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小鼠tie2基因启动子的克隆及转录活性分析

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生物技术通报 2012年第11期28卷 90-94页

作者：陆俊佳袁志刚许淑茹廖明赖青鸟畅荣妮袁广之侯伟舒伟广西医科大学细胞生物学与遗传学教研室南宁530021

克隆小鼠tie2基因的启动子并分析其转录活性。设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠tie2基因启动子区。将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质... 详细信息

克隆小鼠tie2基因的启动子并分析其转录活性。设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠tie2基因启动子区。将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质粒pGL3-tie2-Luc。报告质粒与内参质粒共转染SVEC4-10、NIH3T3、HUVEC及NIT-1细胞系,48 h后收获细胞检测双荧光素酶的表达情况。构建的pGL3-tie2-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确;转染4种细胞系后进行双荧光素酶活性检测的结果表明,tie2基因启动子区域(-2056-+1)具有较强的转录活性。成功构建小鼠tie2基因启动子报告质粒,证实tie2基因上游区域(-2056-+1)具有较强的启动子活性。

关键词： tie2 启动子双荧光素酶活性检测

黄芪丹参配伍提取物经VEGF、Ang1/tie2通路对心肌梗死大鼠血管新生的病理影响

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科学技术与工程 2020年第1期20卷 104-108页

作者：张瓅方李梦华刘暖杨雷毛秉豫南阳理工学院河南省张仲景方药与免疫调节重点实验室南阳473004 南阳医学高等专科学校南阳473061

为观察黄芪、丹参配伍提取物对心肌梗死大鼠VEGF(vascular endothelial growth factor)、血管生成素Ang1及其受体酪氨酸激酶tie2信号通路的表达影响,对心肌梗死大鼠模型复制成功后分为假手术对照组、模型组、黄芪、丹参配伍提取物低、... 详细信息

为观察黄芪、丹参配伍提取物对心肌梗死大鼠VEGF(vascular endothelial growth factor)、血管生成素Ang1及其受体酪氨酸激酶tie2信号通路的表达影响,对心肌梗死大鼠模型复制成功后分为假手术对照组、模型组、黄芪、丹参配伍提取物低、中、高剂量组,分别予以对应药物灌胃4周。观察大鼠一般生活状态,并分别采用HE染色和免疫组织化学染色测试大鼠心肌组织病理形态结构和VEGF、Ang1、tie2的蛋白表达。结果表明:模型组心肌结构紊乱伴有炎性侵润,VEGF、Ang1和tie2蛋白表达较假手术对照组有所增加(Ptie2的表达,促进血管新生。

关键词：心肌梗死血管新生 VEGF Ang1 tie2

软组织及椎体血管异常tie2、Ang1、Ang2蛋白及mRNA的表达及临床意义

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临床与实验病理学杂志 2018年第7期34卷 714-718页

作者：周梅岳娜白靖平王华毕超汪芸王书芹广东省中山市中医院病理科中山528400 新疆医科大学附属肿瘤医院病理科乌鲁木齐830000 新疆医科大学附属肿瘤医院骨科乌鲁木齐830000 北京大学第三医院病理科北京100191

目的探讨tie2、Ang1、Ang2蛋白及mRNA在软组织及椎体血管异常(血管瘤和血管畸形)中的表达及其意义。方法收集血管异常110例,运用RT-PCR和免疫组化SP法检测tie2、Ang1和Ang2在血管瘤及血管畸形中表达的差异,并进一步了解tie2基因突变是... 详细信息

目的探讨tie2、Ang1、Ang2蛋白及mRNA在软组织及椎体血管异常(血管瘤和血管畸形)中的表达及其意义。方法收集血管异常110例,运用RT-PCR和免疫组化SP法检测tie2、Ang1和Ang2在血管瘤及血管畸形中表达的差异,并进一步了解tie2基因突变是否影响三者mRNA的表达。结果 tie2、Ang1和Ang2 mRNA在血管瘤中的表达显著高于血管畸形(P2蛋白和mRNA的表达显著高于Ang1(Ptie2 mRNA的表达水平显著高于野生型(Ptie2基因突变的血管畸形Ang1和Ang2 mRNA的表达低于野生型血管畸形(Ptie2基因突变、Ang1和Ang2的表达失衡可能促进血管异常病变进展。

关键词：血管瘤血管畸形 tie2 Ang1 Ang2

定心方通过Ang1-tie2通路干预动脉粥样硬化斑块内血管生成的机制研究

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定心方通过Ang1-Tie2通路干预动脉粥样硬化斑块内血管生成的机制...

