3基因胞外段序列,克隆入已构建的表达载体pET28a-EGFP中,鉴定阳性克隆。重组质粒转化BL21(DE3),通过调整IPTG浓度、诱导时机、诱导温度与诱导时间优化蛋白表达条件。结果成功构建原核表达载体pET28a-stim-3-EGFP,并转化BL21(DE3)进行诱导表达。温度和IPTG浓度对蛋白表达量影响不大;在培养至A600nm值约为0.6~0.8时于25℃诱导5h可获得较高的蛋白表达。结论成功表达可溶性重组蛋白stim-3-EGFP,为该蛋白的进一步纯化生产及应用奠定了良好基础。

关键词： tim-3 原核表达增强绿色荧光蛋白融合蛋白

tim-3在胃癌肿瘤浸润γδT细胞与NK细胞中的表达及其临床意义

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现代免疫学 2017年第3期37卷 192-197页

作者：徐娟俐石亮荣蒋敬庭吴昌平吴骏苏州大学附属第三医院肿瘤科江苏省肿瘤免疫治疗工程技术研究中心常州213003

检测T细胞免疫球蛋白及黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules 3,tim-3)在胃癌患者固有免疫细胞(γδT细胞与NK细胞)中的表达率,探讨其与临床病理特征及术后中位无进展生存期(progress free surviva... 详细信息

检测T细胞免疫球蛋白及黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules 3,tim-3)在胃癌患者固有免疫细胞(γδT细胞与NK细胞)中的表达率,探讨其与临床病理特征及术后中位无进展生存期(progress free survival,PFS)的关系。收集临床病理资料齐全的胃癌患者26例,经流式细胞技术检测tim-3在胃癌组织、癌旁组织及外周血γδT细胞、NK细胞中的表达率,并分析其与临床病理因素及中位PFS的相关性。结果发现,tim-3在胃癌组织和癌旁组织中γδT细胞上均表达,而2类组织中γδT细胞上tim-3的表达率差异无统计学意义(P=0.074),但均显著高于其在外周血γδT细胞上的表达水平(Ptim-3在外周血NK细胞中表达率较高,且tim-3在外周血中NK细胞表达率显著高于胃癌组织及癌旁组织(Ptim-3的表达率分别与肿瘤浸润深度和TNM分期相关(Ptim-3表达率与TNM分期有关(Ptim-3表达率较低的胃癌患者比tim-3表达率较高的胃癌患者的中位PFS更长(P=0.014;P=0.028),提示tim-3在胃癌的进展过程中起到重要作用。

关键词：胃癌 tim-3 免疫调控分子

支气管哮喘易感区域5q31-33内tim-3基因单体型分析

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中国病理生理杂志 2009年第4期25卷 693-698页

作者：武其文胡丽华蔡鹏程崔天盆陈凤花华中科技大学附属协和医院检验科湖北武汉430022

目的:探讨染色体上支气管哮喘易感区域5q31-33内tim-3基因多态性与支气管哮喘的关系。方法:应用限制性片段长度多态性技术方法,分析了118个儿童变应性哮喘核心家系tim-3基因4个SNPs(rs10053538、rs10515746、rs13170556和rs9313441)的... 详细信息

目的:探讨染色体上支气管哮喘易感区域5q31-33内tim-3基因多态性与支气管哮喘的关系。方法:应用限制性片段长度多态性技术方法,分析了118个儿童变应性哮喘核心家系tim-3基因4个SNPs(rs10053538、rs10515746、rs13170556和rs9313441)的基因型;采用基于家系传递不平衡检验(TDT),分析基因分型数据;应用TRANSMIT软件构建单体型并进行单体型关联分析。结果:①基于家系的TDT分析显示,tim-3基因的4个SNPs由杂合子父母传递给患病子代的等位基因频率不比预期值高,与哮喘无关(P>0.05)。②Transmit多个位点单体型分析结果显示由tim-3基因rs10053538、rs13170556、rs9313441构建的单体型与支气管哮喘有关联(Global 2=10.83,P31-33区域的tim-3基因本身或其附近的基因可能与儿童变应性哮喘的易感性相关。

