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Macrophage-derived SHP-2 inhibits the metastasis of colorectal cancer via tie2-PI3K signals

Oncology Research 2023年第2期31卷 125-139页

作者： XUELIANG WU SHAOYU GUAN YONGGANG LU JUN XUE XIANGYANG YU QI ZHANG XIMO WANG TIAN LI Department of Gastrointestinal Surgery Tianjin Medical University Nankai HospitalTianjin300100China 93868 Troop of the Chinese People’s Liberation Army Yinchuan750021China Clinical Laboratory Hebei General HospitalShijiazhuang050051China Department of General Surgery The First Affiliated Hospital of Hebei North UniversityZhangjiakou075000China Tianjin Key Laboratory of Acute Abdomen Disease Associated Organ Injury and ITCWM Repair Institute of Integrative Medicine for Acute Abdominal DiseasesIntegrated Chinese and Western Medicine HospitalTianjin UniversityTianjin300100China School of Basic Medicine Fourth Military Medical UniversityXi’an710032China

This research aimed to explore the influence of Src homology-2 containing protein tyrosine phosphatase(SHP-2)on the functions of tyrosine kinase receptors with immunoglobulin and EGF homology domains 2(tie2)-expressing monocyte/macrophages(TEMs)and the influence of the angiopoietin(Ang)/tie2-phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt)/mammalian target of rapamycin(mTOR)(Ang/tie2-PI3K/Akt/mTOR)signaling pathway on the tumor microvascular remodeling in an immunosuppressive microenvironment.In vivo,SHP-2-deficient mice were used to construct colorectal cancer(CRC)liver metastasis models.SHP-2-deficient mice had significantly more metastatic cancer and inhibited nodules on the liver surface than wild-type mice,and the high-level expression of p-tie2 was found in the liver tissue of the macrophages’specific SHP-2-deficient mice(SHP-2MACKO)+planted tumor mice.Compared with the SHP-2 wild type mice(SHP-2WT)+planted tumor group,the SHP-2MAC-KO+planted tumor group experienced increased expression of p-tie2,p-PI3K,p-Akt,p-mTOR,vascular endothelial growth factor(VEGF),cyclooxygenase-2(COX-2),matrix metalloproteinase 2(MMP2),and MMP9 in the liver tissue.TEMs selected by in vitro experiments were co-cultured with remodeling endothelial cells and tumor cells as carriers.It was found that when Angpt1/2 was used for stimulation,the SHP-2MAC-KO+Angpt1/2 group displayed evident increases in the expression of the Ang/tie2-PI3K/Akt/mTOR pathway.The number of cells passing through the lower chamber and the basement membrane and the number of blood vessels formed by cells compared with the SHP-2WT+Angpt1/2 group,while these indexes were subjected to no changes under the simultaneous stimulation of Angpt1/2+Neamine.To sum up,the conditional knockout of SHP-2 can activate the Ang/tie2-PI3K/Akt/mTOR pathway in TEMs,thereby strengthening tumor micro angiogenesis in the microenvironment and facilitating CRC liver metastasis.

关键词： SHP-2 tie2 PI3K Akt/mTOR signaling Colorectal cancer Liver metastasis Macrophages

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tie2在口腔鳞状细胞癌中的表达及其对细胞增殖、迁移及上皮-间充质转化过程的影响

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四川大学学报（医学版） 2023年第2期54卷 342-349页

作者：郑珉黄怡费伟沈阳聂雄高明玉温州医科大学附属舟山医院口腔科舟山316004 四川省医学科学院·四川省人民医院口腔科成都610072 成都市第七人民医院口腔科成都610044 川北医学院口腔医学院南充637000