作者：赵丹丹南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景急性冠脉综合征(ACS),是一种集中发生在心血管疾病患者群体中的高频率心脏事件,在各种有害因素的刺激下,已形成的冠状动脉粥样斑块由稳定斑块变成易损斑块并发生破裂,以致继发血栓的形成是诱导其发病的公认的病理生理基础。与... 详细信息

研究背景急性冠脉综合征(ACS),是一种集中发生在心血管疾病患者群体中的高频率心脏事件,在各种有害因素的刺激下,已形成的冠状动脉粥样斑块由稳定斑块变成易损斑块并发生破裂,以致继发血栓的形成是诱导其发病的公认的病理生理基础。与之有关的大量学术研究表明,新生血管是决定AS斑块性质是否为易损斑块的至关重要的因素,尤其是内膜新生血管,其生成过程与成熟过程与斑块稳定性的进展有密切相关性。Ang1-tie2是维持新生血管稳定的重要通路。VEGF,作为当前已经证实的最具有促进血管分化成熟作用的生长因子,不仅能特异性地作用于血管内皮细胞及内膜新生血管细胞,并强有力的诱导其增殖、分化,引发体内血管生成,还能够使进出血管壁的产物增多以及分泌物增加。对于已生成的血管结构,VEGF可促进其已成结构的分化,改建和维持。Ang1/tie2体系和VEGF之间保持着一种相互调节的关系,它在维持血管的完整性方面起着重要作用。中医学认为气虚、痰浊、血瘀是引起动脉粥样硬化发病的重要病理因素。益气活血是一种重要的治疗AS的方法。定心方是南方医院中医科经验方。功效为益气养心,活血解毒及清热祛痰。经临床研究证实对冠心病有良好的防治疗效。三七皂苷R1作为定心方组方药物三七的重要成分之一,也能显著的改变动脉粥样硬化斑块的病理进程。目的本研究开展DXR和PNSR1防治AS的机理研究,通过对小鼠主动脉斑块内血管和在体外模拟血管的研究,观察DXR和PNSR1对血管生成的抑制作用;探讨二者对于Ang1-tie2通路的调节作用及其作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,采用OX-LDL 100mg/ml损伤人脐静脉内皮细胞24h,分别观察DXR及PNSR1含药血清对细胞迁移及其小管形成的影响。采用免疫印迹法(Western Blot)检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管紧张素Ang1及受体tie2的表达。采用鸡胚尿囊膜实验观察DXR及PNSR1对体外血管生成的影响。用高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠建立AS模型,随机分为辛伐他汀组,给药组和正常组。给药12周后处死小鼠。分离出胸主动脉,主动脉病理损伤组织学观察主动脉根部连续石蜡切片,HE染色法观察DXR及PNSR1对小鼠主动脉血管斑块体积的影响,免疫组化检测CD34的表达情况。结果DXR及PNSR1使体外血管生成数目减少,受DXR及PNSR1干预的HUVEC细胞中的Ang1蛋白和tie2蛋白表达量上调,VEGF蛋白表达量下降。受PNSR1干预的小鼠组织中的CD34阳性率下调。结论体外实验结果表明DXR及PNSR1具有抑制血管生成的作用,这种效应与其可以调控HUVEC细胞内与血管生成密切相关的Ang1,tie2,VEGF有关联。受PNSR1干预的小鼠主动脉血管中的CD34阳性率下调,说明PNSR1能够降低ApoE-/-动脉粥样小鼠主动脉斑块内的血管密度。

关键词：定心方三七皂苷R1 动脉粥样硬化 Ang1 tie2 VEGF 人脐静脉内皮细胞血管生成

tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管瘤和血管畸形中的表达及临床意义

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华中科技大学学报（医学版） 2016年第4期45卷 428-431页

作者：周梅瞿智玲白靖平岳娜阿迪拉新疆医科大学附属肿瘤医院病理科乌鲁木齐830011 华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所武汉430030 新疆医科大学附属肿瘤医院骨科乌鲁木齐830011

目的探讨tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管异常(血管瘤和血管畸形)中的表达。方法收集新疆医科大学附属肿瘤医院2005年至2012年血管畸形50例,皮肤增殖期血管瘤30例,正常组织20例,采用免疫组化SP法检测tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管异常中的表... 详细信息

目的探讨tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管异常(血管瘤和血管畸形)中的表达。方法收集新疆医科大学附属肿瘤医院2005年至2012年血管畸形50例,皮肤增殖期血管瘤30例,正常组织20例,采用免疫组化SP法检测tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管异常中的表达。结果 tie2在血管异常中的阳性表达率较高,而Ang1在血管异常中的阳性表达率较低,tie2在血管瘤和血管畸形中的表达显著高于正常组织,Ang1在血管瘤和血管畸形中的表达显著低于正常组织,差异均具有统计学意义(均Ptie2和Ang2在血管异常中的表达呈正相关关系(Ptie2蛋白表达增高,其与Ang2结合对病变血管生成可能具有促进作用,tie2、Ang1和Ang2表达失衡在血管异常的发病过程中可能起重要的调节作用。