关键词：基因 tim-3 儿童变应性哮喘单核苷酸多态性染色体5q31-33

tim-3对巨噬细胞葡萄糖转运体1表达的调节机制研究

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军事医学 2018年第7期42卷 517-521,527页

作者：张嘉诚李葛窦帅杰刘艺琼侯春梅韩根成军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所神经免疫与抗体工程研究室北京100850 解放军总医院第六医学中心介入医学科北京100048

目的探讨T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域分子-3(T cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecule-3,tim-3)对巨噬细胞葡萄糖转运体1(glucose transporter 1,GLUT1)的表达及其对细胞功能的影响,并初步探索其影响机制。方法使用tim-3 siRNA敲低Raw264. 7细胞系观察GLUT1蛋白的表达,随后使用不同浓度tim-3融合蛋白、tim-3激动抗体,阻断和激活小鼠源巨噬细胞系Raw264. 7,在基因和蛋白水平观察GLUT1、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、tim-3以及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α) 4项指标的变化。结果 tim-3敲低的Raw264. 7细胞系GLUT1蛋白表达水平明显升高;激活、抑制巨噬细胞tim-3信号能分别抑制和促进GLUT1、TNF-α的基因和蛋白表达以及GAPDH基因表达,但tim-3的基因和蛋白水平以及GAPDH蛋白水平并无显著变化。结论 tim-3负调控巨噬细胞GLUT1表达,进一步影响TNF-α分泌,参与TNF-α转录后调控的GAPDH可能参与其中的调节机制。

关键词： tim-3 巨噬细胞葡萄糖转运体1 肿瘤坏死因子α

敲减tim-3对结直肠癌细胞生长及分泌免疫抑制分子的影响

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免疫学杂志 2020年第1期36卷 40-44,51页

作者：张婷王广涛张园园姚纪英枣庄矿业集团中心医院检验科 277000 枣庄矿业集团中心医院.影像科 277000 东郊医院检验科

目的研究敲减T免疫球蛋白及黏蛋白分子3(tim-3)对结直肠癌细胞生长及细胞分泌免疫抑制分子的影响。方法设置稳定感染tim-3 shRNA和shRNA control重组慢病毒的SW620细胞株为sh-tim-3和sh-NC,设置不添加慢病毒的SW620细胞为Control组,细... 详细信息

目的研究敲减T免疫球蛋白及黏蛋白分子3(tim-3)对结直肠癌细胞生长及细胞分泌免疫抑制分子的影响。方法设置稳定感染tim-3 shRNA和shRNA control重组慢病毒的SW620细胞株为sh-tim-3和sh-NC,设置不添加慢病毒的SW620细胞为Control组,细胞培养2 d以后,qRT-PCR和Western blot检测细胞中tim-3表达水平。MTT方法检测细胞增殖情况,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,PI单染法检测细胞周期,Western blot方法检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p27蛋白水平,ELISA法检测细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-10(IL-10)水平。结果sh-tim-3组细胞中的tim-3 mRNA和蛋白表达水平均降低,细胞增殖能力降低,细胞克隆形成能力也降低,细胞G 0/G 1比例降低,CyclinD1蛋白水平降低,p27蛋白水平升高,细胞分泌的VEGF、IL-10减少,与Control组比较,差异具有统计学意义(Ptim-3能够抑制结直肠癌细胞生长并减少细胞分泌免疫抑制因子。

关键词：结直肠癌 tim-3 免疫抑制分子增殖

系统性红斑狼疮患者外周血NK细胞tim-3表达和意义

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免疫学杂志 2020年第3期36卷 248-253页

作者：黄自坤曾璐璐罗清南昌大学第一附属医院检验科

目的探讨tim-3在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血NK细胞上的表达及临床意义,以阐明其在SLE发生和发展中的作用。方法应用流式细胞仪检测44例SLE患者和34例健康对照者外周血NK细胞表面tim-3表达水平,比较SLE组和健康对照组之间NK细胞表面T... 详细信息