目的研究酪氨酸激酶受体2(tyrosine kinase receptor 2, tie2)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)中的表达情况及其对细胞增殖、迁移及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)过程的影响。方法采用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)检测tie2在OSCC组织与正常口腔黏膜组织中的表达。Western blot检测DOK细胞及OSCC细胞株中tie2的表达,选取tie2高表达细胞株作为实验株。将沉默tie2的慢病毒载体成功转染至实验株用于后续实验。CCK-8及克隆形成实验检测细胞增殖、克隆能力;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移能力;激光共聚焦显微镜检测细胞骨架纤丝状肌动蛋白(F-actin)重塑能力及上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(Ncadherin)的表达;Western blot检测EMT相关标志性蛋白E-cadherin、N-cadherin、波形蛋白(vimentin)的表达以及蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)、胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)的表达。结果 IHC结果显示:OSCC组tie2阳性率(74.5%)高于对照组(19.4%)(Ptie2在HSC-4及SCC-9细胞株呈现高表达,慢病毒shRNA-162组沉默效果最好,作为实验组并应用于后续实验。与对照组相比,实验组细胞的增殖、克隆及迁移能力明显降低,细胞骨架F-actin绿色荧光强度降低,细胞前缘丝状伪足数量减少、长度变短;E-cadherin的表达明显增加,Ncadherin、vimentin的表达明显降低。p-AKT及p-ERK蛋白表达降低,AKT及ERK蛋白的表达增加。结论 tie2在大多数OSCC中呈高表达,沉默tie2能通过调控AKT及ERK信号通路抑制OSCC细胞增殖克隆迁移能力,抑制F-actin重塑,改变其EMT相关标志性蛋白的表达,提示tie2可能参与了OSCC的生长、转移及EMT过程。

关键词： tie2 口腔鳞状细胞癌 ERK AKT 增殖迁移上皮-间充质转化

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低雄激素通过抑制大鼠阴茎海绵体组织tie2的表达抑制勃起功能

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中华男科学杂志 2023年第8期29卷 675-681页

作者：刘家姜睿西南医科大学附属医院泌尿外科西南医科大学公共实验技术中心四川泸州646000

目的:研究雄激素是否通过富含内皮的外膜内皮细胞激酶2(tie2)/磷酸激酶(AKT)调控大鼠阴茎海绵体组织内皮一氧化氮合酶(eNOS)的表达,并影响阴茎勃起功能。方法:将8周龄雄性SD(Sprague Dawley)大鼠随机分为6组(n=6):假手术组、去势组、睾... 详细信息

目的:研究雄激素是否通过富含内皮的外膜内皮细胞激酶2(tie2)/磷酸激酶(AKT)调控大鼠阴茎海绵体组织内皮一氧化氮合酶(eNOS)的表达,并影响阴茎勃起功能。方法:将8周龄雄性SD(Sprague Dawley)大鼠随机分为6组(n=6):假手术组、去势组、睾酮替代组(去势1 d后隔日1次丙酸睾酮3 mg/kg皮下注射)、假手术+tie2转染组(去势术后4周大鼠阴茎海绵体注射20 ul携带tie2基因的慢病毒,滴度1×10^(8)TU/ml)、去势+tie2转染组、去势+空载体组。去势术后5周,测定各组大鼠的最大阴茎海绵体内压与平均动脉压比值(ICPmax/MAP)、血清睾酮(T)水平、一氧化氮(NO)含量,以及tie2、AKT、P-AKT、eNOS、P-eNOS在各组大鼠阴茎海绵体中的表达水平。结果:去势组大鼠的T、阴茎海绵体组织中NO的含量和ICPmax/MAP明显低于假手术组大鼠(Ptie2过表达慢病毒转染后,去势+tie2组大鼠的NO含量及ICPmax/MAP明显高于去势组大鼠(Ptie2的表达及P-AKT/AKT和P-eNOS/eNOS明显低于假手术组大鼠,去势+tie2组大鼠的tie2的表达及P-AKT/AKT和P-eNOS/eNOS明显高于去势组大鼠。结论:低雄激素可能通过抑制tie2/AKT/eNOS信号通路,降低阴茎海绵体组织P-eNOS/eNOS和NO浓度,抑制阴茎勃起。上调阴茎组织海绵体组织中tie2的表达可以提高P-AKT/AKT、P-eNOS/eNOS和NO浓度,改善ED。

关键词：雄激素勃起功能障碍蛋白激酶 tie2 内皮型一氧化氮合酶大鼠

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Blockade of angiopoietin-2/tie2 signaling pathway specifically promotes inflammation-induced angiogenesis in mouse cornea

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International Journal of Ophthalmology(English edition) 2017年第8期10卷 1187-1194页