关键词：血管畸形血管瘤 tie2 Ang1 Ang2

tie2基因启动子及内皮抑素基因表达载体的构建

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TIE2基因启动子及内皮抑素基因表达载体的构建

作者：陆俊佳广西医科大学

学位级别：硕士

目的：克隆小鼠tie2基因的启动子并分析其转录活性。方法：设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠tie2基因启动子区。将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区... 详细信息

目的：克隆小鼠tie2基因的启动子并分析其转录活性。方法：设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠tie2基因启动子区。将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质粒pGL3-tie2-Luco报告质粒与内参质粒共转染SVEC4-10、NIH3T3、 HUVEC及NIT-1细胞系,48小时后收获细胞检测双荧光素酶的表达情况。结果：构建的pGL3-tie2-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确;转染四种细胞系后进行双荧光素酶活性检测的结果表明,tie2基因启动子区域(-2056～+1)具有较强的转录活性。结论：成功构建小鼠tie2基因启动子报告质粒,证实tie2基因上游区域(-2056～+1)具有较强的启动子活性。目的：构建小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet41b(+)一endostat in. 方法：设计并合成引物,以重组质粒pUC57-endostatin为模板,PCR扩增获得小鼠及人类的内皮抑素基因。将扩增获得小鼠及人类的内皮抑素基因分别插入原核表达载体pet41b(+)中,构建小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet41b(+)-endostatin.通过转化大肠杆菌BL21(DE3)获得小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet4lb(+)一endostatin的大量扩增,进行菌落PCR,挑选阳性菌液提取质粒进行酶切检测,并进行测序分析。结果：构建的小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet4lb(+)一endostat in经酶切鉴定及测序分析都显示正确。结论：成功的构建了小鼠及人类的内皮抑素基因的原核表达载体pet4lb (+)-endostatin.

关键词： tie2 启动子双荧光素酶活性检测内皮抑素表达载体pet41b(+)-endostatin

tie2信号激活对小鼠叶酸肾病小管间质病变的影响

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Tie2信号激活对小鼠叶酸肾病小管间质病变的影响

作者：冯雅君苏州大学

学位级别：硕士

背景:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是由多种原因导致的病程大于3个月的慢性肾脏结构异常和功能障碍。除肾小球病变外,肾小管及肾小管间质病变的程度与预后密切相关。肾小球硬化、肾小管萎缩、肾小管间纤维化等慢性肾脏病变... 详细信息

背景:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是由多种原因导致的病程大于3个月的慢性肾脏结构异常和功能障碍。除肾小球病变外,肾小管及肾小管间质病变的程度与预后密切相关。肾小球硬化、肾小管萎缩、肾小管间纤维化等慢性肾脏病变通常预后不良。血管损伤及小管间质病变将影响CKD及其进展。tie2信号系统是目前研究的热点,具有抗血管炎症反应、降低血管通透性和促进血管生长等作用,对维持血管的稳定性至关重要。有关tie2信号对CKD影响的研究未见相关报道,本实验拟探讨tie2信号激活对小鼠叶酸肾病小管间质病变的影响,为血管保护因子在CKD中的应用提供理论基础。方法:选择8周龄CD1雄性小鼠,腹腔注射叶酸(溶解于5%NaHCO,浓度为24mg/mL,剂量为240mg/kg)建立小鼠叶酸肾损伤模型,检测尿蛋白/肌酐比值,选取比值>0.2的小鼠作为肾损伤模型组。腹腔注射5%NaHCO建立正常对照模型(Con组)。将模型组分为F+I组和F+T组,分别在肾损伤后24小时腹腔注射大鼠IgG1抗体(1mg/只)及腹腔注射大鼠抗小鼠激发型tie2单克隆抗体(1mg/只),Con组小鼠腹腔注射大鼠IgG1抗体(1mg/只)。在实验第7天和第28天时各处死6只小鼠,称量小鼠体重及肾重,观察三组小鼠肾脏外观变化,HE染色法和Masson染色法观察小鼠肾小管间质病理变化,免疫组化检测小鼠肾小管间质血管CD31阳性表达情况,Western blot检测小鼠肾脏血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达情况。结果:(1)Con组小鼠肾脏红润,形态大小正常。F+I组小鼠实验第7天肾脏肿大且颜色淡红,实验第28天,肾脏表面呈颗粒状。F+T组小鼠实验第7天肾脏无明显改变,实验第28天,肾脏表面有凹凸,大小介于Con组及F+I组之间。(2)与Con组比较,实验第7天,F+I组小鼠肾重/体重增大(P28天,F+I组小鼠肾重/体重下降(P28天与Con组比较均无明显差异。(3)HE染色和Masson染色结果显示,Con组小鼠肾脏基本正常。实验第7天,F+I组小鼠肾脏可见炎症细胞浸润,小管扩张,小管上皮细胞肿胀,空泡样变性;F+T组小鼠肾脏与F+I组相比,病变程度较轻。实验第28天,F+I组小鼠肾脏可见小管萎缩,少数代偿性扩张,小管间质区增宽,纤维组织增生。F+T组小鼠肾脏与F+I组相比,病变程度较轻。实验第7天和第28天,F+I组小鼠肾小管间质病变范围均大于F+T组(7d P28d P28天,与Con组相比,F+I组小鼠肾脏中CD31阳性表达的微血管密度(MVD)降低,与F+T组相比,F+I组小鼠肾脏中CD31阳性表达的MVD降低(P28天,Con组、F+I组与F+T小鼠肾脏VCAM-1表达量无明显差异(P>0.05)。结论:(1)tie2信号激活可以改善小鼠叶酸肾病的肾小管间质病变。(2)tie2可能通过降低血管粘附因子VCAM-1表达,增加小管周围毛细血管密度,改善肾小管间质病变。