目的探讨tim-3在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血NK细胞上的表达及临床意义,以阐明其在SLE发生和发展中的作用。方法应用流式细胞仪检测44例SLE患者和34例健康对照者外周血NK细胞表面tim-3表达水平,比较SLE组和健康对照组之间NK细胞表面tim-3表达水平,并分析其与实验室检查数据及治疗的相关性。2组间比较采用t检验、配对t检验或者非参数检验,两变量之间相关性采用Pearson相关分析。结果1)SLE患者NK细胞tim-3表达的平均荧光强度(MFI)显著高于健康对照组(P=0.033);SLE患者NK细胞tim-3表达百分率显著高于健康对照组(Ptim-3表达的MFI与C3、C4呈负相关(r=0.32,P=0.037;r=0.30,P=0.049);SLE患者外周血tim-3+NK细胞百分率与单核细胞数量呈负相关(r=0.32,P=0.033)。3)抗ds-DNA抗体阳性的SLE患者NK细胞tim-3表达的MFI显著高于抗ds-DNA抗体阴性的SLE患者(P=0.050);SLE患者外周血tim-3+NK细胞百分率与抗ds-DNA抗体浓度呈正相关(r=0.30,P=0.049)。4)低血小板血症组SLE患者外周血NK细胞上tim-3表达的MFI显著高于阴性者(P=0.045)。5)治疗后SLE患者NK细胞tim-3表达的MFI和tim-3+NK细胞百分率都明显降低(均P=0.009)。结论SLE患者外周血NK细胞tim-3表达异常,与及疾病的严重程度有明确的相关性。

关键词：系统性红斑狼疮 NK细胞 tim-3

细粒棘球蚴感染者中tim-3^+CD4^+CD25^+Treg细胞及相关因子的表达

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免疫学杂志 2018年第6期34卷 513-518页

作者：赵慧王亮张峰波朱玥洁庞楠楠安梦婷李斌马秀敏丁剑冰新疆医科大学第一附属医院医学检验中心乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院生殖助孕中心乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院血液中心乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础学院免疫学教研室乌鲁木齐830011

目的通过检测细粒棘球蚴感染者外周血中tim-3^+CD4^+CD25^+Treg细胞及相关因子的表达水平,探讨细粒棘球蚴感染者中tim-3与CD4+CD25+Treg细胞的关系及tim-3+CD4+CD25+Treg细胞对该疾病持续性发展的作用。方法选取30例细粒棘球蚴感染者和3... 详细信息

目的通过检测细粒棘球蚴感染者外周血中tim-3^+CD4^+CD25^+Treg细胞及相关因子的表达水平,探讨细粒棘球蚴感染者中tim-3与CD4+CD25+Treg细胞的关系及tim-3+CD4+CD25+Treg细胞对该疾病持续性发展的作用。方法选取30例细粒棘球蚴感染者和30例健康对照人群,用流式细胞术检测感染组和对照组外周血中tim-3+CD4+CD25+Treg细胞的比例变化;实时荧光定量PCR法分别检测感染组和对照组外周血单个核细胞中tim-3和Foxp3 mRNA的表达;ELISA法检测感染组和对照组血清中IL-10和TGF-β的水平;Pearson相关法分析感染者外周血中tim-3 mRNA的表达与Foxp3 mRNA的相关性以及tim-3+CD4+CD25+Treg细胞与IL-10和TGF-β的相关性。结果与对照组相比,细粒棘球蚴感染组外周血中tim-3^+CD4^+CD25+Treg细胞的比例均显著升高(Ptim-3和Foxp3 mRNA水平显著升高(Ptim-3 mRNA与Foxp3 mRNA表达水平呈正相关;tim-3+CD4+CD25+Treg细胞与IL-10和TGF-β的水平均正相关。结论细粒棘球蚴感染者中tim-3在CD4+CD25+Treg细胞上的过表达可能会促进CD4+CD25+Treg细胞的产生及其抑制功能的发挥,从而促使感染的持续性发展。

关键词： tim-3 Treg 细粒棘球蚴感染