作者： Zhi-Xin Yan Yi Luo Ning-Fei Liu Department of Plastic & Burn Surgery Affiliated Hospitalof Jiangsu University Zhenjiang 212001 Jiangsu ProvinceChina Lymphology Center of Department of Plastic & ReconstructiveSurgery Shanghai Ninth People's Hospital Shanghai JiaoTong University School of Medicine Shanghai 200011 China

AIM： To investigate angiopoietin-2 （Ang-2）/tie2 signaling pathway involving in inflammatory angiogenesis. METHODS： Three interrupted 11-0 nylon sutures were placed into the corneal stroma of BALB/c mice （6wk old） to induce inflammatory neovascularization. Expression of Ang-2 and tie2 protein on neovascularization were examined by immunofluorescence. The dynamic expression of Ang-2 mRNA on neovascularization was examined by quantitative real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction （RT-PCR）. Finally, the mouse model of suture- induced corneal neovascularization was used to assess the role of Ang-2/tie2 signaling pathway in inflammatory angiogenesis by systemic application of L1-10, an Ang-2 specific inhibitor. Mouse corneal hemangiogenesis were evaluated by whole mount immunofluorescence. RESULTS： Both Ang-2 and tie2 were expressed on newly generated blood vessels in inflammatory cornea. Ang-2 expression was gradually upregulated around 2wk following injury, which was concurrent with an increased number of blood vessels. Blockade of Ang-2/tie2 signaling pathway obviously promoted angiogenesis in inflammatory cornea. CONCLUSION： Ang-2/tie2 signaling pathway seems to play an important role during angiogenesis in inflammatory cornea. This may open new therapeutic applications in pathological processes such as corneal graft survival, wound healing and carcinogenesis.

关键词： angiogenesis angiopoietin-2 tie2 inflammation

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tie2-expressing monocytes/macrophages promote cerebral revascularization in peri-infarct lesions upon ischemic insult

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Signal Transduction and Targeted Therapy 2021年第9期6卷 2618-2620页

作者： Yuqiao Sheng Xixi Duan Yanru Liu Feng Li Shengli Ma Xiaoping Shang Xiao Wang Yangyang Liu Rui Xue Zhihai Qin Medical Research Center The First Affiliated Hospital of Zhengzhou UniversityZhengzhouHenanChina Department of Neurology The First Affiliated Hospital of Zhengzhou UniversityZhengzhouHenanChina Biotherapy Center The First Affiliated Hospital of Zhengzhou UniversityZhengzhouHenanChina Department of Emergency The First Affilioted Hospital of Zhengzhou UniversityZhengzhouHenanChina Department of Medical Records The First Affiliated Hospital of Zhengzhou UniversityZhengzhouHenanChina Department of Magnetic Resonance The First Affiliated Hospital of Zhengzhou UniversityZhengzhouHenanChina

Dear Editor,Strokes cause 5.8 million deaths each year.Among these victims,~30% are from China1.Acute ischemic stroke(AIS)is the most prevalent subtype of strokes.Although drugs can alleviate the symptoms,the recoveries of functional vessels within ischemic areas are the critical factor determining the prognosis of patients suffering from AIS2.Nevertheless,the mechanisms involved in cerebral revascularization remain largely unknown.

关键词： cerebral tie2 drugs

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Effect of Bushen Yiqi Huoxue Recipe on Placental Vasculature in Pregnant Rats with Fetal Growth Restriction Induced by Passive Smoking

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2013年第2期33卷 293-302页

作者：陈镇燕李婧黄光英 Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Tongji Hospital Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology

Interactions of vascular endothelial growth factor （VEGF） with receptors VEGFR1/Fltl and VEGFR2/Flk1, and those of angiopoietins （Ang-1, Ang-2） with receptor tie2 play important roles in placental angiogenesis. This study investigated vascular morphology and expression of these angiogenic factors in rat placenta on the day 15, 18, 21 of gestation （D 15, D 18 and D21）. The rats were randomly assigned into 3 groups： normal group, model group [fetal growth restriction （FGR） model], and Bushen Tqi Huoxue （BYHR） recipe treatment group （BYHR group, the pregnant rats with FGR were treated with BYHR recipe）. Morphological analysis indicated that during initial villous formation, fetal nucle- ated erythrocytes （FNEs） appeared in maternal blood sinus （MBS）. Subsequently, FNEs were sur- rounded by endothelial cells to form fetal capillary （FC） and then by trophoblast cells to form villi. As pregnancy proceeded, FC density increased progressively with increasing endothelial identification staining （EIS） in normal and BYHR groups. Whereas, villous formation was suppressed, normal in- crease in FC density was impaired and EIS was weakened in model group. Quantitative PCR analysis showed that VEGF and Flkl mRNA increased over gestation in all groups, indicating that VEGF might play a pivotal role in FC growth during late gestation. VEGF mRNA was increased on D15, while de- creased on D21 in model group as compared with normal group and BYHR group. Immunohistochemi- cally, Ang-2 protein was highly expressed in FNEs, gradually disappeared as villi matured, and decreased over gestation in all groups, indicating that Ang-2 might play a pivotal role in villous formation, which was further supported by decreased Ang-2 mRNA and protein expression in model group on D 15. Ang-1 mRNA, tie2 mRNA and Ang-1/Ang-2 ratio increased from D15 to D18 in all groups as placenta matured. Ang-1 mRNA, tie2 mRNA and Ang-1/Ang-2 ratio were decreased on D18 in model group as compared with normal and BYHR groups, indicating delayed maturity of FGR placent

关键词： fetal growth restriction passive smoking placental angiogenesis vascular endothelial growth factor fms-like tyrosine kinase-1 fetal liver kinase-1 angiopoietin-1 angiopoietin-2 tie2 Bushen Yiqi Huoxue recipe

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tie2的表达在口腔鳞状细胞癌增殖迁移及EMT过程中的作用

Tie2的表达在口腔鳞状细胞癌增殖迁移及EMT过程中的作用

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作者：聂雄川北医学院

学位级别：硕士

目的:采用RNA干扰技术研究靶向沉默tie2基因在口腔鳞癌细胞增殖、迁移及EMT过程中的作用。方法:1.WB检测DOK细胞及不同口腔鳞癌细胞株(HSC-4,SCC-9,Cal-27,HSC-3)中的tie2表达情况,选取tie2表达较高的鳞癌细胞系(HSC-4,SCC-9)作为实验... 详细信息

目的:采用RNA干扰技术研究靶向沉默tie2基因在口腔鳞癌细胞增殖、迁移及EMT过程中的作用。方法:1.WB检测DOK细胞及不同口腔鳞癌细胞株(HSC-4,SCC-9,Cal-27,HSC-3)中的tie2表达情况,选取tie2表达较高的鳞癌细胞系(HSC-4,SCC-9)作为实验细胞株。2.将沉默tie2基因的ShRNA重组慢病毒载体转染至HSC-4,SCC-9中,WB检测转染成功后tie2沉默效果,筛选出沉默效果较好的稳定转染细胞株。CCK-8法检测细胞增殖能力;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;单细胞克隆培养检测细胞的克隆形态;细胞划痕和Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;激光共聚焦显微镜检测细胞骨架F-actin重塑能力。3.WB 检测 EMT 相关标志性蛋白 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达;激光共聚焦显微镜检测E-cadherin、N-cadherin的表达。结果:1.tie2在四种OSCC细胞株中均有所表达,与DOK细胞相比,其中HSC-4中tie2的表达量最高,其次是SCC-9(P2.将重组慢病毒载体(tie2-ShRNA-161,tie2-ShRNA-162,tie2-ShRNA-163)及对照序列(tie2-ShRNA-429)转染至 HSC-4,SCC-9中,WB结果显示:ShRNA-162组中tie2的表达最低,明显低于ShRNA-429对照组(P2组作为实验组并应用于后续实验。3.CCK-8实验结果显示:与对照组相比,实验组HSC-4,SCC-9细胞的增殖能力均明显降低(P2周后HSC-4、SCC-9细胞均可见3种不同形态的克隆形成:全克隆(holoclone)、部分克隆(meroclone)、亚克隆(paraclone);相比对照组,实验组holoclone的克隆形成率明显下降,paraclone的克隆形成率明显增加(Ptie2的表达能抑制HSC-4,SCC-9细胞增殖克隆迁移能力。2.沉默tie2的表达会明显抑制HSC-4,SCC-9细胞骨架F-actin的重塑,表明tie2表达可能在OSCC细胞骨架F-actin重塑中发挥重要作用。3.沉默tie2的表达可以改变HSC-4,SCC-9细胞EMT相关标志性蛋白的表达,提示tie2可能参与了 OSCC的上皮间充质转化过程。