关键词： tie2 慢性肾脏病肾小管间质病变

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表达tie2基因的单核细胞研究进展

国际免疫学杂志 2010年第1期33卷 5-8页

作者：舒伟许淑茹袁志刚广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室南宁530021

肿瘤血管的生成和发展在肿瘤的生长和恶化过程中起着关键作用。一类表达tie2基因的单核细胞（TEM）通过一些生长因子和化学信号被募集到肿瘤组织中，旁分泌细胞因子促进肿瘤血管的生成和发展。TEM在促进肿瘤血管形成中起着重要作用，与... 详细信息

肿瘤血管的生成和发展在肿瘤的生长和恶化过程中起着关键作用。一类表达tie2基因的单核细胞（TEM）通过一些生长因子和化学信号被募集到肿瘤组织中，旁分泌细胞因子促进肿瘤血管的生成和发展。TEM在促进肿瘤血管形成中起着重要作用，与血管内皮细胞祖细胞（EPC）不同的是，TEM只是在肿瘤的血管生成中起促进作用，但在肿瘤周围临近的正常组织中没有发现其存在，TEM被认为是一类肿瘤组织特异性的细胞。以TEM为载体细胞，通过TEM表达抗肿瘤药物，靶向递送的抗肿瘤药物能够有效的抑制肿瘤的生长和恶化。

关键词： tie2 TEM 肿瘤靶向治疗

阿托伐他汀对急性心肌梗死大鼠Ang-1及其受体tie2 mRNA表达的影响

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中国医科大学学报 2020年第7期49卷 606-609,614页

作者：陈仕毅付玉平冯晓晶刘少奎大连大学附属中山医院循环科辽宁大连116001 中国医科大学附属第一医院骨科沈阳110001 北部战区总医院和平院区骨科沈阳110042

目的通过研究阿托伐他汀对大鼠心肌梗死(AMI)后促血管生成素1 (Ang-1)和tie2 mRNA表达的影响,探讨阿托伐他汀对于AMI后心肌血管生成的作用机制。方法 80只SD雄性大鼠随机分为正常(CG)组、单纯心肌梗死(AG)组和心肌梗死联合阿托伐他汀(A... 详细信息

目的通过研究阿托伐他汀对大鼠心肌梗死(AMI)后促血管生成素1 (Ang-1)和tie2 mRNA表达的影响,探讨阿托伐他汀对于AMI后心肌血管生成的作用机制。方法 80只SD雄性大鼠随机分为正常(CG)组、单纯心肌梗死(AG)组和心肌梗死联合阿托伐他汀(AAG)组;AAG组于术后第3天开始以2.5 mg阿托伐他汀溶液灌胃给药,AG组及CG组以同等剂量生理盐水灌胃;各组分别于术后14 d及28 d取材,实时PCR技术检测心肌Ang-1及tie2 mRNA的表达。结果在AMI建模14 d时AAG组与AG组tie2mRNA的表达水平有统计学差异(P 0.05);在AMI模型28 d时3组Ang-1 mRNA及tie2 mRNA表达比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论阿托伐他汀能够促进AMI血管生成,其可能通过上调tie2 mRNA的表达,促进新生血管的形成。

关键词：阿托伐他汀心肌梗死 Ang-1 tie2