关键词： tie2 口腔鳞状细胞癌增殖迁移上皮间充质转化

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tie2表达在结直肠癌中的临床意义及其预后价值

Tie2表达在结直肠癌中的临床意义及其预后价值

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作者：郑慧芬皖南医学院

学位级别：硕士

目的:目前,结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是全球范围内发病率位居第三的恶性肿瘤,也是全球癌症相关性死亡中居第二位。提高CRC的早期诊断率与早期治疗效果是改善预后的关键。目前,抗血管内皮生长因子(Vascular Endothlial Growth Fac... 详细信息

目的:目前,结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是全球范围内发病率位居第三的恶性肿瘤,也是全球癌症相关性死亡中居第二位。提高CRC的早期诊断率与早期治疗效果是改善预后的关键。目前,抗血管内皮生长因子(Vascular Endothlial Growth Factor,VEGF)治疗应用于临床,CRC患者的总生存期(Overall Survival,OS)、无进展生存期(Progression-Free Survival,PFS)也有了显著的改善,然而在抗VEGF治疗过程中往往会出现继发性的耐药,在临床工作中识别并选择抗VEGF最佳作用时间是非常关键的。因此,本研究通过探讨酪氨酸激酶受体2(Tunica interna endothelial cell receptor 2,tie2)在CRC组织与外周血中的表达情况探究tie2在CRC中的预后预测价值以及抗VEGF治疗的疗效预测价值。方法:回顾性纳入2017年1月-2017年12月91例于弋矶山医院行结直肠癌根治术的患者术后肿瘤组织蜡块以及距癌边缘约5cm处的癌旁组织蜡块,由免疫组织化学染色实验得出蜡块中tie2表达水平,根据肿瘤组织中tie2染色情况分为高低表达两组,随访得出患者的无病生存期(Disease Free Survival,DFS)、OS,使用Kaplan-Meier方法、COX回归模型等进行预后分析;前瞻性纳入2021年3月-2022年5月弋矶山医院肿瘤内科接受贝伐株单抗联合化学治疗的35例晚期CRC患者的外周血样本,由酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)得出外周血中tie2浓度,使用ROC曲线计算外周血中tie2浓度的最佳截断值,根据截断值将样本分为高低浓度两组,使用Kaplan-Meier方法比较两组PFS,PFS的截止日期至2022年11月15日。P值tie2蛋白在癌旁组织中表达较低,而在癌组织中高表达。2、tie2的表达高低与临床分期之间存在一定的相关性(Ptie2低表达的患者术后具有更良好的DFS以及OS(DFS P=0.0055,OS P=0.0079)。4、单因素Cox回归分析结果表明:淋巴结受累、临床分期较晚以及癌组织中tie2高表达是CRC患者DFS的不良预后因素(P均tie2表达高(P均tie2表达水平是影响患者DFS以及OS的独立预后因素(Ptie2浓度的最佳截断值,最佳截断值为499.1525768U/L。7、Kaplan-Meier生存分析表明:低tie2浓度的患者具有更长的PFS(P=0.0355)。结论:在组织中,tie2表达水平与CRC患者预后密切相关;在外周血中,tie2浓度与晚期CRC患者使用贝伐联合化疗的疗效相关。

关键词：结肠癌 tie2 VEGF 生物标志物

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化瘀通络灸对VD大鼠学习记忆能力及海马区Ang-1、Ang-2/tie2蛋白表达的影响

化瘀通络灸对VD大鼠学习记忆能力及海马区Ang-1、Ang-2/Tie2蛋白...

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作者：刘平安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:1.通过比较各组大鼠治疗前后学习记忆成绩的变化,验证化瘀通络灸治疗VD的疗效。2.通过比较化瘀通络灸干预后VD大鼠海马区Ang-1、Ang-2/tie2蛋白表达的变化,探讨化瘀通络灸治疗VD的作用机制,为临床治疗VD提供理论依据。方法:1.2-VO... 详细信息

目的:1.通过比较各组大鼠治疗前后学习记忆成绩的变化,验证化瘀通络灸治疗VD的疗效。2.通过比较化瘀通络灸干预后VD大鼠海马区Ang-1、Ang-2/tie2蛋白表达的变化,探讨化瘀通络灸治疗VD的作用机制,为临床治疗VD提供理论依据。方法:1.2-VO法建立VD大鼠模型,并进行模型鉴定;2.简单随机分组法分为3组:模型组、艾灸组和西药组,另设假手术组,每组各12只,治疗3个疗程后,检测各组大鼠学习记忆成绩,并进行组间比较。3.采用免疫组化法检测VD大鼠海马区Ang-1、Ang-2及受体tie2蛋白阳性表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测VD大鼠海马区Ang-1、Ang-2及受体tie2蛋白表达量,并进行组间比较。结果:1.大鼠模型复制后3天,水迷宫试验检测结果:与假手术组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期和第一次穿越平台时间均延长、穿越平台次数减少（P＜0.01）。表明:VD大鼠模型复制成功。2.治疗后,水迷宫试验检测结果:逃避潜伏期和第一次穿越平台时间:模型组逃避潜伏期和第一次穿越平台时间比假手术组延长（P＜0.01）;艾灸组与西药组逃避潜伏期和第一次穿越平台时间比模型组缩短（P＜0.01）;艾灸组和西药组两组比较,逃避潜伏期差异无统计学意义（P＞0.05）。穿越平台次数:模型组穿越平台次数比假手术组减少（P＜0.01）;艾灸组与西药组穿越平台次数比模型组增加（P＜0.01）;艾灸组与西药组穿越平台次数比较差异无统计学意义（P＞0.05）。3.免疫组化法检测海马区Ang-1、Ang-2/tie2蛋白阳性表达结果:各组大鼠海马区Ang-1、Ang-2/tie2蛋白阳性表达:模型组Ang-1、Ang-2/tie2蛋白阳性表达比假手术组明显减少（P＜0.01）;艾灸组与西药组Ang-1、Ang-2/tie2蛋白阳性表达比模型组均增多（P＜0.05）;艾灸组与西药组组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。4.蛋白免疫印迹法检测海马区Ang-1、Ang-2/tie2蛋白表达量结果:各组大鼠海马区Ang-1、Ang-2/tie2蛋白表达量比较结果:模型组Ang-1、Ang-2/tie2蛋白表达比假手术组明显减少（P＜0.01）;艾灸组与西药组Ang-1、Ang-2/tie2的蛋白表达比模型组均明显增加（P＜0.05）;艾灸组与西药组Ang-1、Ang-2/tie2蛋白的组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:1.化瘀通络灸能够提高VD大鼠的学习记忆成绩,是治疗VD的一种有效方法;2.化瘀通络灸能够上调VD大鼠海马区Ang-1、Ang-2及受体tie2蛋白的表达。

关键词：化瘀通络灸血管性痴呆血管新生 Ang-1 Ang-2 tie2

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血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立(英文)

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Acta Genetica Sinica 2005年第9期32卷 909-915页

作者：李文龙程萱谭晓红张继帅孙岩松陈林杨晓军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学研究室北京100071 军事医学科学院实验动物中心北京100071 第三军医大学附属大坪医院全军战创伤中心实验室重庆400042

血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了tie2-Cre转基因小鼠,利用tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细... 详细信息

血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了tie2-Cre转基因小鼠,利用tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细胞中表达。经基因组PCR和SouthernBlot鉴定有6只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为11%。为了验证Cre重组酶的剪切活性和表达组织分布,我们将tie2-Cre转基因小鼠分别与Smad4条件基因打靶小鼠和报告小鼠ROSA26交配。tie2-Cre;Smad4Co/+小鼠的多个组织的基因组DNA的PCR结果显示,Cre重组酶在所有包含血管内皮细胞的组织中表达并能介导LoxP间的重组。tie2-Cre;ROSA26双转基因胚胎LacZ染色结果显示,Cre重组酶在所有被检测组织的血管内皮细胞中特异性表达。因此,tie2-Cre转基因小鼠可作血管内皮细胞谱系分析和在血管内皮细胞进行条件基因打靶的理想工具小鼠。

关键词： tie2 血管内皮细胞 Cre-loxP 转基因小鼠 Cre重组酶特异表达基因组DNA Cre-LoxP Southern 组织分布

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